稻瘟病菌MoZds1的功能分析

由稻瘟病菌引起的水稻稻瘟病对中国水稻产量造成了严重威胁,开展稻瘟病菌功能基因的研究有利于更好地了解稻瘟病菌致病机制,为稻瘟病的防治奠定基础。研究前期通过遗传学手段在稻瘟病菌中筛选到一个酵母ZDS1同源基因MoZDS1。通过基因敲除方法成功获得基因缺失突变体ΔMozds1,发现缺失MoZDS1严重影响稻瘟病菌营养生长。为探究MoZds1在稻瘟病菌中的具体功能,通过生物信息学分析、生长测定、产孢量分析、细胞壁胁迫分析以及自噬流检测等方法,分析了MoZds1在维持营养生长、产孢、应对细胞壁胁迫以及细胞自噬方面的作用。结果表明,MoZds1正调控稻瘟病菌菌丝生长,负调控孢子的形成。此外,MoZds1参与细胞壁完整性途径并调控孢子内糖原的降解速率,然而,MoZds1的缺失未表现出对细胞自噬途径的显著影响。该研究对稻瘟病菌MoZds1的功能进行了系统地分析,或为后续更深入研究MoZds1的功能提供了理论基础。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)S9对植物病原真菌的溶菌作用

本研究共分离了976株细菌分离物,发现来自甘蔗根围的1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)S9对立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、终极腐霉(Pythium ultimum)和西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.nivewm)在PDA平板的对峙培养过程中不形成抑菌圈,但4d后可使上述植物病原真菌的菌丝溶解。扫描电镜观察发现S9菌株在待测的立枯丝核菌表面形成了溶菌斑。S9菌株对立枯丝核菌的作用过程是通过吸附在病原真菌的菌丝上,并随菌丝生长而生长,而后产生溶菌物质消解菌丝体。液体共培养测定也证明了S9菌株具有上述作用。本研究还发现,S9菌株对植物病原真菌的拮抗真菌绿色木霉(Trichoderma viride)、鲜红毛壳菌(Chaetomium cupreum)和球毛壳菌(Chaetomium globosum)的生长没有影响。盆栽试验证明了S9菌株可有效地控制立枯丝核菌(R.solani)引起的番茄苗期病害。S9菌株与其它拮抗真菌混合具有促进防治植物病原真菌引起的植物病害的潜力。

稻瘟病菌的拮抗细菌筛选

自稻叶及其它禾本科杂草叶片表面分离纯化９８５株细菌分离物，分别培养在ＮＢ液体培养基中，经８０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ后取上清液，加入稻瘟病菌分生孢子悬液中，测定对稻瘟病菌分生孢子发芽，附着胞形成的抑制作用，从而筛选出１３株对稻瘟病菌孢子芽管生长或附着胞形成具有抑制作用的拮抗细菌．采用离体稻叶接种测定，进一步筛选得到３株拮抗细菌，初步鉴定为：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ（Ｘｈ２１６），Ｂａｃｉｌｕｓｓｐ．（Ｘｈ２２２）及Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．（Ｘｈ２４０）．在离体条件下，Ｘｈ２１６，Ｘｈ２２２和Ｘｈ２４０对叶瘟的防治效果分别为７２．３％，７０．５％和６７．４％．

稻瘟病菌分生孢子发芽和附着胞形成的影响因素研究

在 8种培养基膜 ,多种 c AMP、IBMX浓度梯度的琼脂表面膜 ,不同营养液及 p H值条件下 ,研究了稻瘟病分子孢子发芽和附着胞形成的状况 ,并对稻瘟病拮抗细菌培养液的作用进行了研究。稻瘟病菌 (Magnaporthe grisea) 91- 11B1的分生孢子悬浮液浓度在 1× 10 5～ 1× 10 4个 / m L和 p H值在 7.0为最适孢子萌发条件 ,但不影响附着胞的形成。疏水基物表面、营养饥饿或洋葱表皮细胞表面可以刺激附着胞形成。 2 .5 mmol/ L c AMP和 8.0 mmol/ L磷酸二酯酶抑制剂 IBMX显著地促进附着胞的形成。与去离子水和水洗法相比 ,自来水和振落法获得的分生孢子更有利于附着胞的形成。筛选到

