比较hCG联合GnRH-a双扳机和hCG单扳机方案对卵巢高反应人群的影响

目的分析对比在拮抗剂方案中应用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)联合人绒毛膜促性腺激素(hCG)双扳机和hCG单扳机对卵巢高反应人群体外受精助孕周期的影响。方法回顾性收集2019年1月至2022年6月期间在广西壮族自治区妇幼保健院采用体外受精/卵胞质内单精子注射(IVF/ICSI)助孕、因卵巢高反应行全胚冷冻的260例患者的临床资料,其中使用双扳机为A组(n=131),使用hCG单扳机为B组(n=129)。比较分析两组新鲜周期内的2PN率、优质胚胎率等临床指标的差异,同时比较两组首次移植周期内的妊娠结局差异。结果两组新鲜周期的2PN率、卵裂率、D3可利用胚胎数、D3优胚数、D5优胚数、总囊胚数、囊胚形成率、卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);但A组冻存胚胎数高于B组,差异具有统计学意义(P=0.023)。A、B两组中重度OHSS发生率分别为1.52%和2.32%,差异无统计学意义(P=0.986),但A组为2例中度OHSS(住院治疗1例),B组为3例重度OHSS(住院治疗3例)。两组首次冻融周期的生化妊娠率、临床妊娠率、胚胎种植率、持续妊娠率、活产率等比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在GnRH拮抗剂方案中,对卵巢高反应人群使用GnRH-a联合hCG双扳机,可与hCG单扳机同样诱发卵泡成熟及获卵,不影响其助孕结局,同时有利于降低中重度OHSS的发生。

过表达人端粒酶逆转录酶促进人脐静脉血管内皮细胞增殖

人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶的催化亚基,专司在染色体末端添加端粒重复序列,与维持端粒长度与功能有关.为探索hTERT的生物学功能,本研究以人脐静脉血管内皮细胞(hUVEC)为研究对象,观察了hTERT基因过表达对hUVEC细胞增殖作用和端粒酶活性的影响.利用构建的pEGFP-C1-hTERT融合基因表达载体转染hUVEC,结果显示,转染后的细胞可见GFP表达,提示转染细胞有GFP-hTERT融合蛋白表达.RT-PCR、免疫组化和TRAP-PCR-ELISA法显示,与未转染细胞比较,转染细胞的hTERT mRNA、蛋白质表达水平明显升高,端粒酶活性明显增强.MTT实验显示,转染hTERT基因的细胞在72 h后细胞增殖速率明显大于未转染细胞及空载体转染细胞.结果提示,过表达hTERT基因可提高血管内皮细胞端粒酶的活性和增殖能力.实验结果证明,端粒酶活性与细胞增殖活性密切相关.

三级干预法在突发性取精困难患者中的临床价值

人类辅助生殖技术为不孕不育的患者带来了福音,但一些男性患者在取卵日由于取精环境或精神压力过大等原因导致阴茎无法勃起或勃起不坚而突发取精困难,严重影响了辅助生殖的治疗,甚至会取消本次治疗周期,给患者带来极大的经济和精神损失。如何有效地防范及处理突发性取精困难的患者是迫切需要解决的问题。

辅助生殖技术中单胚胎移植的伦理考量

人类辅助生殖技术已跨入以高效、安全为主题的时代,而因辅助生殖治疗造成高概率的多胎妊娠的伦理问题也更加突出。公众乃至专科工作者都低估多胎妊娠的复杂性和其潜在的对母婴的严重危害,在具体的工作中也存在保证妊娠率与并发医源性多胎妊娠的矛盾,因此在临床工作中如何贯彻执行伦理原则依然存在诸多困惑。研究证实,降低多胎妊娠的根本性防控措施是施行单胚胎移植,基于此,从伦理学角度,对单胎移植能否解决医源性多胎妊娠进行探讨。

人类早期胚胎体外发育的影响因素

人类胚胎发育是一个复杂的过程,早期胚胎的正常发育必须依赖于源自生殖道上皮细胞的信号,而且提供某些生长因子或清除微环境中有害物质等都将有助于胚胎的正常发育.胚胎体外培养是模拟体内的发育过程,众多因素在直接或间接影响着胚胎的发育潜能.

