以教学实验区为载体的产学研一体化药学教学模式研究

随着医药行业迅猛发展,对能将所学知识迅速转化到研究、应用的新型人才的需求力度逐步加大.在应对这一问题上,高校应寻求新的教学模式,培养新时期综合性人才.以教学实验区为载体的产学研循环互动的药学教学模式是以创新和改革的教育思想为指导,以培养应用型药学研究和创新药物研制的后备人才和师资队伍为目标,进行人才培养方案的实施,实行理论教学与实践教学相结合、教学与科研相结合、科研与产业相结合,强化学生学习能力、科研能力、实践创新能力的培养,全面提高学生的综合素质.

α2,6-唾液酸转移酶(ST6GalI)的表达对结肠癌细胞唾液酸化的影响

目的 研究结肠癌细胞LS174T转染正义和反义的α2 ,6唾液酸转移酶 (ST6GalI)cDNA对结肠癌细胞表面唾液酸化及肿瘤细胞粘附功能的影响 .方法 结肠癌细胞株LS174T转染正义ST6GalIcDNA或反义ST6GalIcDNA的部分序列的表达载体pcDNA3 .1,以RT -PCR检测转染子ST6GalImRNA的表达 ,流式细胞仪检测细胞表面α2 ,6唾液酸含量 .结果 转染正义ST6GalIcDNA的克隆显示ST6GalImRNA的表达增强以及接骨木凝集素 (SNA)与细胞表面成分的结合增加 ;而转染反义ST6GalIcDNA的部分序列的细胞克隆的ST6GalImRNA的表达减少 ,SNA与细胞表面成分的结合力降低 .结论 ST6GalI的表达直接影响细胞表面α2 ,6-连接的唾液酸水平并调节肿瘤细胞的粘附功能 .利用反义核酸技术抑制ST6GalI的表达并降低肿瘤细胞表面α2 。

反义寡核苷酸对Daudi细胞α2,6唾液酸的下调作用研究

目的 研究反义寡核苷酸对Burkitt’s淋巴瘤Daudi细胞α2 ,6 唾液酸转移酶 (ST6GalI)的活性和细胞表面α2 ,6 唾液酸水平的下调作用。方法 以修饰后的ST6GalI的反义寡核苷酸处理Daudi细胞 ,以RT PCR检测Daudi细胞ST6GalImRNA的表达 ,荧光定量法测定ST6GalI的活性及以流式细胞仪检测细胞表面α2 ,6 唾液酸的含量。结果 和对照组比较 ,以反义寡核苷酸处理的Daudi细胞ST6GalImRNA的表达下调 ,ST6GalI酶活性下降 ,并导致细胞表面α2 ,6 唾液酸水平降低。结论 反义寡核苷酸可有效降低Daudi细胞表面α2 ,6 唾液酸化水平 ,内源性减少α2 ,6 唾液酸对Daudi细胞CD2

α2,6-唾液酸对结肠癌细胞同源凝集的影响

目的研究结肠癌细胞LS174T的α2,6-连接的唾液酸水平对肿瘤细胞同源黏附功能的影响。方法结肠癌细胞株LS174T转染α2,6-唾液酸转移酶(ST6Gal-I)cDNA或ST6Gal-I cDNA的部分反义序列以及空载体pcDNA3.1,以流式细胞仪检测转染细胞表面α2,6-连接唾液酸含量并进行克隆分选,比较顺义、反义以及空载体转染细胞的贴壁时间以及细胞-细胞之间的同源凝集效应。结果转染顺义的ST6Gal-I cDNA的细胞克隆显示ST6Gal-I mRNA的表达增强,SNA(一种特异性识别α2,6-连接唾液酸的植物凝集素)与细胞表面成分的结合增加;另一方面,细胞转染反义ST6Gal-I cDNA后其ST6Gal-I mRNA表达减少,SNA与细胞表面成分的结合力降低。与空载体转染相比,顺义转染的细胞克隆同源凝集作用降低,与细胞外成分的黏附作用增强,贴壁速度加快;反义转染细胞克隆同源凝集作用显著增强,与细胞外成分的黏附作用降低,传代后4 h的贴壁率仅为空载体的53.7%。结论本实验结果显示,肿瘤细胞α2,6-唾液酸转移酶(ST6Gal-I)的表达将有效影响细胞表面α2,6-连接的唾液酸水平并调节肿瘤细胞的黏附功能。

