基于ISO20387样本库质量控制之人员比对分析

目的基于ISO20387生物样本库通用要求,通过不同工作年限的技术人员同时进行DNA提取实验,探索通过人员比对方法对样本库人员进行能力评估。方法样本库3位不同工作年限的技术人员使用相同样本设备试剂进行DNA提取,全过程严格遵循操作规程,对DNA得率进行分析,使用Qubit对完整性进行评价。结果3位不同操作人员提取的DNA得率和Qubit结果有明显差别,日常工作人员与技术主管操作无差异,新加入实验室人员与技术主管有明显差异。结论人员操作对样本质量有明显影响,人员比对作为实验室质量保证的途径之一,方法较为灵活、简便,可用于样本库人员能力评估,通过人员能力评估可以及时发现人员操作是否合格,保证生物样本处理的质量。

中国脑血管病多中心临床研究生物样本库建设模式探讨

目的开发适合我国的脑血管病多中心临床研究生物样本库的建设及管理模式,为提高脑血管病专病队列研究生物样本质量、促进资源共享提供技术保障。方法基于国际标准化组织等机构的标准化思路,参考多中心临床试验项目经验,结合脑血管病专病队列研究实际需求,形成我国脑血管病多中心临床研究生物样本库建设及管理模式。从场地、设施设备、操作规程、质量控制等多个维度,建立多中心临床研究生物样本管理流程。结果依据本研究提出的建设要求,开发了天坛脑血管病多中心临床研究生物样本管理系统,建立了多中心临床研究生物样本质量管理体系。结论天坛脑血管病多中心临床研究生物样本库实现了各中心统一、标准、实时、全流程的质量管理,可以保障多中心临床研究项目的生物样本质量水平,为脑血管病筛查、预警、诊断与干预等精准医学研究提供高质量生物样本资源。

脑血管病生物样本库建设标准研究

目的开发适合我国脑血管病精准医学研究的生物样本库建设及管理标准,为建设可开发共享的脑血管病生物样本库提供技术保障。方法参考国际大型生物样本库建设经验,基于国际标准化组织等机构的标准化思路,形成我国脑血管病生物样本库建设标准框架,从场地设施、设备、操作规程、数据标准、信息化等多个维度,对样本库的建设提出技术要求。结果依据本研究提出的建设标准,建立了符合国际标准的天坛脑血管病生物样本库运行及质量管理体系,建成标准化采集、处理、保藏的10万人次脑血管病临床研究生物样本资源平台。结论天坛脑血管病生物样本库具有样本量充足、多样、多时点采集的生物样本资源,并实现了标准化的信息存储,可为对接脑血管病多组学研究,脑血管病精准筛查、预警、诊断与干预等精准医学研究提供技术支撑。

皮层下动脉硬化性脑病的临床及脑血管病理特点

脑血管疾病和认知功能障碍是最常见和最重要的老年期疾病,传统上认为两者是不同的状况(病因、病理、发病机制上),对两者常进行鉴别诊断并给予不同的处置。然而,近20年的大型流行病学研究、危险因素分析、大样本长期纵向随访研究和神经影像学的研究证据则强烈地提示两者间的相关性远远超过两者间的不同,它们有着很多共同的危险因素、病理上相互重叠、发病机制上相互作用、临床表现和影像发现上难以区分、治疗也大同小异。因此,对于通过认识Alzheimer病才了解认知功能障碍的绝大多数医师,迫切需要对血管性认知功能损害(VCI)有更新的了解并积极在临床实践中深化认识。掌握对VCI的评估工具、亚组分型,了解最常见的皮质下小血管病型的病理机制、危险因素和临床表现,都是临床应用所必需的。针对众说纷纭的治疗问题,理清思路、明确标准则是当务之急。

2005年血管性认知功能障碍研究进展

血管性认知功能减退(Vascular cognitive impairment,VCI)或血管性痴呆(Vascular dementia,VaD)的诊断高度依赖于实际采用的定义.在纳入心血管健康研究(Cardiovascular health study,CHS,Cognition study)的480例痴呆患者中,Lopez等证明了脑影像学检查结果及诊断标准的选择对VaD分类的影响.……