精卵孵育时间对体外受精的围产儿结局的影响

目的比较精卵孵育时间对体外受精的围产儿结局的影响。方法回顾分析2013年1月—2014年12月在广西壮族自治区妇幼保健院生殖中心行常规体外受精的3 323例患者,共3 368个取卵周期,根据精卵孵育时间分成2组,精卵相互作用时间3～4 h者为孵育时间缩短组,传统受精组为传统受精方式,精卵过夜孵育16～18 h。比较两组的胚胎发育情况、妊娠结局及新生儿健康状况。结果孵育时间缩短组的正常受精率、优胚率、囊胚率及胚胎利用率分别为70.1%、49.7%、46.0%、52.1%,高于传统受精时间组(分别为:68.2%、48.4%、30.3%、50.9%,P<0.05)。但孵育时间缩短组的临床妊娠率、种植率、活产率虽稍高于传统受精组,但未达到统计学差异,两组单胎和双胎在孕周、出生体重、低出生体重儿和极低出生体重儿发生率、身长、Apgar评分上差异也无统计学意义,两组出生畸形率比较亦无统计学差异(P>0.05)。结论缩短精卵孵育时间能有效提高胚胎的发育潜能及胚胎的利用效率,但对围产儿未见明显影响。

应用激光从完全不动精子中筛选存活精子行ICSI后获临床妊娠:附2例报告

目的:探讨应用激光筛选存活精子的可行性及临床应用价值。方法:对2例完全不动的精子(1例睾丸穿刺取精和1例射出精液),用激光射击精子尾部,选择激光射击后卷尾的精子用于卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)。结果:2例患者用激光选择的精子行ICSI后,平均受精率达88.89%,新鲜周期移植后,两者均获得了临床妊娠。结论:激光是筛选存活精子的有效方法,临床应用可获得理想的妊娠结局。

不同受精方式对选择性囊胚培养结局的影响

目的:探讨不同受精方式对选择性囊胚培养结局的影响。方法:回顾性分析2009年1月至2012年12月在我中心接受囊胚培养的IVF组1 153个周期和ICSI组205个周期的囊胚培养结局。结果:IVF组和ICSI组分别有14 748和2 655枚胚胎进行序贯囊胚培养,两组均无因无囊胚可移植而取消周期。IVF组共形成7 871枚囊胚,ICSI组形成1 210枚囊胚;IVF组的优胚率、囊胚形成率和胚胎利用率均显著高于ICSI组(64.77%vs 58.72%,53.37%vs 45.57%,60.06%vs 52.17%,P均<0.05);但IVF组与ICSI组种植率(48.94%vs51.43%)、临床妊娠率(49.03%vs 52.02%)和流产率(11.69%vs 15.56)均无显著差异(P均>0.05)。结论:在同样的选择性囊胚培养纳入标准下,IVF相比于ICSI行囊胚培养的囊胚形成率和胚胎利用率更高,因无囊胚移植取消周期的风险相对更小。针对不同的受精方式可能需要制定相应的选择性囊胚培养纳入标准。