感染华支睾吸虫的豚鼠胆道超微结构研究

为了动态观察华支睾吸虫病的胆道超微结构变化过程，以实验感染华支睾吸虫的豚鼠为模型，对其胆道上皮细胞进行了２２周的观察，发现主要改变为：胆道上皮细胞微绒毛的肿胀，融合或消失；胆管上皮细胞向管腔面异常隆起；胞质减少，胞浆黏液颗粒大量增加；细胞间隙增宽，胶原原纤维向内生长；核形态不规则；线粒体数量增加，体积增大，肿胀，基质减少或空泡化，或浓缩为髓样体；高尔基复合体活跃；内质网数量增加，内质网池扩张；溶酶体增加；基膜弯曲，基膜下胶原原纤维增生及嗜酸粒细胞浸润，其病变程度随时间延长呈加重趋势，反映了胆管上皮细胞受破坏及功能反应性增强交叉进行的病理过程。

感染华支睾吸虫的豚鼠胆道扫描电镜观察

目的：研究华支睾吸虫病的胆道超微结构变化及其病变机理。方法：以实验感染华支睾吸虫的豚鼠为模型，分别于感染后第６、１０、１４、１８及２２周取其肝内胆管以扫描电镜进行观察。结果：主要变化有：肝内胆管上皮细胞微绒毛的变短，肿大或消失；细胞膜表面的大疱形成；腔面质膜的破裂、缺损；细胞间隙增宽及胆管上皮细胞的局灶性脱落；粘液分泌亢进。结论：胆管上皮细胞的病损程度随感染时间的延长呈加重趋势。

莪术醇的分离鉴定及含量测定

目的:研究从莪术油中提取莪术醇的方法,建立莪术醇含量分析的新方法。方法:以莪术油为原料,进行减压蒸馏,收集208～216℃的馏分经重结晶得到产品,将其和对照品作差示量热光谱、红外光谱、核磁共振和质谱对比分析确定莪术醇;用高效液相色谱法测定其含量,色谱柱为ODS柱;以乙腈∶水(15∶85,V∶V)为流动相;流速为1.0mL/min;检测波长为210nm;柱温为25℃;以外标两点法计算含量。结果:经差示扫描量热光谱、红外光谱、核磁共振、质谱分析鉴定提取的产物是莪术醇,高效液相分析其浓度在10～70μg/mL范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999(n=7);精密度试验RSD为0.92%(n=6);平均回收率为99.86%,RSD=0.76%,含量为98.9%,RSD=0.89%(n=3)。日内日间差异实验RSD均小于0.78%,表明样品稳定性良好。结论:减压蒸馏法提取莪术醇的工艺流程简单,适合大规模生产,而且纯度高;高效液相色谱法测定莪术醇含量的方法简便、准确、快速,可用于莪术醇及其制剂的质量控制。

重组人碱性成纤细胞生长因子单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的制备重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)单克隆抗体,鉴定其特性,建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法以rhbFGF为免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗rhbFGF杂交瘤细胞株,制备抗rhbFGF单克隆抗体,采用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗体亚类,间接ELISA法检测抗体效,Western blot鉴定抗体特异性。HRP标记McAb并建立夹心ELISA检测方法。结果获得2株(分别命名2D3、5F7)可分泌特异性McAb的强阳性细胞株,腹水抗体效价在10-5以上,IgG亚类均为IgG1,轻链为K链。Western blot证明2株McAb特异性良好,双抗体夹心ELISA检测rhbFGF最低检测限达到2 ng/ml。结论成功制备高效价的抗rhbFGF单克隆抗体,建立抗rhbFGF双抗体夹心ELISA定量检测方法。

循环肿瘤细胞与转移性前列腺癌患者预后关系的Meta分析

目的 通过Meta分析系统评价循环肿瘤细胞（circulating tumor cells, CTCs）与转移性前列腺癌患者的预后关系。方法 检索PubMed、EMbase、Cochrane图书馆、中国期刊全文数据库（CNKI）及中国生物医学文献数据库（CBM）等，收集患者血液中CTCs数量与前列腺癌Gleason评分0~10级的前列腺癌患者预后相关的研究。以总生存期（OS）为观察终点，采用Review Manager 5.3进行Meta分析。结果 共有10篇英文文献纳入Meta分析，结果显示CTCs阳性组较CTCs阴性组在总生存期（OS）上预后差（HR=2.47, 95%CI： 2.02～3.02, P〈0.00001），根据检测时间与检测方法进行亚组分析，CTCs阳性组比CTCs阴性组患者预后差。同时分析结果还提示CTCs阳性与前列腺癌Gleason评分呈正相关（OR=2.23, 95%CI： 1.41～3.53，P〈0.04）。与前列腺癌特异性抗原（PSA）水平、是否有骨外多发转移均无相关性。结论 外周血CTCs阳性是转移性前列腺癌患者预后的风险因素，且与检测时间、检查方法无关。

