小鼠Usp25基因的雄激素反应元件的克隆与功能鉴定

目的我们前期研究中进行全基因组表达谱检测发现在雄激素受体（androgen receptor，Ar）基因睾丸支持细胞特异性敲除小鼠（S-Ar^-/y）睾丸组织中泛素特异性蛋白酶25（ubiquitin specific peptidase 25，usp25）基因表达较低。本研究的目的是了解雄激素及其受体是否可以作用于Usp25基因，并测定其雄激素反应元件（androgen-responsive element，ARE）。方法采用RT-qPCR方法检测Usp25基因表达量。通过生物信息学预测脚25基因上游可能的ARE，构建Usp25基因ARE报告质粒pGLP／Usp25。在TM4细胞中，采用荧光素酶报告系统分析雄激素及其受体对Usp25基因ARE活性的调控作用。结果在S-Ar^-/y小鼠睾丸组织中矾p25基因表达量比在野生型小鼠中显著降低。在TM4细胞中睾酮可以显著提高Usp25基因表达量。在TM4细胞中，雄激素可以显著提高pGLP／Usp25的荧光素酶活性。结论Usp25基因表达可以被雄激素睾酮激活，Usp25基因第一内含子519至1102bp区域含有ARE，可以调控启动子的转录水平。

小鼠睾丸组织中雄激素及其受体信号抑制精母细胞干扰素刺激因子15基因表达

目的在前期研究中进行全基因组表达谱检测发现在雄激素受体（androgenreceptor，Ar）基因睾丸支持细胞特异性敲除小鼠（s—Ar/y）睾丸组织中干扰素刺激因子15（interferon—stimulatedgene15,Isg15）基因表达增高。研究的目的是了解睾丸组织中雄激素及其受体对Isg15基因表达的影响作用。方法采用RT—qPCR和Western印迹等方法比较野生型小鼠和s—Ar由小鼠睾丸组织中Isg15基因表达量。通过免疫组织化学和荧光染色两种方法检测Isg15蛋白在睾丸组织中的分布。结果在s—Ar由小鼠睾丸组织中tsg15基因表达量比在野生型小鼠中显著升高，Isg15蛋白主要表达于精母细胞。结论睾丸支持细胞特异性敲除加基因使精母细胞中Isg15基因表达异常增高。