脂多糖刺激下骨髓间充质干细胞分泌的外泌体对Ly6C单核巨噬细胞亚群的影响

目的探索炎症刺激下,骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)产生的外泌体对小鼠淋巴抗原6C高表达(Ly6C^(high))单核巨噬细胞和Ly6C^(low)两个亚群比例的影响。方法梯度离心法分离BMSCs,鉴定其形态、表面标记及成脂诱导分化能力。脂多糖处理BMSCs 48h,收集上清并提取外泌体,采用Western blot法、透射电镜以及粒径分析鉴定外泌体。磁珠分选小鼠腿骨中的单核巨噬细胞,与外泌体共培养24 h后,LPS刺激48 h,流式细胞术检测Ly6C亚群变化。ELISA检测细胞上清炎症因子的变化。结果 BMSCs表达CD44、CD90等,不表达CD34、CD45,并有成脂分化能力。外泌体表达CD63,粒径大小为(82.4±3.70)nm,LPS刺激下BMSCs产生较多的外泌体(P<0.01)。与LPS组相比,外泌体可以使Ly6C^(high)单核细胞比例上升(P<0.01),Ly6C^(high)巨噬细胞比例下降(P<0.05),且LPS刺激BMSCs产生的外泌体比正常BMSCs产生的外泌体的作用更加明显(P<0.05)。促炎因子IL-6水平也明显上调(P<0.05)。结论 BMSCs产生的外泌体可以改变Ly6C^(high)单核巨噬细胞亚群比例,为BMSCs的临床治疗提供了新的靶点。

客观结构化临床考试在医药院校药理学教学中的应用

药理学作为基础医学与临床医学的桥梁,掌握药物特性与作用机理是临床合理用药的前提,为实现基础教学与临床应用相适应,药理学教学模式改革应融入临床思维。客观结构化临床考试(OSCE)作为评估学生未来职业所需的专业知识和实践技能的手段,已在多个国家医药相关的课程教学中有所应用。通过对OSCE的教案撰写、教学和考核模式、评分标准和课后总结反馈进行描述,文章旨在探索这种模式在药理学教学中应用的可行性,以期为国内医药院校药理学教学方法革新提供理论依据,进一步促进我国医药教育的发展。

缺氧心肌细胞来源外泌体对Gli1^+细胞纤维化表型转换的作用机制

目的 观察缺氧心肌细胞来源外泌体对Gli1 +细胞纤维化过程的影响,并探讨其可能的机制。方法 分离Gli1 +细胞和SD乳鼠心肌细胞。心肌细胞分别进行常氧和缺氧培养,收集培养基并提取外泌体,用透射电镜、Nanosight、Western blot等方法对其鉴定。两种外泌体分别与Gli1 +细胞共培养。RT-qPCR法检测这两种外泌体并对比分析,明确其中起关键调控作用的miRNA。转染miRNA模拟物观察Gli1 +细胞中纤维化相关蛋白的表达水平。结果 Gli1 +细胞强阳性表达CD29、CD105和Gli1,不表达CD31、CD34和CD45。心肌细胞表达cTnT和α-Actinin,其外泌体直径约100 nm,并检测到Flotillin-1、Alix、HSP-70和CD63。缺氧处理外泌体中miR-223明显上调( P <0.01);Gli1 +细胞经缺氧外泌体和 miR-223 mimic处理,纤维化相关的蛋白α-SMA( P <0.01, P <0.05)、DDR-2( P <0.01, P <0.01)和collagen I( P <0.05, P <0.01)的表达都明显升高。结论 缺氧心肌细胞外泌体能促进Gli1 +细胞内纤维化相关蛋白的表达,使其向纤维化表型转换,这一作用可能与外泌体中高表达的miR-223有关。

脂多糖刺激的骨髓间充质干细胞来源外泌体改善小鼠心肌梗死后炎症和纤维化

目的:探讨脂多糖(LPS)刺激下的骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的外泌体对小鼠心肌梗死(MI)后的治疗作用。方法:流式成像细胞分析术鉴定BMSCs的表面标记分子,油红O和茜素红染色于镜下观察成骨成脂分化能力。LPS刺激BMSCs48h,提取细胞培养上清外泌体,用透射电镜和粒度分析仪捕捉其形态和粒径大小,流式细胞术和Western blot检测特异性表面标记分子及蛋白表达。建构小鼠MI模型并予以外泌体心脏局部注射,利用心脏超声、组织病理切片和PCR评价治疗结果。结果:分离的BMSCs表达CD29、CD44、CD90、CD73、CD105,未表达HLA-DR、CD14、CD34、CD45,具有成骨成脂分化能力。Western blot检测到外泌体表达Alix、HSP70、Flotillin-1蛋白,流式成像仪检测到外泌体膜表面的CD63、CD9和CD81标记分子,粒径众数为69.2nm。LPS刺激下BMSCs产生的外泌体注射小鼠心脏后,与PBS注射的MI对照组比较,心脏超声评价7天和28天的射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)都显著增大(P<0.01,P<0.05),在第28天的舒张末期容积(LVEDV)和收缩末期容积(LVESV)均显著减小(P<0.05),Masson染色显示纤维化面积减小(P<0.01),PCR检测到炎症因子IL-6、IL-1β、转化生长因子β(TGF-β)和趋附因子CCL2表达减少,CX3CL1表达增多,术后第14天最为明显。结论:LPS刺激的BMSCs来源外泌体可以改善小鼠MI后心肌收缩功能和纤维化,降低炎症因子表达量。