亚铁螯合酶抑制诱导细胞内原卟啉IX积聚的肿瘤荧光成像

目的:探讨靶向FECH的siRNA在肿瘤荧光成像中的作用。方法:设计并合成靶向FECH的siRNA,用脂质体转染剂Lipofectamine2000携带后转染H08910PM细胞,用RT—PCR半定量检测细胞中FECHmRNA的表达用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜在体外检测H08910PM细胞的荧光强度。结果:siRNA转染后H08910PM细胞的FECHmRNA的表达水平低于未转染组,与转染剂组比敲减效率为70.1%。荧光显微镜成像图显示:随氨基酮戊酸(ALA)浓度的增高,红色荧光逐渐增强;同一ALA浓度下siRNA干扰后,其红色荧光增强。结论:化学合成的靶向FECH的siRNA能够下调H08910PM细胞中FECH基因的表达,增加肿瘤细胞内的PplX积聚,siRNA与小浓度ALA联用具有协同效应,可减少ALA系统毒性,并提高肿瘤细胞的检出率。

莪术油制剂研究进展

莪术油具有抗肿瘤、抗病毒和抗真菌等药理作用。目前含莪术油的抗病毒药莪术油葡萄糖注射液和妇科用药保妇康栓已被收入《中华人民共和国药典》(2005年版)。该文论述了莪术油新技术和新剂型的研究进展,以期为莪术油的新剂型开发提供依据。

丙型肝炎病毒核心蛋白在QSG7701细胞中的表达和鉴定

目的:进行丙型病毒肝炎核心蛋白真核表达载体的构建,并在人源肝细胞QSG7701中进行表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出HCV核心(core)基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人肝细胞QSG7701,用免疫组织化学SP法检测丙型肝炎病毒核心蛋白的表达,再通过Westernblot印迹法进行鉴定。结果:所克隆的core片段大小正确,序列正确;成功的构建了pcDNA3.1(-)/core重组表达质粒,瞬时转染QSG7701细胞,用SP免疫组化检测到了核心蛋白的表达,Westernblot印迹法显示其分子量约为21000。结论:丙型病毒肝炎核心蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)/core在人肝细胞中能有效表达HCV核心蛋白,从而为进一步研究和解析核心蛋白在肝细胞癌变机制中的所起的作用提供了良好的核心蛋白表达系统,同时也为开发丙型肝炎DNA疫苗提供了前期条件。

液体活检在乳腺癌中的研究进展

液体活检是指通过无创手段提取病人体液(血液、尿液、唾液、乳汁等),并分析肿瘤组织衍生的生物标记物,如循环肿瘤细胞、循环肿瘤DNA及外泌体.与传统的影像学及病理学诊断相比,液体活检具有无创性、可重复性及时效性等优势.近几年来,随着检测技术的革新发展,液体活检已被许多临床试验证实是一种有效的新颖活检技术.本研究将从生物学特性、检测技术及临床应用方面阐述液体活检在乳腺癌中的研究进展.

人绒毛膜促性腺激素对重组E型选择素介导的细胞粘附的影响

目的 :探讨孕妇羊水、血清和尿液的HCG对E型选择素介导的细胞粘附过程的影响。方法 :测定铬51标记的带有E型选择素配体—唾液酸化的Lewisx(sialyl Lewisx,sLex)结构的肝癌细胞系 ,即HepG2细胞在不同浓度、不同来源HCG存在下和重组E型选择素的粘附能力 ,从而评价HCG对E型选择素介导的细胞粘附过程的影响。结果 :血清和羊水HCG能抑制E型选择素介导的HepG2细胞的粘附作用 ,其抑制作用呈浓度依赖关系 ,相对抑制力分别为纯四糖结构sLex 的 2 4× 10 4和 4 5× 10 3 倍 ;而尿HCG无此作用。结论 :血清和羊水HCG是E型选择素的有效配体。

医学留学生药理学全英语教学实践

留学生教育是我国高等教育的一个重要组成部分。了解留学生的特点,选用适宜药理教材,提高教师综合素质,完善药理课堂教学,对留学生教育进行适时反馈和总结,是提高留学生药理教学的重要措施。