PAS综合疗法对兔动脉粥样硬化病变的干预

目的探讨普罗布考抗氧化、氯吡格雷抗血小板制剂、阿托伐他汀联合用药对兔动脉粥样硬化病变的干预作用。方法新西兰雄性大白兔36只随机分为4组,分别给予正常饮食及高脂饮食6周后高脂组再分为3组:高脂组,高脂+阿托伐他汀2.5 mg/(kg.d)组,高脂+普罗布考(1.0 g/d)+氯吡格雷5 mg/(kg.d)+阿托伐他汀2.5 mg/(kg.d)PAS组,继续喂养4周后观察主动脉动脉粥样硬化斑块形成情况,分别采用HE染色和免疫组织化学染色观察斑块部位内膜病变程度和炎症细胞的表达。结果高脂组主动脉有粥样硬化病变形成,病变内有大量巨噬细胞聚集。阿托伐他汀和PAS组动脉粥样硬化病变明显减轻,斑块部位内膜面积和厚度下降,巨噬细胞数量显著减少,与高脂组比较差异具有显著性(P<0.01),联合治疗组优于阿托伐他汀组(P<0.05)。结论抗氧化、抗血小板、他汀联合用药对动脉粥样硬化斑块的形成和炎症具有明显的干预作用,其作用优于单纯使用阿托伐他汀,说明联合治疗对于稳定斑块、以及干预缺血事件的发生较单纯使用他汀类药物更具有临床应用的意义。

普罗布考、氯吡格雷、阿托伐他汀综合疗法对兔动脉粥样硬化相关炎性因子的抑制作用

目的探讨普罗布考、氯吡格雷和阿托伐他汀联合用药对兔动脉粥样硬化相关炎性因子的抑制作用。方法新西兰雄性大白兔36只随机分为4组,分别给予正常及高脂饮食,6周后高脂组再分为高脂组、高脂+阿托伐他汀组、高脂+普罗布考、氯吡格雷、阿托伐他汀联合干预组,继续喂养4周后采用免疫组织化学染色法观察主动脉斑块部位炎性因子的表达。结果高脂组主动脉中血管细胞粘附分子1、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的表达明显增加。阿托伐他汀组炎性因子血管细胞粘附分子1、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的表达下降,与高脂组比较差异具有显著性(P<0.05),联合干预组血管细胞粘附分子1、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1的表达下降更为明显(P<0.01),与阿托伐他汀组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论抗氧化、抗血小板、他汀联合用药对动脉粥样硬化炎性因子的表达具有明显的抑制作用,其作用优于单纯使用阿托伐他汀。

经颅多普勒超声操作标准:第一部分——检查方法

经颅多普勒超声(TCD)作为一种常规检查手段在临床上的应用越来越广泛,但各个医院的检查程序和诊断标准并不统一。因此,国际专家组织结合基础理论研究及临床经验,开始规范TCD的操作方法,统一诊断标准,确定使用范围。第一部分介绍脑血管疾病的频谱TCD检查。颞窗常用于观察大脑中动脉(MCA)、大脑前动脉(ACA)、大脑后动脉(PCA)、颈内动脉C1段(ICA)及前交通动脉(AComA)、后交通动脉(PComA)的侧支循环;眼窗用于观察眼动脉(OA)和ICA虹吸部;枕窗用于观察椎动脉(VA)和基底动脉(BA)。尽管Willis环的构成存在显著的个体差异,但完整的诊断性TCD检查还是应该评价双侧的脑动脉,包括:大脑中动脉M2段(深度范围30～40mm),M1段(深度范围40～65mm)[大脑中动脉M1段中点的深度位于50mm处(范围45～55mm),平均长度约16mm(范围5～24mm)],大脑前动脉A1段(深度范围60～75mm),颈内动脉C1段(60～70mm),大脑后动脉P1～P2段(平均深度63mm,范围55～75mm),前交通动脉(70～80mm),后交通动脉(58～65mm),眼动脉(40～50mm),颈内动脉虹吸部(55～65mm),椎动脉(40～75mm),以及基底动脉近端(75～80mm)、中段(80～90mm)、远段(90～110mm)。经下颌下窗检测颈段ICA远端(40～60mm)可以计算VMCA/VICA比值或Lindegaard指数,用于评价蛛网膜下腔出血后血管痉挛的程度。诊断性TCD检查的目的是探查上述动脉节段的特征性频谱,确定动脉血液流动方向,计算脑动脉血流速度和搏动指数。对于频谱多普勒和具有M-模的超声装置来说,建立标准化的检查程序,诸如选择探头的位置、角度和深度及血管的区分等,将有助于该项检查的临床应用和推广。

