TDZ诱导花生幼叶的不定芽和体细胞胚发生的组织学观察

花生实生苗幼叶接种于MS+TDZ 0.2mg/L+NAA 0.4mg/L诱导培养基上经诱导培养,继而转移到无激素培养基MS可获得不定芽和体细胞胚。组织学观察表明,花生不定芽和体细胞胚均起源于愈伤组织表层,不定芽为多细胞起源,而体细胞胚起源于单个胚性原始细胞。体细胞胚的发育经历多细胞原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚等时期发育成小植株。

花生成熟胚胚轴的植株再生和快繁

利用正交试验筛选出了以花生成熟胚胚轴为外植体获得较高频率的不定芽分化和植株再生的条件 ,并在此基础上对花生试管苗的快速繁殖进行了研究。研究表明 ,4d龄实生苗的花生胚轴 ,接种于MS +NAA0 4mg L +TDZ0 2mg L诱导培养基上培养 2 8d后 ,转移到MS0 可获得丛生的再生苗。将丛生苗分离 ,接种到P1培养基 (MS +NAA0 4mg L +BAP0 5mg L) ,小苗长大。把较大的试管苗切成带叶节的茎段 ,接种于含不同浓度的TDZ和BAP的快繁培养基 ,结果表明 ,TDZ0 2mg L最适宜试管苗的快繁 ,繁殖系数可达 4 8 月。试管苗经IBA诱导生根后 ,移栽田间 ,开花结果。

花生幼叶为外植体的植株再生系统的建立

本文报道利用花生成熟胚幼叶为外植体获得高频植株再生的方法 ,为花生转基因提供有效的受体系统。通过诱导培养基TDZ、BA、NAA的浓度以及种子萌发时间、继代培养基种类五个因素不同水平的正交试验 ,筛选出了分化高频发生的最佳组合为 :MS培养基中应含有TDZ 1 .0 μmol/L、BA 0 .4μmol/L、NAA 5 .0 μmol/L ,种子萌发 4d,继代培养基为MS0 。本研究表明 ,五因素中诱导培养基TDZ浓度为诱导花生幼叶分化的主要影响因素 ,其次为继代培养基、种子萌发时间 ,而诱导培养基中BA和NAA的浓度作用较小。试管苗生根后移栽田间 。

花生体细胞胚发生发育过程中淀粉代谢的动态变化

将花生实生苗的幼对接种于MS固体诱导培养基上诱导体细胞胚发生 ,用PAS染色法观察了体细胞胚发生发育过程中的淀粉代谢的动态变化 .结果表明 ,在体细胞胚的发育过程中 ,淀粉表现出两次积累高峰 ,第一次在胚性细胞团中 ,淀粉粒大而密集 ;随着胚性细胞的分裂 ,淀粉逐渐被消耗 ,到多细胞原胚期胚体内淀粉趋于消失 .球形胚期 ,淀粉粒又开始积累 ,出现第二次积累高峰 ;到成熟胚期 。

康乃馨试管苗生根的初步研究

初步研究了不同培养方式和不同培养基对康乃馨试管苗生根的影响 .结果表明 ,液体培养诱导生根效果优于固体培养 ,表现为根分化早、生长快、生根率高、生根所需时间短 ,从而可缩短生产周期 ;液体培养条件下 3种培养基即 1/2MS ,1/2MS大量元素和全量MS(均含质量分数为 2 %的白糖 ,不加肌醇 )的生根效果相近 ,生根率均达 10 0 % ,移栽成活率均在 90 %以上 ,因此可采用 1/2MS ,以节约试剂、降低成本 .

不同激素对花生离体分化的影响

对TDZ和 2 ,4 D等激素在花生成熟胚外植体分化中的影响进行了研究。结果表明 ,花生成熟胚 3～ 5d龄实生苗的幼叶和胚轴在低浓度TDZ的诱导下 ,可分化产生高频不定芽和少量体细胞胚 ,转到无激素MS培养基或MS +BA 0 .5mg/L+NAA 0 .4mg/L的培养基后形成丛生苗。丛生苗分离后转入含 1 /2MS(大量元素 ) +IBA 0 .4mg/L的培养基中诱导生根 ,可形成完整的再生植株。幼叶分化率高于胚轴 ,但胚轴分化成苗速度快。无菌水浸泡 1 6～ 2 4h的胚轴在 5～30mg/L2 ,4 D的诱导下 ,分化产生低频不定芽 ;而胚叶则产生高频体细胞胚 。