辅助生殖技术中卵巢高反应者行冻融或新鲜单囊胚移植的结局

目的：探讨体外受精-胚胎移植（IVF-ET）助孕控制性超排卵（CHO）周期中卵巢高反应患者实施新鲜单囊胚移植与冻融单囊胚移植的临床结局。方法：回顾性分析广西壮族自治区妇幼保健院生殖中心2013年1～12月行IVF助孕的卵巢高反应患者404例临床结局。其中,新鲜周期有卵巢过度刺激综合征（OHSS）风险,行首个冻融周期单囊胚移植145例（冻融周期组）;新鲜周期单囊胚移植259例（新鲜周期组）。比较两组获卵数、妊娠率、种植率、流产率、异位妊娠率、活产率等相关指标。结果：冻融周期组与新鲜周期组获卵数分别为24.3±5.7枚、19.3±3.8枚,生化妊娠率分别为78.6%、50.6%,临床妊娠率分别为74.5%、50.6%,种植率分别为74.5%、50.6%,晚期流产率分别为0,6.1%,活产率分别为64.8%、40.2%,差异均有统计学意义（P〈0.05）;而早期流产率分别为11.1%、11.5%,单卵双胎率分别为0.9%、0.8%,异位妊娠率分别为1.9%、3.1%,差异均无统计学意义（P〉0.05）。404例中OHSS发生率为3.0%,其中冻融周期组9例（6.2%）,均为中、重度早发型OHSS;新鲜周期组3例（1.2%）,均为中、重度迟发型OHSS。结论：IVF-ET中卵巢高反应行新鲜单囊胚移植及有OHSS高风险者选择冻融单囊胚移植均可有效降低OHSS发生率,而且冻融周期单囊胚移植比新鲜囊胚移植有更高的临床妊娠率及活产率。

GnRH-a长方案体外受精周期HCG日不同孕酮水平治疗效果的分析

目的探讨GnRH-a长方案体外受精助孕周期HCG日不同孕酮水平的治疗效果。方法回顾性分析于2015年1月至2017年12月在广西壮族自治区妇幼保健院生殖中心实施常规体外受精的助孕周期的患者的临床资料,根据HCG日孕酮水平将其分为五组,其中P≤1.59nmol/L患者设为A组(n=78)、1.59nmol/L<P≤3.18nmol/L的患者设为B组(n=482)、3.18nmol/L<P≤4.77nmol/L患者计设为C组(n=345)、4.77nmol/L<P≤6.36nmol/L的患者设为D组(n=67例)、P>6.36nmol/L患者设为E组(n=22),比较各组之间患者一般资料及治疗效果。结果五组患者间的平均获卵数比较,其差异具有统计学意义(P<0.05),当P≤4.77nmol/L时,平均获卵数A组<B组<C组,其差异具有统计学意义(P<0.05);当P>4.77nmol/L时,平均获卵数D组<E组,其差异无统计学意义(均P>0.05)。五组患者间的正常受精率比较,其差异具有统计学意义(P<0.05)。五组患者间的D3平均可利用胚胎数比较,其差异具有统计学意义(P<0.05),其中A组<B组<C组<D组<E组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。五组患者间的移植周期妊娠率对比,其差异无统计学意义(P>0.05)。五组患者间的周期冷冻率对比,A组<B组<C组<D组<E组,其差异均具有统计学意义(P<0.05)。五组患者间的累积1次胚胎移植妊娠率的比较,其差异无统计学意义(P>0.05)。结论在GnRH-a长方案体外受精助孕周期中,HCG日血清孕酮水平在3.18~4.77nmol/L范围时,有比较理想的获卵数、可利用胚胎数和周期冷冻率,移植周期妊娠率也较为稳定,而HCG日血清孕酮水平>4.77nmol/L时获卵数、可利用胚胎数不受孕酮升高的影响,有较高的周期冷冻率,但累计1次胚胎移植的妊娠率无影响。

单囊胚移植在冻融周期中应用的效果观察

目的:探讨单囊胚移植在冻融周期中应用的临床效果。方法:回顾性分析2011年1月至12月,在我院生殖中心冻融周期行单囊胚移植患者的临床妊娠结局。结果:共复苏447周期,复苏囊胚488个,平均复苏囊胚1.09个,囊胚存活率91.60%(447/488)。移植447周期,胚胎种植率45.86%(205/477),临床妊娠率45.86%(205/477),单卵双胎率2.93%(6/205),流产率15.61%(32/205),活胎分娩率79.02%(162/205)。结论:冻融周期行单囊胚移植能获得可接受的临床妊娠率和活胎分娩率,且多胎妊娠率明显降低,为提高辅助生殖技术效率及其临床应用提供了依据。