灯盏细辛对大鼠缺血-再灌注损伤的保护作用

目的:评价灯盏细辛对大鼠缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:将40只SD大鼠随机分为两组,分别为生理盐水组和灯盏细辛治疗组,每组20只。①生理盐水组,造模成功后,每天给予1ml/100g生理盐水腹腔注射。②灯盏细辛治疗组,造模成功后,每天给予1ml/100g灯盏细辛注射液腹腔注射。7d后处死动物,取脑,每组10只行TTC染色,测量梗死体积,计算出梗死体积百分比;10只行免疫组化染色,测量MMP-9表达水平。结果:灯盏细辛治疗组和生理盐水组梗死体积百分比分别为(8.01±0.86)%和(9.49±0.76)%,灯盏细辛治疗组有减小梗死体积的趋势,但两组无显著性差异;脑组织免疫组化染色MMP-9表达分别为(31.89±12.50)和(37.08±6.05);两组有显著性差异。结论:灯盏细辛可显著降低MMP-9表达及减小梗死体积,对缺血脑组织具有保护作用。

社区2型糖尿病人群中糖化血红蛋白与颈动脉斑块的相关性研究

目的分析社区2型糖尿病人群中糖化血红蛋白和颈动脉斑块危险性的关系。方法在社区人群中进行横断面调查,经统一问卷调查获得人口学、行为生活方式、疾病史、用药史等信息,并进行糖化血红蛋白检测及颈动脉超声检查。纳入自报有医生明确诊断的糖尿病患者或正在服用降糖药或胰岛素者,年龄≥40岁,共552例。通过单因素和多因素Logistic回归,分析糖化血红蛋白含量与颈动脉斑块相关性,进行分层分析,研究不同特征人群的糖化血红蛋白与颈动脉斑块相关性的差异。结果纳入的2型糖尿病患者(男218例,女334例)中,颈动脉斑块检出率为41.9%,糖化血红蛋白平均浓度为(7.25±1.53)%。单因素Logistic回归分析中,糖化血红蛋白浓度每升高一个单位,颈动脉斑块危险度的比值比为1.10(95%CI 0.98~1.22,P=0.108),调整了年龄和性别因素后的比值比为1.13(95%CI 1.00~1.26,P=0.047),当调整疾病史、吸烟、饮酒、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、体重指数(body mass index,BMI)、休闲体育锻炼等级、药物服用情况、睡眠时间、卒中家族史后,多因素Logistic回归模型显示,糖化血红蛋白浓度每升高一个单位,颈动脉斑块危险度的比值比为1.16(95%CI 1.02~1.33,P=0.025)。对糖化血红蛋白浓度进行分类处理后,高水平组是低水平组颈动脉斑块检出危险性的1.71倍(95%CI 1.06~2.76,P=0.028),中水平组是低水平组危险性的1.40倍(95%CI 0.87~2.25,P=0.170)。分层分析结果显示,年龄<60岁组、BMI≥24kg/m^2组、伴发高血压组中糖化血红蛋白浓度和颈动脉斑块危险性具有相关性。结论在社区2型糖尿病人群中,糖化血红蛋白浓度与颈动脉斑块检出呈现相关关系。

PDE4D基因SNP83多态性与缺血性卒中预后的相关性研究

目的探索磷酸二酯酶4D（phosphodiesterase 4D,PDE4D）基因的基因多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）83（rs966221）与缺血性卒中预后的相关性。方法连续入组2009年10月~2011年7月北京天坛医院神经内科住院的缺血性卒中患者736例,采用Sequenom Massyarray技术检测SNP83位点基因分布情况。采用Logistic回归模型分析不同遗传模型下该位点基因多态性与卒中后3个月联合终点事件（包括卒中复发、死亡和其他血管事件等）和预后不良[改良Rankin量表（modified Rankin Scale,m RS）评分〉1]的相关性,并对卒中亚型进行分层分析。结果本研究共纳入736例患者,其中677例患者完成3个月的随访,失访率为8.02%。与未发生联合终点事件组的患者相比,发生联合终点事件组的患者年龄较大[（67.02±0.70）vs（59.98±3.35）,P〈0.001],既往心房颤动病史比例较高（9.3%vs 3.7%,P=0.048）,入院时美国国立卫生研究院卒中量表（National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS）评分较高[11（5~16）vs 5（2~9）,P〈0.001],且差异具有显著性,而两组的其他基线信息（如性别、民族、婚姻状况、居住方式、既往吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、高脂血症和冠状动脉粥样硬化性心脏病等）差异无显著性（P〉0.05）。进行基因多态性分析发现,与未发生联合终点事件患者相比,发生联合终点事件患者中SNP83AG＋GG基因型的比例较高（50.0%vs 36.7%,P=0.007）,调整年龄、入院时NIHSS评分和既往心房颤动病史,Logistic回归分析显示该位点在显性模型（AG＋GG vs AA）下与缺血性卒中后联合终点事件发生相关[调整后的比值比（odds ratio,OR）1.84,95%可信区间（confidence interval,CI）1.04~3.26],但并未发现该位点与卒中预后不良相关。结论 PDE4D基因SNP83 AG/GG基因型与缺血性卒中后联合终点事件发生相关。

