二维液相色谱/双检测器法同时测定婴幼儿配方奶粉、米粉中维生素A、D_3和E的含量

建立了在线二维液相色谱同时快速测定婴幼儿配方乳品和婴幼儿米粉中维生素A、D3和E含量的方法。首先,选择超高效C18柱和聚合键合的C18键合相PHA柱分别作为一维和二维分离柱,采用反相色谱法在一维上以甲醇、水作为流动相,二维上以乙腈、异丙醇作为流动相。采用四元泵作为一维分析泵,完成维生素A、E的定量和维生素D3的净化;根据维生素D3在一维色谱柱上的保留时间,确定切割时间窗口并以在线SPE柱收集含有维生素D3的馏分,另一个二元泵将SPE柱中的维生素D3馏分带到二维色谱柱中,完成维生素D3的定量分析;整个过程由两套色谱泵带动的二维色谱系统中运行,过程自动化程度高;只采用一个六通阀切换,检测时间短,只需要10 min就可完全分离所有目标峰。在上述优化条件下测定了婴幼儿配方奶粉和婴幼儿配方米粉中3种维生素的含量。通过本方法检测得到维生素D3的加标回收率为90.1%~99.7%,并与国标方法测定结果进行比较分析,结果表明,维生素A、D3和E偏差均小与〈5%。表明该方法简单、快速、准确。

婴幼儿奶粉中亚麻酸、亚油酸、花生四烯酸和二十二碳六烯酸的测定

采用气相色谱法测定婴儿配方乳粉中亚麻酸(LA)、亚油酸(LNA)、花生四烯酸(AA)和二十二碳六烯酸(DHA)含量。试验结果表明:LA、LNA、AA和DHA分离效果较好,得到LA,LNA,AA和DHA的检出限分别为0.057、0.06、0.085和0.25μg/mL;其重复性在0.64%～5.46%之间,回收率在82.1%～105.7%之间。

柱前在线自动衍生-高效液相色谱法快速测定乳粉中牛磺酸

建立以邻苯二甲醛为衍生试剂测定乳粉中牛磺酸含量的高效液相色谱方法。标准品和样品在自动进样器中完成自动衍生反应后直接进入高效液相色谱系统进行分析，方法采用UltimateAQ—C18（2．1mm×100mm，3gm）为分析色谱柱，以乙腈和10mmol／L乙酸钠（pH4．2）作为流动相，柱温40℃，流速0．4mL／min。结果表明：在5～100μg／mL范围内牛磺酸线性关系良好，回归方程y=19．800x＋20．1764，相关系数为0．9997。样品加标回收率为97．33％～105．74％。本方法最低检测限（Rsm=3）为0．06mg／100g，最低定量限（Rs，N=10）为0．2mg／100g。本方法测定乳粉中牛磺酸含量重复性好、灵敏度高，且比国标检测方法操作简单，适用于乳粉中牛磺酸的常规分析检测。

16S rDNA在婴幼儿配方乳粉阪崎肠杆菌鉴定中的应用

选取近几年从婴幼儿配方乳粉生产过程环境及产品中收集、经国标GB/T 4789.40-2010检验和API20E鉴定为阪崎肠杆菌阳性的菌株16株,利用MicroSEQ 1D微生物鉴定系统进行16S rDNA基因测序分析,构建系统发育树,鉴定种属。结果显示,这16份经API20E鉴定为阪崎肠杆菌阳性的菌株,经16S rDNA基因测序证实,其中2份为梨形肠杆菌,1份为克氏柠檬酸杆菌,其余13份样品均为阪崎肠杆菌,且与数据库中标准菌株的同源性达到99 5%以上。16S rDNA基因测序方法在婴幼儿配方乳粉企业进行阪崎肠杆菌鉴定和溯源方面具有广阔的前景。

免疫亲和柱净化/高效液相色谱-串联质谱法检测婴幼儿配方乳粉中生物素含量

建立了免疫亲和柱净化/高效液相色谱串联质谱法测定婴幼儿配方乳粉中生物素的方法。样品用磷酸盐缓冲液溶解，并通过生物素免疫亲和柱净化后，采用Ultimate AQ-C18（2.1 mm×100 mm，3 μm）色谱柱分离，以甲醇-0.1%甲酸（30∶70）为流动相，进样量为5.0 μL，流速为0.3 mL/min，柱温为30 ℃，并经电喷雾电离串联质谱在多离子反应监测（MRM）模式下进行测定，定量子离子为227.2，定性子离子为227.2、96.9，碰撞能量分别为10、30 V。结果显示，生物素在0.1-1.0 μg/mL范围内线性关系良好，方法检出限为20.3 μg/kg。对空白试样进行3个浓度水平的加标回收实验，测得加标回收率为92.7%-98.5%，相对标准偏差为1.7%-1.9%。该方法具有样品处理简单、灵敏度高、重现性好、分析时间短等优点，可以满足婴幼儿配方乳粉中生物素含量的测定要求。

多点位分型技术在婴幼儿配方乳粉中克罗诺杆菌的鉴定与溯源中的应用

克罗诺杆菌属是肠杆菌的独立新属,即阪崎肠杆菌属。传统的分子分型方法如随机扩增多态性DNA标记(RAPD)不能将克罗诺杆菌鉴定到种,且辨识度较低、重复性不高、容易混淆,而近几年发展较快且更高效快捷的分型方法多位点序列分型(MLST),能清晰地分辨出克罗诺杆菌每个基因的差别。对婴儿配方乳粉工厂的克罗诺杆菌属进行分子分型研究,并对克罗诺杆菌属的鉴定和溯源,在婴幼儿配方乳粉企业在克罗诺杆菌属在监控、预警、控制方面具有重要意义。选取具有代表性的婴儿配方乳粉中分离菌株24株,经API20E试剂条鉴定为克罗诺杆菌属,再经过MLST分型找出其中有22株有克罗诺杆菌ST分型,其中19株属于C.sakazakii,2株属于C.turicensis,1株属于C.dublinensis。通过构建进化树能清楚地识别进化关系和亲缘关系,能够很好地定种和追根溯源。