利用抗、染根肿病F2群体构建大白菜AFLP遗传连锁图谱

以易感染根肿病的大白菜(Brassica campestrisssp. pekinensis)自交系94SK和抗根肿病的CR Shinki DH系为亲本,通过杂交获得F1,并选择一株F1植株进行自交,构建了F2作图群体。利用扩增出与根肿病抗性基因CRb连锁标记的17对AFLP引物组合Pst+GNN/Mse+CNN构建大白菜遗传连锁图谱。这些AFLP引物组合共扩增出322个亲本间表现出多态性的AFLP标记。应用其中6个与CRb基因紧密连锁的AFLP标记转化成的SCAR标记和清晰可见的大于100 bp的211个AFLP标记构建了一张包含179个标记位点1、0个连锁群、覆盖长度为576 cM,平均图距3.3 cM的遗传图谱。抗根肿病基因CRb定位在第一条连锁群9 cM的范围内。研究表明,利用PstⅠ/MseⅠ和EcoRⅠ/MseⅠ引物组合以及其他分子标记类型构建遗传连锁图谱,并有效减少遗传图谱中聚集和间隙现象的产生提供了一定的科学依据。同时,该图谱的构建对在基因组范围内通过分子标记辅助选择选育大白菜根肿病抗性品种奠定了基础。

大白菜的适宜AFLP-Pst Ⅰ/Mse Ⅰ引物组合

基于PCR的DNA指纹鉴定技术AFLP广泛应用于生物多样性、遗传图谱构建、基因定位、分子系统发育和品种鉴定等方面。为了筛选出大白菜适宜的AFLP引物组合,研究以抗根肿病大白菜双单倍体CR Shinki、感病自交系94SK及其后代F2构成的纯合抗病和纯合感病DNA混合池为材料,利用256对Pst Ⅰ/Mse Ⅰ引物组合进行了AFLP分析。结果表明:平均每个组合检测到55条带,共扩增13079条带,平均每1000条带检测到1.30个根肿病抗性基因连锁标记;多态性带数为3167条,双亲间多态性频率约为0.24;扩增带数与多态性带数呈线性正相关,引物组合中的不同GC含量与扩增带数和多态性带数存在显著性差异,并表现出线性负相关。筛选出的适宜53对引物组合共扩增出4381条带,占总扩增片断的33.50%,平均每对扩增出83条,其中9个组合扩增出与抗根肿病基因连锁标记。