基于下游实验的样本质量分析

目的依据ISO 20387生物样本库通用要求,通过下游实验对现有的白细胞提取质量进行验证,探索适用于生物样本库认可的样本前处理方法。方法对2021年1月至2022年6月使用白细胞进行靶向捕获测序的样本进行DNA提取,通过OD260/280、OD260/230、测量浓度,计算得率对DNA质量进行评价。结果5850例白细胞提取DNA,纯度足够高的样本占比为86.24%,得率大于10μg满足实验需求的样本占比为92.51%。结论将红细胞裂解步骤提前,在新鲜样本时进行,使用纯度较高的白细胞进行DNA提取,通过验证,上述提取方法可行,高纯度样本有效减少了红细胞的干扰,为样本库探索未知研究提供更为可靠的生物样本。

疫情防控常态化下冷链生物样本转运院感监测探讨

目的新冠疫情常态化大环境下,探索适用于生物样本库的院感检测管理流程。方法回顾分析北京天坛医院生物样本库2021年8月至2022年1月分中心返回样本,消杀后对内外包装、样本冻存盒表面采样,进行核酸检测分析。结果所有核酸检测结果,均为阴性,转运地点与当时的中高风险区域进行比较核对,未有中高风险转运交集。结论疫情防控常态化的大环境下,做好人物同防,保证生物样本库环境、人员和样本的安全,为临床研究提供安全可用的高质量样本。

外科手术对急性幕上颅内出血患者的影响

1文献检索 根据研究检索策略纳入24个有关急性幕上颅内出血(ICH)外科手术治疗效果评价的研究,其中有6项独特的平行随机临床试验符合入选标准并被纳入系统评价中(见表1),研究结果发表在1989～2003年.根据证据水平,系统评价剔除了18项研究,包括1项非随机化临床试验、3项前瞻性队列研究、5项病例对照研究、8项病例系列报告以及1项试验设计不能被确定的研究. ……

YKL-40与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的相关性

目的探讨YKL-40与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的相关性。方法在社区人群中进行横断面调查,经统一问卷调查获得人口学、行为生活方式、疾病史、用药史等信息,经彩色超声诊断仪检查颈动脉斑块情况。根据责任斑块的彩色超声成像影像学特征分为稳定性斑块组和不稳定性斑块组,并采用酶联免疫吸附法检测YKL-40水平。按四分位数,将YKL-40浓度分为低水平组(<17.96 ng/ml),低-中水平组(17.96-33.40 ng/ml),中-高水平组(33.40-61.59 ng/ml),高水平组(≥61.59 ng/ml)。采用Logistic回归模型分析YKL-40与颈动脉斑块稳定性的相关性。结果本研究共纳入296例有颈动脉斑块的研究对象,其中男性116例(60.8%),中位年龄69岁,YKL-40浓度中位数33.40 ng/ml(四分位数:17.96-61.59 ng/ml)。单因素Logistic回归分析结果显示,以低-中水平组为参照,高水平组颈动脉斑块不稳定性检出风险为3.257倍,差异有统计学意义;低水平组和中-高水平组风险都增加了1.836倍,差异无统计学意义。多因素Logistic回归分析发现,调整年龄、性别、高血压、糖尿病、冠心病既往史、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、同型半胱氨酸和超敏C反应蛋白等因素后,与低-中水平组相比,低水平组发生不稳定性斑块的风险是1.638(95%CI 0.580-4.627,P=0.351 3),中-高水平组发生不稳定性斑块的风险是2.144(95%CI 0.786-5.851,P=0.136 3),高水平组发生不稳定性斑块的风险是2.653(95%CI 1.002-7.023,P=0.049 6)。结论 YKL-40的水平可能与颈动脉粥样硬化斑块稳定性相关。

