蓝色金融的机遇与国际实践——访国际金融公司东亚及太平洋局局长林金思(Kim-See Lim)

蓝色金融作为一个新兴领域,正在受到全球投资者、金融机构、监管部门及其他市场参与者越来越多的关注。在促进海洋系统与清洁水资源可持续发展、提升海洋适应气候变化的韧性等方面,蓝色金融能够发挥重要作用,有着巨大的发展空间。多年来,世界银行集团国际金融公司(IFC)通过开展投资、提供咨询服务以及参与制定相关标准等方式。

禽用双价禽流感病毒重组疫苗使用后广东省高致病性H7N9病例调查分析

目的调查分析禽用双价禽流感病毒重组疫苗使用后2017-2019年流行季广东省高致病性H7N9病例流行病学特征,探索可能的感染来源,为制定防控措施提供依据。方法对H7N9确诊病例基本情况、密切接触者和感染来源进行流行病学调查,采集相关标本进行实验室检测,并应用描述性流行病学方法进行分析。结果 2017-2019年流行季广东省报告1例人感染高致病性H7N9禽流感病例,患者发病前有明确的活禽暴露史,病家自养活禽和禽舍环境标本均检出H7亚型禽流感病毒核酸阳性标本,未发现人与人之间传播病例。报告的唯一确诊病例通过自养活禽暴露的可能性大。结论禽用双价禽流感病毒重组疫苗使用后2017-2019年流行季广东省高致病性H7N9病例较往年同期大幅下降。饲养者个人防护不足是导致该病例发病的主要原因。继续做好禽只的免疫接种,持续推进活禽的规范化养殖,是减少禽间疫情和人类感染的重要措施。

中山市2007—2014年1型登革病毒E基因分子特征分析

目的分离、鉴定中山市2007—2014年1型登革病毒并获得E基因序列,从分子水平分析其系统进化和地域来源情况,了解该病毒各年份的流行性质。方法收集中山市2007—2014年登革热患者急性期血清,接种C6/36细胞分离登革病毒,应用RT-PCR技术扩增病毒的包膜蛋白E基因全长,并对序列进行系统进化和同源性分析。结果共分离到登革1型病毒流行株25株,参考国际标准株E基因序列将其分为GⅠ型和GⅤ型2个基因型。其中2007年3株,2012年3株,2013年3株,2014年7株聚集在GⅠ型中,2014年9株聚集在GⅤ型中。中山2014年登革病毒GⅠ型流行株与中山市2007年、2012年、2013年流行株E基因核苷酸(氨基酸)序列相似度分别为98.25%(99.40%)、98.18%(99.80%)、99.73%(100.00%),与珠三角2014年广州、珠海输入中山株的氨基酸序列相似度为100.00%;中山市2013年登革病毒GⅠ型流行株与广州、佛山的2013年流行株E基因核苷酸(氨基酸)序列相似度分别为99.67%(100.00%)、99.74%(100.00%)。结论 2007—2014年中山市流行的登革1型病毒有2个基因型(GⅠ型和GⅤ型)。2014年GⅤ型可能由国外输入,GⅠ型中2007年和2012年为国外输入株,2013年及2014年流行株E基因序列相似度高,2014年的登革流行可能与2013年流行株本地化有关。

不同核酸检测试剂盒检测环境样本禽流感病毒H5亚型的效果比较

目的 比较3种厂家检测禽流感病毒H5亚型的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)试剂对环境标本的检测效果。方法 采用3个不同厂家的核酸检测试剂盒检测活禽市场环境样本中的H5亚型禽流感病毒,比较不同试剂检测结果检出率的差异,使用TA克隆技术,将扩增产物连接到克隆载体上并测序分析,获得反应产物的序列。结果 3种检测试剂中,试剂盒C检测H5的检出率比A高(18.3%vs. 8.4%),差异有统计学意义(χ^(2)=5.440,P=0.039)。对扩增产物片段序列进行分析发现,试剂A对标本核酸的H5扩增产物与KU042758.1序列的相似度最高,为100.00%,试剂C对标本核酸的H5扩增产物与CY091635.1序列的相似度最高,为97.92%,两者无明显的相似区域。结论 试剂C比试剂A对该批临床样本中H5的检出率更高,检出率的差异可能与不同试剂靶序列不一致以及试剂引物与样本核酸的匹配度有关。

