我国部分地区黄羽肉鸡布氏艾美耳球虫感染情况调查

为了解我国黄羽肉鸡布氏艾美耳球虫感染情况,研究从16个省份的规模化黄羽肉鸡场收集不同日龄鸡粪便样品共696份,使用基于鸡球虫序列特征扩增区(SCAR)标记筛选基因的布氏艾美耳球虫特异性引物及探针,采用荧光定量PCR进行检测和鉴定。结果显示,布氏艾美耳球虫的总感染率为34.20%,16个省(市、区)养鸡场均存在布氏艾美耳球虫感染,且不同地区感染率差异显著(P<0.05)。不同日龄鸡群布氏艾美耳球虫的感染率差异不显著(P>0.05),40日龄以上鸡群感染率相对较高;双层平养模式鸡群感染率明显高于单层平养的鸡群。研究结果提示,目前我国各地区黄羽肉鸡布氏艾美耳球虫感染率较高,不同地区间总体感染率差异显著,不同日龄黄羽肉鸡群的感染率差异不显著,应在养殖过程中全程防控,且对双层平养鸡群进一步加强防控措施。

1日龄雏鸡喷淋免疫球虫病疫苗与未免疫鸡群混养后的群体免疫效果研究

为研究球虫病疫苗喷淋免疫接种1日龄雏鸡的免疫效果以及混入少量未免疫鸡后的群体免疫效果,试验采用喷淋免疫方式对1日龄麻黄鸡进行鸡球虫病四价活疫苗免疫接种(喷淋免疫组),混入10%的未免疫鸡(混养免疫组)标记后与喷淋免疫组进行地面平养混养,并设不免疫不攻虫的空白对照组和不免疫仅攻虫的阳性对照组。喷淋免疫组、混养免疫组经垫料中球虫生活史循环的自然首免、二免、三免后和阳性对照组于32日龄时分别进行混合强毒虫株53万/只(含堆型13万、柔嫩17万、巨型23万)和毒害强毒虫株12万/只攻虫。检测各组免疫后的卵囊产量、卵囊检出率和疫苗反应以及攻虫后的增重和肠道病变计分情况。结果显示,喷淋免疫组免疫后第6~8天的卵囊检出率为80%~95%;经自然二免循环后,喷淋免疫组和混养免疫组的卵囊检出率均达到100%,排卵高峰期和卵囊产量趋于同步,喷淋免疫组平均肠道病变记分在0~0.1。攻虫后,喷淋免疫组(攻混合强毒虫株的为85.8%、攻毒害强毒虫株的为99.5%)和混养免疫组(99.9%、101.7%)的相对增重率远高于阳性对照组(9.6%、32.2%)。喷淋免疫组混合强毒株攻虫后十二指肠、盲肠及毒害强毒株攻虫后的小肠中段肠道病变记分显著低于阳性对照组(P<0.05)。以上结果表明,1日龄雏鸡喷淋接种球虫疫苗可建立良好的免疫保护,掺入10%未免疫的鸡也能通过自然循环建立足够的免疫保护力。

环丙氨嗪和甲基吡啶磷在猪场联合灭蝇的效果评估

为了探索猪场灭蝇的有效手段,完善猪场生物安全体系,本试验选取某规模化猪场8栋猪舍,饲喂环丙氨嗪以控制粪便中家蝇幼虫孳生,在猪舍内喷雾和撒布甲基吡啶磷以杀灭成蝇。分析和比较用药前、后家蝇幼虫的发育情况和死亡率,以及家蝇成虫的密度,以评估2种药物在猪场联合使用的灭蝇效果。结果显示,给猪饲喂环丙氨嗪前(第1、4天)所采集粪便中的家蝇幼虫发育过程完整,死亡率较低,分别为32.7%和12.3%,用药后(第7、10、13、16、19、21天),所采集粪便中的幼虫发育停滞,死亡率均达100%;甲基吡啶磷喷雾用药5 d后,家蝇平均密度为1.88只/(张·时),与不用药对照[平均密度2.72只/(张·时)]相比下降了30.98%;改用撒药5 d后,家蝇平均密度为0.11只/(张·时),与喷雾用药相比下降了94.12%。结果表明,环丙氨嗪和甲基吡啶磷联合使用的灭蝇方案起到良好的效果。

有齿食道口线虫ITS及5.8S DNA片段的PCR扩增、克隆及序列分析

运用 PCR 方法以保守引物 NC5 及 NC2 扩增了从广东阳江地区猪体分离的食道口线虫 rDNA 的内转录间隔区(ITS)及 5.8S 序列。将 PCR 扩增出的片段纯化后克隆至 pGEM-T Easy 载体,用 PCR 技术及酶切鉴定阳性菌落,对阳性菌落质粒 DNA 进行测序。结果表明,扩增的片段大小为 828 bp,包含部分的 18S、28S 及全部的 ITS-1(362 bp)、5.8S(153 bp)及 ITS-2(217 bp)序列。序列比较表明,该食道口线虫为有齿食道口线虫。本研究在国际上首次报道了中国猪有齿食道口线虫的 ITS 及 5.8S 序列,为食道口线虫的分子生物学的进一步研究奠定了基础。