采用西瓜汁蔗糖琼脂培养基有效筛选西瓜枯萎病菌拮抗细菌

用１１种培养基，即ＣＭＡ，ＴＳＡ，ＰＤＡ，ＰＳＡ，ＮＡ，ＫＭＢ，ＷＳＡ，ＷＡ，ＯＭＡ，ＶＤＹＡ和ＤＰＹＡ，在培养皿平板上，２８℃培养下，测定它们对西瓜枯萎病菌拮抗细菌筛选能力。由西瓜皮提取汁，蔗糖，溴麝香草酚蓝和琼脂配制成的ＷＳＡ培养基在４ｄ内可清晰地分辨出拮抗细菌，ＴＳＡ培养基广泛地用于测定来自作物根部对根部病原真菌具有拮抗作用的拮抗细菌，但与ＷＳＡ培养基比较，在其上细菌和真菌生长较弱，较不明显，因而只能较低水平地检测出拮抗细菌。在ＣＭＡ和ＷＡ培养基上，细菌生长最慢，有些种类的细菌甚至在ＷＡ培养基上不能生长。在ＰＤＡ，ＰＳＡ和ＯＭＡ培养基上ＦＯＮ菌落生长很快，因而不能检出抑制区域，而在ＮＡ、ＰＤＡ和ＫＭＢ培养基上某些细菌菌落生长很快，甚至与ＦＯＮ菌落相重叠，故不能出现抑菌圈，在ＶＤＹＡ和ＤＰＹＡ上ＦＯＮ和某些细菌生长相对较慢。

植物病原真菌附着胞形成及其基因表达调节

植物病原真菌附着胞形成及其基因表达调节林福呈李德葆（浙江农业大学生物技术研究所，杭州３１００２９）ＡＰＰＲＥＳＳＯＲＩＵＭＦＯＲＭＡＴＩＯＮＢＹＰＬＡＮＴＰＡＴＨＯＧＥＮＩＣＦＵＮＧＩＡＮＤＴＨＥＲＥＧＵＬＡＴＩＯＮＯＦＧＥＮＥＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ...

稻瘟病菌单克隆抗体2B4的研究

从230个具有ELISA阳性反应的细胞株获得了11株具有高效价的单克隆抗体, 其中2B4显示较强结合作用,并均能与分生孢子、芽管和附着胞表面结合。Western blotting分析表明,单抗2B4能与孢子芽管表面的1%SDS提取物中的15kDa的蛋白结合。免疫金定位发现该蛋白确是在病菌各个形态阶段广泛存在的分泌性蛋白。采用2B4从分生孢子cDNA表达文库中筛选获得6个阳性克隆。该克隆MP1表达的蛋白抗原与实际存在的15KDa是相一致的。其基因克隆及功能分析正在研究之中。

病原真菌和细菌毒性基因的分离和鉴别

本文讨论最新发展起来的病原真菌和细菌毒性基因的分离和鉴别原理和方法，涉及到基因表达分析法、基因转移方法、基因组比较法、诱变方法及其诱变子的筛选鉴定。着重讨论了这些方法的优点和局限性，评估了标记诱变法（ＳＴＭ）和限制酶介导的整合法（ＲＥＭＩ）两者相互结合在病原真菌毒性基因克隆中的应用潜力。

二价金属阳离子对西瓜枯萎病菌厚垣孢子萌发的影响

研究了五种二价金属阳离子化合物，即ＣａＣｌ２，ＭｇＣｌ２，ＣｕＳＯ４，ＭｎＣｌ２和ＣｏＣｌ２对西瓜枯萎病菌厚垣孢子萌发及芽管生长的影响，２５℃培养８小时后发现５和０．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２，５ｍｍｏｌ／ＬＭｎＣｌ２及０．５ｍｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２能促进病菌厚垣孢子萌发和芽管生长，但０．５ｍｍｏｌ／ＬＣｏＣＬ２和ＣｕＳＯ４能抑制萌发和芽管生长．当浓度提高时。

真菌多样性研究进展

真菌是生态系统中的重要组成部分，也是真核生物的重要研究模式，广泛应用于真核细胞生命活动机理的基础研究中。真菌还是重要的生物资源，在医药、轻工、环保、食品、农业等领域应用广泛，开发前景广阔。随着科学技术的发展，新的研究技术和科学理论在真菌学研究中得到广泛应用，极大促进了真菌多样性研究的发展，为了进一步交流真菌多样性研究的前沿进展，