2013-2017年中山市20起诺如病毒暴发疫情的分子流行病学特征分析

目的分析2013-2017年间中山市诺如病毒暴发疫情的分子流行病学特征,为中山市诺如病毒感染疫情防控提供分子生物学实验依据。方法收集2013-2017年间中山市20起诺如病毒引起的感染性腹泻暴发疫情病例标本,采用RT-PCR方法测定诺如病毒VP1基因全序列,并对序列进行系统发育分析。结果 20起诺如病毒引起的感染性腹泻暴发主要发生在幼儿园及小学,占疫情总数的80.0%(16/20)。获得了77株病毒的VP1基因全序列, 20起疫情分别由GII.4 Sydney2012(25.0%, 5/20),GII.3(25.0%, 5/20),GII.17(25.0%, 5/20),GII.2(15.0%, 3/20),GII.21(5.0%, 1/20),及GII.6(5.0%,1/20)亚型引起,5起暴发中GII.4 Sydney2012分为两个不同分支。结论 GII.17型为中山市新发现流行毒株,2016年底发现的两起GII.4 Sydney2012区别于以往出现GII.4 Sydney2012,可能为新亚型的重组毒株(GII.P16-GII.4 Sydney2012)。VP1基因序列分析可作为有效的诺如病毒分型工具, RdRp基因分析应作为重要补充以确定毒株的重组变异情况。

血脂水平与华支睾吸虫致病性的初步研究

目的比较高血脂小鼠和正常血脂小鼠感染华支睾吸虫后的肝脏病理变化及炎症因子水平,以研究血脂水平对华支睾吸虫致病性的影响。方法通过向BALB/c小鼠投食高脂饲料建立高血脂小鼠模型,用相同囊蚴数感染高血脂小鼠和正常血脂小鼠,比较感染1个月后小鼠相关病理指标。通过Masson染色(Masson′s trichrome staining)判断肝胆纤维化程度,使用免疫组化和实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏α-平滑肌蛋白(α-SMA)定位情况和转录水平,用流式细胞术检测小鼠脾细胞在刀豆素(ConA)刺激48 h培养上清中细胞因子表达水平。结果与正常血脂感染组小鼠相比,高血脂感染组小鼠出现较显著的肝胆管扩张、肝实质及汇管区出现大量的胶原纤维增生、小胆管增生等病变。高血脂感染组α-SMA转录水平升高,并在肝脏组织汇管区及增生的纤维间隔内表达。高脂感染组脾细胞培养上清中白介素6(IL-6)和IL-10表达水平比正常血脂小鼠高(P<0.05),高脂感染组IFN-γ水平比高脂未感染组低(P<0.05)。结论高血脂可能使华支睾吸虫感染所致的肝脏胶原纤维增生、胆管扩张更明显,血脂水平高低还可影响华支睾吸虫感染后宿主的免疫应答。

中山市2014-2016年6株Ⅱ型登革病毒E基因分子特征分析

目的分离鉴定中山市2014-2016年Ⅱ型登革病毒,从分子水平进行分析其地域来源和系统进化情况。方法选取中山市2014-2016年核酸阳性血清6份,用C6/36细胞培养分离登革病毒,RT-PCR扩增毒株E基因并进行序列测定,分析其与不同区域流行株和国际标准株的同源性和系统进化情况。结果成功分离培养出2株2014年登革Ⅱ病毒、2株2015年登革Ⅱ病毒、2株2016年登革Ⅱ病毒。ZS2014-02、ZS2014-03与2014年广州分离株D14115在进化关系上最近,2014年的3株病毒氨基酸和核苷酸同源性均达到91. 3%以上;2015年ZS2015-01与广州分离株D14115在进化关系上最近,2015年2株病毒氨基酸和核苷酸同源性分别为98. 8%和92. 8%;2016年ZS2016-01与2010年巴布新几内亚分离株JN568270. 1进化关系较近,2016年2株病毒氨基酸和核苷酸同源性分别为91. 4%和88. 8%。结论 6株毒株与国际标准株New Guinea C登革Ⅱ型比较均存在氨基酸位点的差异。2014年2株毒株为广州输入病例,2015年的2株毒株ZS2015-01为广州输入,ZS2015-02为中山市本地二代病例,2016年的ZS2016-01为巴布新几内亚输入,而ZS2016-02为菲律宾输入病例。