猪食道口线虫ITS-1和ITS-2rDNA的PCR-SSCP分析

以采自我国不同地区猪体的食道口线虫虫株为研究对象,PCR扩增出ITS-1和ITS-2序列片段,然后采用单链构象多态性(SSCP)方法分析PCR产物,对不同地区食道口线虫进行分子鉴定。所有样品经SSCP分析显示两种带型,第一种为有齿食道口线虫带型,另一种为未定种食道口线虫带型。代表性样品的测序结果表明,未定种食道口线虫带型的样品为四棘食道口线虫。本研究在国际上首次报道了中国猪四棘食道口线虫的ITS序列,并建立了区分有齿食道口线虫和四棘食道口线虫的PCR-SSCP方法,从而为食道口线虫的分子生物学的进一步研究奠定了基础。

片形吸虫第一内转录间隔区DNA多态性的研究

以不同地区的片形吸虫虫株为研究对象 ,经PCR扩增出了ITS 1部分基因片段 ,采用单链构象多态性 (SSCP)方法 ,并结合序列分析研究了不同地区片形吸虫ITS 1DNA的多态性。不同地区的样品经SSCP分析 ,显示 3种带型 ,第 1种为大片形吸虫的带型 ,第 2种为肝片形吸虫的带型 ,第 3种为 2种带形的混合带型。广西区样品和大部分贵州省样品属于大片形吸虫带型 ;四川省、黑龙江省和部分贵州省样品为混合带型 ;南京市和甘肃省样品为肝片形吸虫带型或混合带型。测序结果表明 ,根据ITS 1基因的序列变异位点可区分 2种片形吸虫 ;表现为混合带型的样品在变异位点具有多态性。本研究结果显示 ,ITS 1片段可作为遗传标记用以区分大片形吸虫和肝片形吸虫 ,同时也证实 ,在我国除了这 2种片形吸虫外 ,还可能存在着“中间型”

O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆与表达

以O型口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株为研究对象,通过RT PCR扩增出VP1基因,克隆至表达载体pET 32a中,分析比较不同地区O型口蹄疫病毒VP1基因序列,为构建VP1重组基因工程苗奠定基础.经测序表明,目的基因VP1已以正确的阅读框架整合至表达质粒中,应用大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌,通过IPTG诱导方法,表达包含VP1基因产物的融合蛋白,经SDS PAGE和Western blotting分析,表明表达蛋白表达量高,反应原性良好.

食道口线虫与食道口线虫病的研究进展

食道口线虫病（Oesophagostomiasis）是由属于圆形目（Strongyloidea）的食道口属（Oesophagostomum）的多种线虫寄生于动物肠道所引起,因有些种的幼虫在肠壁内形成结节状病变,故有＂结节虫＂之称。食道口线虫通常只在反刍动物、猪和猴子中发现,但也有感染人的报道,

重铬酸钾对基于DNA提取鉴定粪样中布氏和毒害艾美耳球虫感染类型影响的研究

为探究重铬酸钾(PD)对基于DNA提取鉴定粪便样品中鸡球虫感染类型结果的影响,将2.5%PD暂存的新鲜鸡粪样品随机分成4组,分别用3 mL PD、2 mL PD和1 mL ddH_(2)O、1 mL PD和2 mL ddH_(2)O、3 mL ddH_(2)O,以1 mL/次,先PD后ddH_(2)O的方法对鸡粪样品进行洗涤。洗涤结束后取上清液,测OD_(490)值;重悬沉淀,取200μL/管提取DNA,进行PCR扩增及其产物的琼脂糖凝胶电泳检测,同设阳性、空白对照和不同循环数对照。用超微量核酸蛋白浓度测定仪检测PCR产物浓度并进行统计学分析。结果表明:随ddH_(2)O洗涤次数增多,所得上清的OD_(490)值逐步降低,洗涤2次时,与ddH_(2)O对照组间差异不明显;对提取所得的DNA进行PCR扩增时,分别得到片段大小约为601 bp和702 bp的条带,空白对照组无此条带,且所用Nec-F/R引物的扩增较Bru-F/R引物的特异性高,36个循环数较30个和33个循环的电泳效果好,且所得PCR产物浓度间均差异不明显。结果表明,PD对基于DNA提取鉴定粪样中布氏艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫两种鸡球虫感染类型的结果无明显影响,可用于流行病学调查样品采集。

犬复孔绦虫ITS及5.8 S rDNA的PCR扩增、克隆及序列分析

目的以从我国广东广州和湛江犬小肠中采集的2条犬复孔绦虫作为研究对象,以保守引物NC5及NC2扩增犬复孔绦虫的ITS-1,5.8 S及ITS-2 rDNA片段并进行序列分析。方法将PCR扩增出的片段纯化后克隆至pGEM-T Easy载体,重组质粒通过菌落PCR和酶切鉴定后,对阳性菌落进行序列测定。结果来自广州和湛江的2条犬复孔绦虫ITS及5.8 S rDNA序列总长分别为1536bp、1385bp,2条犬复孔绦虫的ITS-1、ITS-2序列相差较大,分别为20.80%、27.17%,而5.8 S序列相差较小(1.49%)。结论由于犬复孔绦虫ITS序列复杂,种内存在的差异大,故不适于作为犬复孔绦虫种的遗传标记。