面向临床研究的基因测序项目的设计原则、管理流程与质量控制标准

目的 开发并搭建适用于临床研究的基因测序项目管理和数据质量控制流程,为基于队列的组学分析、疾病机制探索、药物靶标开发等提供技术保障。方法 基于生物医学研究中小样本的测序流程,参考国际大规模测序队列,形成面向临床研究的基因测序项目框架。从样本处理、测序数据生成、生物信息学分析、项目的质量保证、数据安全与生物样本安全等多个环节,进行管理流程的搭建和优化。结果 确定了面向临床研究的基因测序项目的设计原则,搭建了系统性管理流程。通过将此流程应用于中国国家卒中登记Ⅲ(China national stroke registry-Ⅲ,CNSR-Ⅲ)队列,建立了数据质控标准,包括DNA提取和文库制备质控、测序和遗传变异鉴定质控、样本临床信息推断质控和基因检测数据的相互验证等。结论 在临床研究中将基因检测纳入试验设计,并采用标准化的管理流程、数据分析方案和统一的质控标准,能够满足科学研究的可扩展性、可重复性、可溯源性的需求。本研究搭建的基因测序项目管理流程和质控标准已在CNSR-Ⅲ队列上验证成功,可以作为其他临床研究中此类项目的参考标准。

胰岛素抵抗与非致残性缺血性脑血管病患者卒中复发之间的关系

目的探讨不同胰岛素抵抗状态对无糖尿病史的非致残性缺血性脑血管病(non-disabling ischemic cerebrovascular events,NICE)患者卒中复发风险的影响。方法使用稳态模型胰岛素抵抗(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-I R)指数对胰岛素抵抗进行评估。根据不同胰岛素抵抗状态,使用四分位法将无糖尿病史的NICE患者分为4组。该研究的主要研究终点为90 d新发卒中(包括缺血性和出血性卒中)。利用多元Cox回归模型校正潜在协变量,评估不同胰岛素抵抗状态与卒中复发风险之间的关系,同时对不同抗血小板聚集治疗、不同胰岛素抵抗状态与卒中复发之间的交互作用进行统计分析。结果本研究共纳入2325例NICE患者。根据患者不同胰岛素抵抗状态分组,4组界值分别为Q1(HOMA-IR指数﹤1.35)、Q2(1.35≤HOMA-IR指数﹤2.17)、Q3(2.17≤HOMA-IR指数﹤3.39)及Q4(HOMAIR指数≥3.39),4组患者人数分别为585例、575例、585例及580例。90 d随访时,共出现167例卒中复发,其中氯吡格雷联合阿司匹林组为68例,阿司匹林组为99例。与Q1组(6.3%)比较,Q2组(9.2%,校正HR 1.56,95%CI 1.01~2.41,P=0.04)、Q3组(5.6%,校正HR 1.04,95%CI 0.64~1.69,P=0.89)和Q4组(7.6%,校正HR 1.35,95%CI 0.85~2.15,P=0.21)患者卒中复发风险均未明显上升。结论本研究未在NICE患者中发现胰岛素抵抗与卒中复发风险升高相关。

国人F波正常参考值范围的建立

F波是逆向激活前角细胞回返放电产生的晚潜伏期电位。这一迟发反应既可用于对运动神经全长包括近端的检测，也可用于脊髓运动神经元兴奋性的评估，也是对常规的神经传导检测方法的补充。F波的潜伏期与所检测的神经长度密切相关，临床应用时不能以一概全。我们的研究目的是建立国人F波潜伏期与身高对应的正常参考值，为临床提供准确的F波潜伏期的判定。

运用F波潜伏期检测2型糖尿病患者周围神经病变

F波的潜伏期代表从刺激点到脊髓,并返回刺激点的沿整个运动神经纤维的传导时间,其中包括神经近端.因此,F波的潜伏期不仅能反映运动神经近端病变情况,还能反映整个运动神经通路的状况.对弥漫性周围神经病变较为敏感,如糖尿病周围神经病变.很多学者对F波在糖尿病神经病变中的应用做了大量研究,并提出F波的改变可能是糖尿病患者周围神经病变中出现最早的,唯一的电生理指标.但F波在无神经系统症状及体征的糖尿病患者中的异常率尚未报道.我们在本研究中将2型糖尿病患者按临床症状体征分为无周围神经病变组和拟诊周围神经病变组（以下简称无症状组和有症状组）,分别进行F波、感觉及运动神经传导检测,确定和比较电生理检测的糖尿病患者周围神经病变的亚临床异常率.

脑神经科学临床样本资源库的建设

随着医院承担的科研课题的逐渐增多，医院已积累了大量的临床资源，而样本的保存利用则出现了较多具体的问题。因此，必须借助实验室和全面信息化管理来实现集成化的、可持续的、规范化的积累。目前，国内外许多实验中心都建立或正在筹建临床资源库，但由于种种原因，在神经科学领域，都未能将临床数据及与数据相匹配的样本资源进行有机的整合。