一株人感染H9N2禽流感病毒高通量测序及序列分析

目的对一株人感染H9N2禽流感病毒进行高通量测序（next—generationsequencing，NGS）分析，探讨其在人群流行的可能性。方法应用高通量测序技术进行全基因组序列测定（wholegenomesequencing，WGS）。对8个基因进行相似性检索，构建系统进化树并分析其关键位点的分子特征。结果8个基因与GenBank基因库相似度最高序列的来源不完全一致，系统进化树显示HA基因属于欧亚系I群，M基因位于G1-like分支，PB2位于G9-like分支，NA位于一独立分支，PBl，PA，NP，NS均位于SH／F／98-like分支。HA基因裂解位点为PSRSSR／GLF，226位受体结合位点为L。除M2基因$31N突变之外，NA基因茎63～65位缺失，PA和PB2基因未发生L336M和Q591R，E627K等可以增强病毒对哺乳动物适应性的突变，但发现可以增强病毒毒力的突变如M1基因N30D和T215A，PB2基因L89V，NSl基因P42S。除M2基因S31N突变外，NA基因和M2基因的药物结合位点未发生E119G，R152K，H274Y，R292K和L26F，V27A，A30T，G34E等耐药性突变。HA和NA糖基化位点预测结果都有8个糖基化位点，其中分别有7个和5个可靠程度较高。结论该H9N2禽流感病毒的大部分关键性位点较保守，只有少部分位点发生一定程度进化与变异，在人群引起流行的可能性不大，但需加强分子方面动态监测。

应用芯片式数字PCR检测人血清中登革病毒载量

目的建立芯片式数字PCR绝对定量技术,用于登革病例血清中登革病毒载量绝对定量并分析载量变化情况。方法选取发病1~7d登革实验室确诊病例血清样本,提取病毒RNA并逆转录为cDNA,取3μL或4.5μL cDNA,配制15μL反应体系,采用QuantStudio 3D Digital PCR Chip Loader仪器制作芯片,将芯片置于Dual Flat Block GeneAmp PCR System 9700运行PCR,最后在QuantStudio TM 3D Digital PCR System中读取结果并应用QuantStudio^ TM 3D AnalysisSuite TM Software进行分析,根据实验稀释倍数计算血清中登革病毒载量。结果芯片制作良好,有效孔数高,检测结果重复性较好,示病例发病第1~7d血清中的登革病毒载量分别是10^7.646 ,10^7.544 ,10^7.298 ,10^6.990 ,10^5.823 ,10^4.732 ,10^4.221 copies/mL。结论应用芯片式数字PCR检测血清中登革病毒载量的方法可行,可应用于登革病毒载量的绝对定量。登革病毒载量随着病程的发展而降低。

免核酸提取Real-time PCR技术在细胞分离病毒快速鉴定中的应用

目的探讨应用免核酸提取Real-time PCR技术直接对细胞培养液进行检测鉴定,判断成功分离病毒的可行性。方法应用C6/36细胞和MDCK细胞分别对登革病毒和甲型H3亚型流感病毒进行病毒分离培养,应用Real-timePCR技术分别对经提取的核酸溶液和细胞培养液进行目标病原体检测,判断是否成功分离病毒。结果登革病毒和甲型H3亚型流感病毒细胞培养液经核酸提取后进行Real-time PCR检测,检测结果CT值范围分别为12.0~14.6和8.5~9.8,病毒培养液直接检测结果范围分别为18.5~21.2和10.1~12.8,定性结果完全一致。结论免核酸提取Real-timePCR技术可直接对细胞培养液进行病毒核酸检测,判断是否成功分离病毒。