印度梨形孢对水稻的促生作用及其机理的初探

印度梨形孢（Piriformospora indica）是一种能与植物建立互惠共生关系的根部内生真菌,能促进植物生长,增加作物产量。为了研究印度梨形孢对水稻生长发育的影响,将印度梨形孢与籼稻苗共培养后,分析印度梨形孢对水稻植株高度、生物量、分蘖数、抽穗期、穗粒性状、叶绿素含量、硝酸还原酶活性、根系活力以及生长相关调控基因表达水平的影响。结果显示,接种印度梨形孢的水稻株高、地上部干鲜质量、分蘖数、硝酸还原酶活性和根系活力显著高于对照;与对照相比,印度梨形孢定殖的水稻植株抽穗期提前4~6d;印度梨形孢处理第3、4周后,叶片叶绿素含量比对照分别增加了19.77%和17.89%。RT-PCR分析表明,印度梨形孢定殖的水稻植株叶片中生长素相关调控基因OsIAA13和YUCCA的上调表达,表达量分别为对照的1.49倍和1.30倍;负调控水稻生长的NRR基因表达量为对照的58%。印度梨形孢促进水稻地上部的生长与叶绿素含量、硝酸还原酶活性、根系活力和生长相关调控基因的表达有关,印度梨形孢可能通过提高光合速率、增强水稻对矿质营养的吸收与利用和诱导生长素的分泌,促进水稻地上部的生长。

以潮霉素抗性为选择标记的毛壳霉原生质体转化

利用 PEG方法 ,将含有潮霉素抗性标记的质粒 p CB10 0 3转化毛壳霉原生质体 ,并在高于毛壳霉敏感的潮霉素浓度下筛选转化子。转化率达 1～ 2个转化子 / μg质粒 DNA。以潮霉素抗性的毛壳霉转化子的基因组 DNA为模板进行 PCR扩增及其产物的 Southern杂交。结果表明 ,潮霉素抗性基因已整合入毛壳霉染色体。稳定性试验表明 。

烟草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因的克隆及分析

采用RACE技术,从烟叶中克隆了一个新的编码GGPPS蛋白的基因,命名为Ntggpps3,并对其进行了生物信息学分析。Ntggpps3的cDNA序列为1251 bp,包含一个长度为1092 bp的开放阅读框,编码363个氨基酸。NtGGPPS3蛋白与其他植物GGPPSs高度保守。生物信息学预测结果表明,NtGGPPS3的分子量为39.5 kD,等电点为6.28,为亲水性蛋白,N端有叶绿体信号肽。二级结构主要由螺旋和无规则卷曲组成,三级结构含有两个富含天冬氨酸的区域,并通过同源建模构建了NtGGPPS3的3D模型。进化分析表明,植物的GGPPS分为大亚基和小亚基两个分支,而且NtGGPPS3属于大亚基。

稻瘟病菌单克隆抗体的研制及其对稻瘟病菌附着胞形成的影响

稻温病菌的分生孢子、芽管、附着胞的混合物作为抗原免疫BALB/c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与SP2 /0骨髓瘤细胞在 50 %PEG下融合成杂交瘤细胞 ,用间接ELISA筛选阳性孔 ,获 1 1株单克隆抗体。间接免疫荧光试验表明其中 4株单克隆抗体 2B4、4A1 、1D1 和 2H4分别与孢子、芽管或附着胞有特异性结合 ;Westernblotting分析发现 2B4、4A1 、1D1 单克隆抗体分别与孢子、芽管表面的提取物有不同的结合带 ;此四株单克隆抗体均干扰稻温病菌附着胞形成 ,并抑制稻温病菌在叶表的致病性。

内生真菌紫杉木霉ZJUF0986菌株及其活性代谢产物防治水稻纹枯病的效果

从南方红豆杉分离到的一种新内生真菌紫杉木霉Trichoderma taxi菌株ZJUF0986,与水稻纹枯病菌对峙培养。结果发现,该内生真菌通过菌丝缠绕附着等重寄生方式,导致纹枯病菌菌丝断裂或其内含物降解直至死亡。其产生的活性代谢产物也能强烈抑制纹枯病菌菌丝的生长,显著降低病原菌的菌核萌发率;对病原菌菌丝生长和菌核萌发的有效中浓度EC50分别为1.08和3.59μg/ml。盆栽试验结果表明,菌株ZJUF0986浓度80μg/ml的活性代谢产物对水稻纹枯病的防效达63.82%,与50μg/ml井冈霉素A的防治效果相当。

利用城市垃圾发酵生产绿色木霉孢子

研究利用城市生活垃圾发酵生产绿色木霉孢子的可行性，培养条件和发酵过程中的种群密度变化规律。结果表明，城市生活垃圾适宜作为生产木霉孢子的培养基质；合适的培养条件为垃圾培养基质中添加 ３０％（Ｗ／Ｗ）的麸皮，接种量 ３０％（ｖ／ｗ），发酵 ８—１０ｄ，孢子密度可达 １０９／ｇ以上。