囊胚移植对增加单卵双胎风险的研究

目的 比较囊胚期胚胎移植和卵裂期胚胎移植单卵双胎的发生率. 方法 回顾性分析2009年1月—2011年12月在本院生殖中心行体外受精-胚胎移植/卵胞浆内单精子显微注射患者的资料,根据移植胚胎的发育阶段,分为卵裂胚移植组和囊胚移植组.比较两组单卵双胎的发生率及其临床结局. 结果 卵裂期胚胎移植组移植胚胎的数目多[（2.0±0.3）个],多胎率高（32.1％）,与囊胚移植组比较,差异有统计学意义;卵裂期胚胎移植组和囊胚移植组的单卵双胎率（2.6％和3.6％）、流产率（33.3％和29.4％）、活胎分娩率（66.7％和70.6％）、早产率（75.0％和66.7％）及低体重儿出生率（50.0％和78.3％）差异均无统计学意义. 结论 囊胚移植不增加单卵双胎发生率的风险.

补救卵胞浆内单精子注射时机对受精失败患者胚胎发育和临床结局的影响

目的 探讨补救卵胞浆内单精子注射（ICSI）时机对体外受精失败患者胚胎发育和临床结局的影响. 方法 回顾性分析2011年1月至2013年12月在广西壮族自治区妇幼保健院生殖中心行常规体外受精失败的患者共80周期,其中早补救组（受精＜6h后补救）61周期,晚补救组（受精20 h后补救）19周期.比较两组的受精率、卵裂率、胚胎质量及临床结局. 结果 早补救组与晚补救组的平均年龄[（32.3±4.3）岁与（33.9±4.8）岁]、平均不孕年限[（5.2±3.1）年与（5.7±3.6）年]、平均获卵数[（12.5±6.8）个与（12.6±9.5）个]、成熟率（74.6％与72.0％）、正常受精率（85.2％与84.9％）、多精受精率（0.7％与0.6％）、卵裂率（96.7％与98.6％）、平均移植胚胎数[（1.7±0.7）个与（1.8±0.6）个]、临床妊娠率（48.1％与31.3％）和胚胎种植率（28.7％与20.0％）比较,差异均无统计学意义;但优质胚胎率（48.2％与23.6％）、囊胚率（40.5％与11.2％）和周期冷冻率（63.9％与31.6％）早补救组显著高于晚补救组,两组比较差异有统计学意义. 结论 早补救ICSI能获得更多有发育潜能的胚胎,增加移植的机会,改善临床结局.

实时PCR检测单细胞中人端粒酶hTERT基因mRNA的表达

人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达与端粒酶活性密切相关,而多项研究表明,端粒酶在肿瘤发生、发展、细胞永生化方面起重要作用.为探讨单细胞技术检测卵巢癌SKOV3细胞转导hTERT前后其mRNA表达的差异,前期已通过慢病毒转染,将携带hTERT基因的表达质粒载体LV4-pGLV-EF1a-EGFP-hTERT转入卵巢癌SKOV3细胞系,构建了稳定表达hTERT蛋白的细胞株(SKOV3 h),同时设空载体感染组(SKOV3 b)和未处理组(SKOV3)为对照组,采用流式细胞术,分选不同数量的细胞进行实时PCR.结果显示,初步摸索的细胞数在50个以内,且随着细胞数目的增多,Ct值逐渐增大(P<0.05);SKOV3 h组hTERT基因mRNA表达最高,SKOV3 b组次之,SKOV3组表达最低(P<0.05).提示SKOV3细胞转导hTERT基因后可促进该基因的mRNA表达.同时用该法检测了单个卵裂球内hTERT基因的表达,为利用单细胞单基因遗传学诊断研究及肿瘤学研究提供基础.