中山市6例疑似麻疹疫苗相关病例病原学特征分析

目的分析中山市6例疑似麻疹疫苗相关病例的病原学特征。方法采集中山市2014-2015年6例疑似麻疹疫苗相关病例咽拭子样本并提取核酸,采用巢式PCR法扩增麻疹病毒核蛋白(N)基因羧基末端450个核苷酸片段并测序,分析其与世界卫生组织(WHO)参考株、麻疹病毒中国疫苗株沪_(191)(Shanghai_(191),S_(191))基因的亲缘关系、核苷酸与氨基酸序列相似度。结果 6份样本中,2份未检出核酸,4份检出核酸,序列比对结果示3株病毒核苷酸、氨基酸序列相似度均为100%,与S_(191)株相比,核苷酸序列和氨基酸序列相似度也为100%,属于A基因型;1株病毒与Chin9322-H_(1a)株相比,核苷酸序列相似度为97.7%,氨基酸序列相似度为96.6%,为H_(1a)基因型。结论 3例病例为疫苗株感染,1例为野毒株感染。

华支睾吸虫重组14-3-3ε蛋白对胆管癌CCLP-1细胞迁移侵袭的作用研究

目的探讨华支睾吸虫重组14-3-3ε蛋白(r Cs14-3-3ε)对肝内胆管癌细胞株CCLP-1细胞波形蛋白(vimentin)表达的影响,观察该过程中CCLP-1细胞侵袭和迁移能力的变化。方法用不同浓度(1、5、10μg/ml)r Cs14-3-3ε与CCLP-1细胞共孵育24、48、72 h后,通过Q-PCR、Western blot等实验方法检测vimentin的表达水平。用划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测r Cs14-3-3ε对CCLP-1细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 Q-PCR实验表明5μg/ml r Cs14-3-3ε刺激CCLP-1细胞72 h后及10μg/ml r Cs14-3-3ε刺激CCLP-1细胞24、48、72 h后,vimentin m RNA水平显著上调;Western blot实验显示,10μg/ml r Cs14-3-3ε刺激CCLP1细胞48、72 h后,vimentin蛋白水平显著上调。划痕实验表明,r Cs14-3-3ε(10μg/ml)能够促进细胞的迁移能力,处理后的细胞迁移率增大(P<0.01);Transwell小室检测显示,r Cs14-3-3ε(10μg/ml)处理组中穿膜细胞数为对照组的1.78倍,显著增加(P<0.05)。结论 r Cs14-3-3ε可以通过上调vimentin蛋白的表达,从而促进肝内胆管癌细胞株CCLP-1的侵袭和迁移能力。

中山市两家医院鲍曼不动杆菌耐药性及同源性分析

目的了解中山市两家医院临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药性及耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii,CRAB)耐药基因的携带情况,并分析其同源性,为医院感染控制提供实验室依据。方法收集2018年3—8月中山市两家医院临床分离的35株鲍曼不动杆菌,采用最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)法进行16种抗菌药物敏感试验,并筛选出CRAB菌株,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增CRAB中的耐药基因并测序确认;应用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术对35株鲍曼不动杆菌进行分子分型。结果35株鲍曼不动杆菌中有33株为CRAB,其余2株对16种抗菌药物全敏感。33株CRAB对替加环素和多粘菌素B均敏感,对米诺环素的敏感率为45.45%,而对其他抗菌药物的耐药率均高达80%以上。33株CRAB均携带OXA-51基因,未检测到IMP和VIM基因。35株鲍曼不动杆菌共分为18个PFGE带型;分为A-F 6个聚类型别,A型(9/35,25.7%)和B型(22/35,62.9%)为主要流行克隆株。结论鲍曼不动杆菌耐药现象严重,携带多种耐药基因可能是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类等多种抗菌药物耐药的重要原因。医院内存在不同克隆株播散以及同一克隆株在医院间流行播散。