妊娠相关糖蛋白Glycodelin抑制E型选择素介导的细胞黏附

目的探讨来源于孕妇羊水和血清的高纯度Glycodelin对E型选择素介导的细胞黏附过程的影响程度。方法以色谱仪分离和纯化孕妇羊水和血清的Glycodelin,测定铬51标记的肝癌细胞系-HepG2细胞在不同来源、不同浓度Glycodelin作用下和重组E型选择素的黏附能力,从而评价Glycodelin对E型选择素介导的细胞黏附过程的影响。结果血清和羊水Glycodelin能有效抑制Hepg2细胞和重组E型选择素之间的黏附,其抑制作用呈浓度依赖关系,其相对抑制力分别为纯四糖结构Sialyl-Lewisx(sLex)的9.4×105和4.0×105倍。结论妊娠相关糖蛋白Glycodelin高度抑制E型选择素介导的细胞黏附。

Glycodelin在子宫内膜癌和子宫颈癌的表达

目的:探讨免疫抑制性糖蛋白(Glycodelin)在子宫内膜癌及子宫颈癌的表达。方法:采用免疫组织化学S-P法检测Glycodelin在30例子宫内膜癌及20例子宫颈癌组织中的表达,并评价其与临床病理分期和组织学分级的关系。结果:Glycodelin在子宫内膜癌、子宫颈鳞癌和子宫颈腺癌的表达率分别为73%(22/30)、53 33%(8/15)和60%(3/5),3组之间无统计学差异(P>0 05)。各临床病理分期的阳性率(子宫内膜癌:I期75%,II期75 00%,III期50%;子宫颈癌:Ia60%,Ib44 44%,IIa66 66%)无统计学差异(P>0 05)。各组织学分级的阳性率(子宫内膜癌:G170%,G277 78%和G366 67%;子宫颈癌:G159 14%,G250 00%和G360 00%)无统计学差异,P>0 05。结论:Glycodelin在子宫内膜腺癌和子宫颈癌均有表达,其表达与临床病理分期和组织学分级无明显关系。

HCVcore真核表达质粒pcDNA3.1(-)/core的构建

目的构建HCVcore基因真核表达质粒,为进一步研究和解析HCV诱发人不死化肝细胞癌化的机制,HCV感染的检测及疫苗和药物研发做好前期基础。方法将含HCV全长基因的pBRTM/HCV1 -3011质粒于大肠杆菌JM109内扩增;提取pBRTM/HCV1-3011质粒;从pBRTM/HCV1-3011质粒中PCR扩增出HCVcore片段并将其插入pGEM-T克隆载体;再与表达载体pcDNA3. 1( -)重组,以得到重组的真核表达载体pcDNA3. 1 ( -) /core;最后限制性酶切鉴定HCVcore表达载体。结果从pBRTM/HCV1-3011质粒中扩增出的HCVcore片段大小正确,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列;凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3. 1 /core内。结论 成功的构建了HCVcore基因的真核表达载体pcDNA3. 1( -) /core。

重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌中的表达

目的:提高重组人成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌工程菌表达体系E.coliBL21(DE3)/pET3c-haFGF中的表达水平。方法:从菌种和培养基筛选做起,选择了全合成的YH培养基做大肠杆菌表达体系E.coliBL21(DE3)/pET3c-haFGF的发酵培养基,并从多角度研究了其质粒的稳定性,设计了生长期不添加抗生素、诱导前离心去除β-内酰胺酶同时添加氨苄青霉素的方法,通过密码子偏爱性和定点PCR突变技术改变β-内酰胺酶的表达强度。结果:经50代传代试验,质粒分配稳定性在90%以上,PstI酶切图谱显示结构稳定性达100%,表达水平维持在25%～28%。LBAmp平板揭示了诱导过程中工程菌丧失表达能力的部分原因,诱导前离心的实验使表达水平提高13.68%,在IPTG浓度0.3mmol/L、氨苄青霉素添加量50μg/ml时,表达效率提高了25%。结论:本研究建立的工艺操作较为简便易行,易于放大,具有较大的经济意义。

循环肿瘤细胞在卵巢癌中的作用

循环肿瘤细胞(CTCs)是指从肿瘤的原发灶或转移灶释放到循环系统的肿瘤细胞.CTCs在很多恶性肿瘤中都有研究,但CTCs在卵巢癌中的研究极少受到关注.以前认为卵巢癌的主要转移方式是经腹膜直接转移,只有1/3病人会发生沿血道的远处转移,因此外周血中的CTCs数量不多.最近研究表明血液播散在卵巢癌的转移中有重要作用,并且血液中CTCs与病人预后相关.而CTCs在卵巢癌中预后诊断价值依赖于CTCs的分离和检测方法.本研究就卵巢癌外周血循环肿瘤细胞的分离、检测方法、CTCs的鉴定分子和临床应用作一综述.