钝缘蜱在非洲猪瘟传播中的作用及其防控

2018年8月1日,我国首次在沈阳发现非洲猪瘟(ASF)疫情,继而该病来势汹汹,截至2018年9月24日,我国辽宁、河南、江苏、浙江、安徽、黑龙江、内蒙古、吉林先后发生疫情,因此研究其主要传播方式及传播媒介对于目前防控非洲猪瘟疫情刻不容缓。文章主要通过探讨我国非洲猪瘟病毒(ASFV)的自然宿主和储存宿主钝缘蜱的生物学特性、流行病学特点、在国内的区域分布及对蜱的防控等,从生物媒介角度对非洲猪瘟的防控提供参考依据。

猪场虫害在非洲猪瘟传播中的风险和防控

自2018年8月中国辽宁首次暴发了非洲猪瘟(ASF),疫病的蔓延给我国养猪企业带来了巨大的经济损失。媒介生物传播是非洲猪瘟的传播途径之一,其中钝缘蜱作为生物性传播媒介研究较多,是ASF病毒在疫源地传播、长期保存甚至发生变异的关键因素,也是ASF在很多地区和国家久控不绝的原因之一。然而,仍有潜在的ASF机械性传播媒介生物需深入研究,例如吸血蝇可通过叮咬或猪误食来传播ASF等。文章分析了猪场主要虫害在非洲猪瘟传播中的风险,以便为优化现有预防措施、全面防控疫病提供科学依据,降低ASF传播对家猪的风险。

有齿食道口线虫msp基因的克隆与表达

以有齿食道口线虫为研究对象,扩增出其雄虫的msp基因,克隆至质粒载体pTrcHis-B中,构建了msp基因重组原核表达载体.经测序表明,目的基因msp已以正确的阅读框架整合至表达质粒中.应用大肠杆菌Top10为宿主菌,通过IPTG诱导方法,表达包含msp基因产物的融合蛋白,经SDS-PAGE分析,表明表达蛋白大小正确,表达量高.

生命科学研究的重大发现——2002年诺贝尔生理学/医学奖与秀丽新杆线虫介绍

因在器官发育及细胞程序性死亡的遗传调节方面所作出的突出贡献 ,SydneyBrenner ,H .RobertHorvitz及JohnE .Sulston荣获 2 0 0 2年度诺贝尔生理学 /医学奖。本文概要介绍这一生命科学的重大发现 ,以及这一科学发现和其它生命科学研究所用的优秀模型生物

一例猪密螺旋体病的诊断与防治

河南省安阳县某种猪场发生一起病例，其特征是病猪体温稍高，跟结膜苍白．后肢特别在肛门下有多处红色污物，肛门外翻．病猪起立困难．发病率34．66％，死亡率8％。2008年12月3日，安阳县畜牧局接到疫情报告后到该场进行了病理解剖并结合郑州牧专猪病实验室检查．诊断为猪密螺旋体病．采取相应的防治措施后．病情得到了控制。现将发病经过以及处理结果报告如下。

春夏季谨防鸡啄癖

啄癖，亦称恶癖或异食癖，是鸡只彼此互相啄食身体个别部位的一种恶癖，是当代养鸡业的常见病。常见的表现形式有啄肛、啄尾、啄羽、啄翅、啄头、啄蛋等恶癖。被啄破的部位一旦流血，则群鸡争相啄食，迅速导致被啄鸡的死亡，即使不死，被啄鸡的生长发育、生产性能也受到影响。鸡只一旦出现这些恶癖后，很快会在全群蔓延，给鸡场造成很大损失。

中国4个弓形虫虫株GRA6基因的比较分析

通过对国内来源于不同宿主的ZS人株、SH人株、CN猪株、QH绵羊株4个弓形虫虫株,以及国际标准强毒株RH株的致密颗粒抗原(GRA6)基因进行PCR-RFLP分析,首次对中国弓形虫虫株进行了基因分型研究,旨在了解中国弓形虫基因型的分布情况,从而为进一步的分子遗传学研究以及弓形虫病的防制提供资料。PCR-RFLP分析显示两种带型:RH、SH、CN3株弓形虫为一种带型,QH和ZS2株弓形虫为另一种电泳带型。GRA6序列分析结果显示:RH、SH、CN3株弓形虫的GRA6基因序列上的MseΙ酶切位点与国外报道的RH株一致,同属于基因型Ι,为强毒株;QH和ZS2株弓形虫的MseΙ酶切位点与国外报道的弱毒株BEVERLEY株和ME49株一致,同属于基因型Ⅱ,与PCR-RFLP分析结果一致。除MseΙ酶切位点外,中国的几个虫株GRA6序列与GenBankTM注册的RH株及BEVERLEY和ME49两个弱毒株有个别碱基的差异。结果证明中国人源弓形虫包含了Ι、Ⅱ两种基因型,而动物源性弓形虫则因宿主和来源地不同亦有Ι、Ⅱ两个基因型。