医学留学生生物化学与分子生物学实验教学金字塔模型浅谈

生物化学和分子生物学实验是医学相关专业的基础课程,对于医学研究和科研思维的培养有重要分量。医学留学生来自于世界各国和地区,有着不同的文化背景、语言能力和学习基础。金字塔模型在医学留学生生物化学和分子生物学实验课程教学中实施,并在教学方法,教学内容等方面阐述,以达到提升教学效果的目的。

三氧化二砷联合偏钒酸钠对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)联合偏钒酸钠(Na VO3)对人白血病细胞HL-60增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度的As2O3、Na VO3单药或联合(1×10-8mol/L Na VO3联合5×10-3mol/L As2O3)对HL-60细胞的生长抑制作用;琼脂糖电泳检测DNA条带;Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察不同处理组中细胞核的变化;以Annexin V/PI双染色流式细胞术检测5×10-3mol/L As2O3、1×10-8mol/L Na VO3单药或联合对HL-60细胞凋亡的影响。结果 MTT结果显示As2O3能抑制HL-60细胞的增殖,并呈剂量和时间效应;低浓度的Na VO3促进细胞增殖,高浓度(≥1×10-8mol/L)的Na VO3抑制细胞的生长;两药联合抑制作用强于对应浓度单药抑制作用(P<0.05)。HL-60细胞经As2O3和较高浓度(≥1×10-8mol/L)的Na VO3处理24 h后均可见到DNA梯形条带。Hoechst 33258染色结果发现HL-60细胞经As2O3和较高浓度(1×10-9mol/L Na VO3)的Na VO3处理24 h后可见细胞核呈现核浓缩现象。流式细胞术结果显示5×10-3mol/L As2O3和1×10-8mol/L Na VO3联合作用于HL-60细胞所诱导的早期凋亡细胞显著多于单独用药(P<0.05)。结论 As2O3及浓度大于1×10-8mol/L Na VO3均可有效地抑制体外白血病细胞HL-60的增殖并诱导细胞凋亡,两药联合对于抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡具有加强作用。

六味地黄丸对绝经期肾阴虚骨质疏松症的基因表达调控数据分析

目的利用生物信息学分析工具,从基因调控的角度阐述六味地黄丸治疗绝经期肾阴虚骨质疏松症的分子机制。方法运用生物信息学分析工具QOE、DAVID和STRING,对美国国家生物信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)中的GEO数据库中六味地黄丸治疗绝经期肾阴虚骨质疏松症的相关数据进行挖掘分析。结果生物信息学分析显示中药六味地黄丸在治疗绝经期肾阴虚骨质疏松症的过程中基因TNP1和MAP3K10的表达显著增加,而ZNF家族基因和XRN1、XPO1、NUP54等基因的表达显著下降。这些差异基因的功能富集和相关作用机理分析显示,下调XRN1基因和ZNF家族基因的表达可以降低其对雌激素表达的抑制;上调TNP1基因的表达促进雌激素与雌激素受体结合;上调MAP3K10基因的表达并下调XPO1基因和NUP54基因的表达能降低免疫应答。结论六味地黄丸对绝经期肾阴虚骨质疏松症的有益影响主要是通过促进雌激素表达及与其受体结合,并平衡免疫应答而促进骨组织的形成,从而达到改善骨质疏松。

第19天微小残留病检测在儿童急性淋巴细胞白血病中的预后意义及危险因素分析

目的探讨使用中国抗癌协会儿童肿瘤协作组(CCCG)急性淋巴细胞白血病(ALL)2015方案治疗的患儿中,第19天微小残留病(D19 MRD)≥1%作为评价早期治疗反应对预后的意义及其风险因素。方法回顾性分析2015年1月1日至2018年12月31日在本中心使用该方案治疗的ALL患儿病历资料共243例。以诱导化疗D19 MRD≥1%为节点,分为早期治疗反应良好(D19 MRD<1%)组和早期治疗反应不良(D19 MRD≥1%)组。比较两组生存时间的差异并分析D19 MRD≥1%的风险因素。结果D19 MRD<1%组3年总生存率(OS)优于D19 MRD≥1%组(100%vs 90.2%,P=0.004)。D19 MRD<1%组3年无事件生存率(EFS)优于D19 MRD≥1%组(97.6%vs 71.6%,P<0.001)。单因素分析表明纵膈侵犯,T-细胞免疫分型、TEL/AML1(ETV6/RUNX1)融合基因及第5天外周血存在幼稚细胞的风险系数(OR)及95%置信区间(CI)分别是4.47(0.275~72.968,P=0.034)、5.250(1.950~14.133,P=0.02)、0.330(0.112~0.970,P=0.036)及4.407(1.782~10.895,P=0.01)。初治危险度(P<0.001),初治白细胞计数分等级间(P=0.018)及其数量(P=0.027),第5天幼稚细胞数量(P<0.001)在两组间均有差异。多因素分析表明初治危险度为中高危,第5天外周血存在幼稚细胞是D19 MRD≥1%的独立风险因素,其OR及其95%CI分别是2.889(1.193~6.996,P=0.019)、4.477(1.692~11.843,P=0.003)。结论D19 MRD≥1%是影响预后的因素;纵膈侵犯、T细胞免疫分型及第5天外周血存在幼稚细胞是风险因素,而TEL/AML1融合基因是保护因素;中高危及第5天外周血存在幼稚细胞为独立风险因素。

