L-谷氨酰胺对麻疯树再生不定芽生根效果的影响

[目的]建立促进麻疯树再生不定芽生根的组培体系。[方法]通过在诱导麻疯树再生不定芽分化生根的培养基(MS+0.3 mg/L IBA)中添加一定浓度的L-谷氨酰胺(Gln)来达到促进芽条生根的效果。[结果]在诱导麻疯树再生不定芽分化生根的培养基中添加20 mg/L Gln,可以显著提高芽条的生根率,生根率可达40%~50%。同时,可以在短时间内就获得较高的生根率,显著缩短了获得完整植株的周期。此外,还减少了生根过程中常见的再生植株叶片发黄、容易脱落现象的发生,显著提高了所获得的再生完整植株的质量。[结论]麻疯树生根培养基的最优组合为添加0.3 mg/L IBA和20 mg/L Gln的MS培养基,应用该研究建立的组培体系可显著改善麻疯树再生不定芽的生根效果。

黄肿树JcFATA基因原核表达载体构建及表达体系优化

植物脂酰-酰基载体蛋白硫酯酶A(fatty acyl acyl carrier protien thioesterase,FATA)是脂肪酸积累过程中的关键酶,直接调控脂肪酸的含量与组成。目前有关黄肿树脂酰-ACP硫酯酶A基因(Jc FATA)(Gen Bank登陆号:EU267122.2)的功能研究还未见报道。对Jc FATA基因进行原核表达是研究Jc FATA基因功能的一种重要手段,而开展这项研究的前提是构建原核表达载体。因此,本研究以黄肿树c DNA为模板克隆出Jc FATA基因原核表达片段,将其连接到带有His标签的原核表达载体p Cold I上,将所构建的重组载体p Cold I-Jc FATA转入大肠杆菌Rosseta。为了表达更多的可溶性His-Jc FATA融合蛋白,本文还探讨了不同IPTG浓度(0.1、0.5、1.0 mmol/L)、不同诱导温度(15、25、37℃)和不同诱导时间(0、15、30 h)对蛋白表达的影响,诱导产物经超声波裂解破碎后,利用SDS-PAGE比较分析融合蛋白表达量,从而确定最佳的表达体系。结果表明,当添加诱导剂IPTG的浓度为0.5 mmol/L,诱导时间为15 h,培养温度为25℃时,可以获得较多的可溶性融合蛋白(His-Jc FATA)。此外,进行蛋白纯化时发现,在镍柱上进行第5次洗脱时所获得纯化蛋白质量最佳。本研究的结果可为进一步研究Jc FATA基因的功能奠定基础。