反复宫腔内人工授精失败患者IVF助孕受精失败的高危因素及预测模型研究

目的:分析因反复宫腔内人工授精(IUI)助孕失败而行体外受精(IVF)助孕患者的受精失败危险因素,建立logistic回归预测模型进行受精失败风险的预测。方法:回顾分析2020年1月~2021年11月在广西壮族自治区妇幼保健院生殖医学中心因经3次IUI助孕未孕改行常规IVF治疗的201对患者夫妇的病例资料(IVF第1周期)。以受精率30%为临界值,将患者分为受精正常组(受精率≥30%)和受精失败组(受精率<30%),筛选存在组间差异的风险因素。把P<0.25的风险因素作为二元logistic回归的候选预测变量,进行logistic逐步回归分析(前向法:LR法),建立预测受精失败的模型。通过Hosmer-Lemeshow拟合优度检验和受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)对模型的拟合度、预测效果进行评价,并计算敏感度、特异度和总准确度,评价模型的准确性。结果:受精正常组和受精失败组的女方平均年龄、女方不孕年限、男方不育类型、男方不育年限、洗涤前精子前向运动精子百分率和精子正常形态百分率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。预测模型通过Hosmer-Lemeshow拟合优度检验显示模型拟合程度良好(χ^(2)=3.823,df=8,P=0.873)。logistic回归模型的ROC曲线下面积为0.780(95%CI为0.691~0.868)。以0.186作为预测概率分界值,灵敏度为74.2%,特异度为75.3%,总准确度为75.1%。结论:女方不孕年限和处理前精子形态正常率是反复IUI失败患者行IVF受精失败的高风险因素。本研究建立的IVF受精失败预测模型预测效能良好,能为胚胎实验室预判受精结局提供参考。

人类早期胚胎体外发育的分子基础

人类早期胚胎的发育过程是一个复杂的过程,不同的发育阶段的营养需求及代谢类型是在不断变化,并且基因表达也有所转变。胚胎在由母型调节向合子型调节转变的过渡期间细胞水平和分子水平上都发生了一系列复杂的变化,调节着胚胎的发育进程。

扩张时间对囊胚玻璃化冻融周期妊娠结局的预测价值

目的探讨囊胚扩张时间对玻璃化囊胚冻融周期临床结局的预测价值。方法回顾性分析2012年1月至2012年12月在广西壮族自治区妇幼保健院生殖医学中心接受冻融单囊胚移植的年龄小于38岁的患者资料。根据其复苏后囊胚的扩张时间分为三组:扩张时间≤1h(A组),扩张时间>1h,但<2h(B组),扩张时间≥2h(C组)。比较三组的临床妊娠结局。结果 A、B和C三组间的临床妊娠率差异有统计学差异(P<0.05)。A组的临床妊娠率显著高于B组和C组(分别为:69.70%vs 52.6%vs 29.21%,P<0.05),C组临床妊娠率显著低于B组(P<0.05)。而各组间的流产率差异无统计学差异(分别为10.29%vs 12.50%vs 19.23%,P>0.05)。结论囊胚扩张时间越短,其发育潜能越高,妊娠结局越好,对囊胚玻璃化冻融周期的妊娠结局有重要的预测价值。

囊胚质量对冻融周期单囊胚移植策略选择的影响

目的探讨囊胚质量对冻融周期中单囊胚移植策略选择的影响。方法回顾性分析2008年1月-2013年12月在广西壮族自治区妇幼保健院生殖中心施行冻融周期单囊胚移植患者的临床资料，依据囊胚质量将单囊胚移植的患者分为4组，分别为AA组（765个周期）、AB／BA组（645个周期）、BB组（1005个周期）、BC／CB组（262个周期），比较各组的临床结局，并在此基础上，进一步探讨临床结局不理想的BC／CB组改行双囊胚移植的临床结局。结果冻融单囊胚移植周期中，AA、AB／BA、BB和BC／CB组患者的临床妊娠率为61．4％（470／765）、51．2％（330／645）、40．5％（407／1005）、22．9％（60／262），活胎分娩率为52．2％（399，765）、41．2％（266／645）、30．4％（306／1005）、13．7％（36／262），而流产率分别为13．6％（64／470）、16．7％（55，330）、21．4％（87／407）、35．0％（21／60）；随着囊胚质量的下降，临床妊娠率、活胎分娩率也显著下降（P〈0．01），流产率则显著上升（P〈0．01）。当移植1个评级≥BB级囊胚时，获得了可接受的临床妊娠率（均〉40％）和活胎分娩率（均〉30％），而移植1个BC／CB级囊胚时的临床妊娠率和活胎分娩率仅为22．9％和13．7％，显著低于评级≥BB级囊胚的各组，分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。进一步比较单个与2个BC／CB级囊胚移植的临床结局，后者的临床妊娠率[分别为38．5％（67／174）、22．9％，P〈0．01]、活胎分娩率[分别为30．5％（53，174）、13．7％，P〈0．01]明显升高，流产率则由35．0％下降至17．9％（12／67），两者比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；后者的临床结局与移植单个BB级囊胚者（BB组）相似（P〉0．05），但多胎率增加达23．9％（16／67）。结论在冻融单囊胚移植周期中，随着囊胚质量的下降，其临床妊娠率和活胎分娩率也显著下降，而流产率则呈显著上升趋势。当囊胚评级≥BB级时，均可考虑施行单囊胚移植。