石榴皮对非酒精性脂肪肝病的基因表达调控数据分析

目的:应用生物信息学分析方法,阐述石榴皮对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的基因表达调控机制。方法:运用生物信息学分析工具QOE、DAVID和STRING,对NCBI的GEO数据库中石榴皮对NAFLD可能治疗作用的相关数据进行挖掘分析。结果:分析喂养与未喂养石榴皮的高脂饮食大鼠基因芯片数据,筛选出8个差异表达基因。其中包括7个高表达基因:CAD、C1QBP、RPL10、RPS7、NHP2、CARM1、LPL;1个低表达基因:NR3C1。这些基因主要涉及的功能包括:嘧啶核酸的生物合成、RNA的修复与加工、核糖体的生物合成、核糖核蛋白复合体、细胞质和细胞器重要物质、脂蛋白生物功能相关基因等。结论:石榴皮可能通过上调LPL、CARM1、C1QBP、NHP2、RPL10、RPS7、CAD和下调NR3C1基因表达的分子机制,促进甘油三酯(TG)的水解,降低血液中游离脂肪酸的含量,缓解胰岛素抵抗,增强肝细胞的抗氧化应激能力及维持线粒体功能的稳定,进而维持肝细胞的正常生物代谢,从而对NAFLD具有一定的疗效。

hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的构建及其在A549肺癌细胞中的表达

目的构建hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒,并在A549肺癌细胞中表达hGPR177蛋白。方法利用生物分析软件DNAMAN6.0选取合适的穿梭载体PCDNA3.1(+)和酶切位点。用质粒提取试剂盒对穿梭载体PCDNA3.1(+)及含有hGPR177基因pReceive-B04质粒进行抽提,并对其进行双酶切。使用DNA连接酶把hGPR177基因与PCDNA3.1(+)酶切片段连接,重新构建hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒。将重组质粒通过电转的方式转导进A549肺癌细胞。运用细胞培养技术,培养已电转hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的A549肺癌细胞。结果利用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒的质量为6999bp。经过机械破碎后获取细胞提取物,电泳鉴定出现GPR177蛋白带。结论成功构建了hGPR177/PCDNA3.1(+)重组质粒,并在A549肺癌细胞表达系统中表达出人GPR177蛋白。

我们的数码思维

非线性网络学习资源在改变着我们的思维方式。非线性网络学习资源的不连续性、跳跃性使我们形成了数码思维。这种数码思维方式更易激发创新意识。

芪参益气方对心肌梗死治疗作用分子机制的生物信息分析

目的运用生物信息学分析工具，从基因的角度阐述芪参益气方对心肌梗死治疗作用的分子机制。方法对基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus，GEO）进行大数据分析，采用酷核组学分析器（Qlucore Omics Explorer,QOE）进行差异基因分析，筛选出治疗作用中的功效基因分子；采用可视化基因注释系统数据库（Database for Annotation，Visualizationand Integrated Discovery online Gene Annotation system，DAVID）进行基因功能富集分析，确定所筛选基因在生物进程中的功能；采用基因／蛋白质相互作用检索数据库（Gene／protein interaction database，STRlNG）进行分析，确定关键基因在治疗过程中分子机制网络图。结果经分析，推论出芪参益气方在对心肌梗死治疗过程中主要上调了包括NFIL3、ARNTL、DBP、FGD4等特殊基因和基因受体基因（NR1D1、NR1D2）的表达，使得生物节律基因、特定结合基因（BHLHE40／41）得到调控。结论基因层面上，芪参益气方可调控细胞再生、炎症抵抗、酶活性等相关基因的表达，使心血管和心脏代谢相关的心肌梗死得到治疗。