植物材料表面消毒方法的改进

苹果枝条用０．１％ＨｇＣＩ2磁力搅拌消毒１５-２０ｍｉｎ，无菌水磁力搅拌清洗５次，每次５ｍｉｎ。污染率和杀死率在１０％以下，成功率９０％左右，且无褐化。

迷你玫瑰组织培养中细菌污染的防止

迷你玫瑰组织快繁体系连续继代过程中，插入培养基的试管苗切口处有云雾状污染菌生长，其中2种为革兰氏阴性杆菌，1种为革兰氏阳性杆菌。培养基中加入氨苄青霉素(50～150mg·L^-1)抑制污染菌生长，不影响试管苗不定芽分化率，50mg·L^-1的氨苄青霉素明显促进染菌苗的生根。加入硫酸丁胺卡那霉素(25～100mg·L^-1)有杀灭污染菌的作用，但对试管苗则有不同程度的毒害(叶片、叶柄和茎段出现黄化现象)，对不定芽分化和生根也有明显的抑制。

2,4-D诱导的花生体细胞胚发生的组织学研究

花生成熟胚胚叶在MS附加 2 0mg/L 2 ,4_D的培养基上诱导 2 0d后 ,转移至无激素培养基MS0 继续培养 ,可获高频体细胞胚发生。组织学观察表明 ,体细胞胚起源于胚叶上表皮及表皮下数层细胞 ,这些细胞脱分化形成细胞质浓厚、细胞核大的胚性细胞团 ,胚性细胞团继续分裂形成体细胞胚。体细胞胚的发育过程经历球形胚、心形胚、鱼雷胚。

TDZ促进花生外植体分化及基因转化

以花生成熟胚的上胚轴和胚叶为外植体 ,通过农杆菌介导转化Bt和CpTI双基因 ,在共培养基和诱导培养基中加入TDZ诱导不定芽和体细胞胚 .实验证明 ,TDZ有明显促进花生外植体分化的作用 ,当诱导培养基组成为TDZ 0 .3mg/L +NAA 0 .4mg/L ,诱导时间为 2 8d ,分化培养基为MS时采用TDZ发胚培养基萌发的轴外植体分化率最高 ,可达73% ,GUS基因阳性率 3.5 % .当诱导培养基组成为TDZ 0 .2mg/L +NAA 0 .4mg/L ,诱导时间为 2 1d ,分化培养基为MS时水萌发种胚叶外植体分化率最高 ,达 5 6 % ,GUS基因阳性率 2 .5 % .

自由基清除剂对花生子叶组织培养的影响

加一定浓度的维生素Ｃ、维生素Ｅ、还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）、甲酸钠培养花生子叶横切片，处理组愈伤组织和胚状体的形成早于对照组，其生长状况也明显好于对照组．ＳＯＤ及ＰＯＤ活性明显升高，ＭＤＡ含量下降．表明这些物质作为自由基清除剂能改善培养花生组织的生长状况，有利于愈伤组织的形成和生长．

添加物影响花生外植体再生及基因转化

取花生上胚轴为外植体,在农杆菌介导的基因载化过程中,在共育时加入一定量的烟草或马铃薯提取物,在共培养基和分化培养基中分别加入0 179mM的还原型谷胱甘肽(GSH)和0 147mM的VC+0 035mM的VE,进行培养。结果表明,添加15%(W/V)的烟草或马铃薯提取物,胚轴生长状况明显好于对照组,分化率较对照组提高10%～23 5%。自由基清除剂能明显减轻外植体褐化现象,促进外植体再生。GUS检测阳性率最高可达10 2%。

花生成熟胚叶体细胞胚形成过程中的过氧化物酶同工酶研究

以花生成熟胚的幼叶做外植体诱导体细胞胚发生．从外植体培养到子叶胚形成期间，可溶性蛋白浓度初期下降，以后相对稳定；过氧化物酶活性逐渐升高，过氧化物同工酶谱带由２条陆续增加到１０条，球形胚形成以后同工酶谱带不再变化．

花生(Arachis hypogea L.)体细胞胚胚性特异蛋白的研究

花生萌发３ｄ的胚叶在诱导培养基上出现高频率的体细胞胚发生．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明：在体细胞胚发生过程中，诱导第三天开始出现３条新的蛋白谱带，７ｄ后出现２条新带，１５ｄ后又出现３条；而在非胚性组织中检测到抑制性的特异蛋白条带．

花生基因工程

建立花生遗传转化和高效植株再生系统是花生基因工程的关键。随着花生组织培养、植株再生技术和基因转化体系的完善,已获得抗病、抗虫和提高品质的转基因花生植株,取得了突破性进展。农杆菌介导法和微弹介导法是花生基因工程的主要方法。