激光筛选不动精子ICSI后成功分娩健康婴儿

卵胞浆内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection, ICSI）是严重男性不育患者获得自身遗传学后代最有效的方法，而注射活精子是完成受精过程的前提条件。目前，判断精子是否存活主要取决于该精子是否运动。然而，在实施辅助生殖技术过程中，胚胎学家会遇到一些射出的精子或睾丸手术获取的精子完全不动。对于这些特殊的病例，如何快速有效地筛选活精子用于ICSI是胚胎学家亟待解决的问题。目前，低渗肿胀试验、伊红染色以及精子尾部柔软度试验等都是鉴定不动精子存活的方法[1-3]。然而，这些方法仍有局限性：低渗肿胀试验操作较繁琐且不适用于冷冻-解冻的精子，经伊红染色后的活精子无法再用于授精，精子尾部柔软度试验对操作者经验要求高等。研究报道，激光射击精子尾部后会引起精子尾部细胞膜通透性改变，使活精子呈现明显的震颤或卷尾现象，是一种有效从完全不动精子中筛选存活精子的方法[4]。不动精子直接加入到操作皿中，经激光照射后鉴定为存活的精子可直接吸入注射针用于ICSI。激光鉴定法具有简便、快速、准确等优点，而国内关于这方面的研究报道甚少。本文旨在探讨激光在鉴别完全不动精子的有效性，为体外受精-胚胎移植（In vitro fertilization-embryo transfer）中完全不动精子症患者的ICSI治疗提供依据。

hTERT重组第三代慢病毒载体的构建及其病毒包装鉴定

目的:构建携带人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的慢病毒表达载体及探索高滴度第三代慢病毒包装体系的建立,并观察hTERT基因在细胞中的表达调控。方法:将hTERT基因片段插入慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP中,构建慢病毒表达质粒pCDH-hTERT。通过酶切、DNA测序验证hTERT片段的准确性后,将pCDH-hTERT、pCDH-PACK-GAG、pCDH-PACK-REV和VSV-G共转染包装细胞293T,浓缩上清并测定病毒滴度获得重组慢病毒,并通过PCR及293T中hTERT蛋白的表达鉴定重组慢病毒。将重组慢病毒感染靶细胞,通过检测标记蛋白-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)、hTERT蛋白表达和端粒酶活性进一步验证pCDH-hTERT在细胞中表达。结果:pCDH-hTERT携带正确hTERT基因,将其与包装质粒共转染293T细胞能产生重组病毒;病毒基因组PCR证实hTERT基因插入,感染293T后可检测到hTERT蛋白的表达;目的基因hTERT能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞并稳定表达,荧光显微镜下可直接观察GFP;RT-PCR、Western blot及TRAP-PCR-ELISA法检测感染后的细胞,发现hTERTmRNA、hTERT蛋白的表达及端粒酶活性明显增强。结论:成功构建了第三代慢病毒表达载体pCDH-hTERT,并获得高效的重组慢病毒,能将外源hTERT基因导入靶细胞重建端粒酶活性,为构建永生化细胞系奠定基础。