维迪西妥单抗与特瑞普利单抗联用致心肌炎

1例68岁女性浸润性尿路上皮癌患者术后接受免疫治疗(维迪西妥单抗120 mg+特瑞普利单抗240 mg静脉滴注、第1天,14 d为1个周期)。首次用药后19 d,患者诉腰部肌肉酸痛,实验室检查示肌酸激酶(CK)1079 U/L,CK⁃MB 33 U/L。暂停第2个周期免疫治疗,并予泼尼松20 mg口服、1次/d。5 d后,患者出现胸闷,实验室检查示CK 3366 U/L,CK⁃MB 91 U/L,乳酸脱氢酶518 U/L,肌红蛋白1282μg/L,高敏肌钙蛋白T 0.068μg/L,氨基末端脑利钠肽前体148 ng/L。结合心脏彩色多普勒超声检查结果,考虑为维迪西妥单抗和特瑞普利单抗联用所致心肌炎,将泼尼松换为甲泼尼龙160 mg静脉滴注、1次/d。患者上述实验室检查指标逐渐下降,但心电图检查示异位心律,给予胺碘酮等治疗。甲泼尼龙静脉滴注11 d后,改为甲泼尼龙片20 mg口服、1次/d(逐渐减量并停用)。停用激素后4 d复查,患者实验室指标和心电图未见异常。

某三甲专科医院住院患者自备药管理模式分析与探讨

目的根据某三甲专科医院住院患者自备药的使用情况,探讨自备药安全管理模式,为住院患者自备药的临床应用管理提供参考。方法收集整理某三甲专科医院2019年1~12月使用自备药的住院患者及其药品信息,分析药品种类及使用情况,归纳总结自备药安全管理模式要点。结果归纳分析某三甲专科医院自备药品共17类547个,其中使用最多的是心血管系统药共106个,占19.38%,其次是呼吸系统和内分泌系统药分别为62个和61个,占11.33%和11.15%,所有自备药均按照医院制度统一管理,并按医嘱使用。结论某三甲专科医院自备药安全管理模式行之有效,但为进一步提高工作效率,建议建立自备药信息化管理系统。自备药种类繁多,为促进安全合理用药,建议开展药品安全教育,提高患者的药品质量安全意识和用药依从性。

新冠肺炎期间不同岗位药师心理状况调查及原因分析

目的对新冠肺炎期间不同岗位药师的心理健康状况进行调查,分析焦虑情绪来源,为后期的心理预防和干预提供参考依据。方法利用"问卷星"于2020年3月13~17日发放自拟调查问卷,对多家医院药师,包括门诊药师、住院药师、静配药师、临床药师和药事管理者进行心理评估。结果共收到有效问卷281份,其中临床药师焦虑情绪显著高于门诊药师和住院药师(P<0.05);门诊药师焦虑情绪分数与医院药学预防措施呈负相关(P<0.05)。结论新冠肺炎期间不同岗位药师存在焦虑情绪差异,建议相关部门加强心理预防和干预工作,提高药师的心理应对能力。

人工外泌体共递送siRNA和蛋白的递送系统的设计及体外评价

本文制备了人工外泌体,共传递蛋白和核酸,实现多组分药物高效安全共传递。采用阳离子脂质赋形剂二油酰基三甲基铵丙烷(dioleyl trimethylammonium propane, DOTAP)修饰聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylactic acidglycolic acid copolymer, PLGA)基质来设计优化的制剂,双乳化法制备包裹蛋白和核酸的PLGA/DOTAP纳米粒,再用逆相蒸发法制备最外层的膜结构,此膜结构由二棕榈酰磷脂酰胆碱(1, 2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine,DPPC)、二油酰磷脂酰胆碱(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DOPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(1,2-distearoylsn-glycero-3-phosphocholine, DSPC)、胆固醇及膜蛋白组成,通过超声分散和挤出的方式形成人工外泌体结构,并分析其物理特性和传递效果性质。结果表明,人工外泌体粒径约为156.13 nm,带负电荷(-18.23±0.57 mV),能高效共传递蛋白和siRNA,且siRNA能高效抑制目标基因Trim 28的表达。这说明人工外泌体模拟了外泌体结构,实现了多组分药物安全高效的共递送。

干细胞来源外泌体在心肌损伤修复中的作用

目前普遍认为干细胞在心肌损伤修复中的旁分泌作用是其发挥疗效的重要途径之一。外泌体是旁分泌的重要介质,是由细胞分泌的具有磷脂双分子层结构的囊性小泡,可以转运蛋白质、脂质和核酸分子到受体细胞,介导生理和病理条件下细胞间通讯。多种干细胞,包括胚胎干细胞、诱导多能干细胞、心脏祖细胞、间充质干细胞和心肌球细胞等来源的外泌体对受损心脏的保护作用已被广泛证实,其在心肌损伤修复中的治疗效果备受关注。本综述总结了目前关于不同干细胞来源的外泌体在心肌损伤修复研究中的最新进展,包括治疗潜力和作用机制。