1,25-(OH)_2D_3诱导HL-60细胞分化后胞液Ca^(2+)浓度、磷酸化酶a和微粒体Ca^(2+)-ATP酶活性的改变

1,25-(OH)_2D_3对HL-60细胞具有促分化作用。本文报道了1,25-(OH)_2D_3在促进HL-60细胞分化前后胞液Ca^(2+)浓度、磷酸化酶a和微粒体Ca^(2+)-ATP酶活性的改变。结果表明,1,25-(OH)_2D_3加入HL-60细胞培养液后72小时,细胞NBT染色阳性率高于70％,形态向正常分化的细胞转化。同对,胞液Ca^(2+)浓度和微粒体Ca^(2+)-ATP酶活性明显降低,而磷酸化酶a活性显著升高。结果提示,在1,25-(OH)2_D_3作用下,HL-60细胞不仅杀菌功能增强,细胞内胞液Ca^(2+)浓度趋向正常,与钙恒稳有关的酶活性也同样发生改变。即1,25-(OH)_2D_3对HL-60细胞的诱导作用伴有钙恒稳的改变。这些变化与DMSO的作用相同。

质粒YRP7的基本特性鉴定

质粒YRP7用氯霉素法扩增,碱变性裂解法提取,酸酚法及核糖核酸酶纯化后,得到了高产量(5.6mg/L培养液),高纯度(A260:A280=2.0)的质粒制品,经转化实验及酶切分析确定YRP7具有下列特征:大小为5.41±0.10kb,可赋予宿主细胞AmP^r、Tet^r的表型,对大肠杆菌C600的转化频率为10^(-6)、转化效率为1.5×10~6转化子/mgDNA。限制性内切酶BamH Ⅰ、ECoRⅠ、Hind Ⅲ及PstⅠ在其分子上的切点数分别为1、2、2、2,并确定了各酶切片段的分子大小,对BanHⅠ的单切点,经插入失活法证实其位于Tet^r的基因上。由上述特征可确定,质粒YRP7是一个比较理想的克隆载体。

人轮状病毒双链RNA基因组cDNA的合成

从轮状病毒中提纯的基因片段4、7～9及病毒总RNA,3’,末端腺苷酰化后,以其为模板Oligo,（dT）12-18为引物,在逆转录酶作用下合成cDNA。结果表明:在cDNA合成过程中,保温60～75分钟,[3H)-dNTP的掺入最高。投用的病毒模板RNA分别为4、2、1.5μg时,合成的cDNA产量相应为390、182、143ng。得率介于9.1～9.8％之间。

四氯化碳中毒大鼠肝脏Ca^(2+)-ATP酶和磷酸化酶a活性的研究

本实验采用雄性S.D.大鼠,经日一次灌注2.2ml/kg 四氯化碳,于染毒后12、24、48小时测定肝微粒体Ca^2+-ATP 酶和肝细胞液磷酸化酶a 活性变化。结果发现,染毒后大鼠肝微粒体Ca^2+-ATP 酶活性显著降低,以染毒后24小时为甚;肝细胞液磷酸化酶a 活性显著增高,以染毒后24小时为最高。说明四氯化碳致肝损伤时,肝内质网隔离钙的能力降低,胞液中钙浓度升高。本实验对于阐明四氯化碳中毒性肝病发病机理有一定的意义。

四氯化碳致大鼠肝损伤时脱氢酶活性的变化

本文从脂质过氧化角度,探讨CCl_4致大鼠肝损伤时葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGAD)的活性变化。实验结果表明:G-6-PD 活性染毒后12小时降低,24小时回升,48小时继续升高;而6-PGAD 活性染毒后12小时上升,24小时继续升高,48小时恢复正常。经分析认为:肝中毒肘这二种酶活性的变化与CCl_4引起脂质过氧化的损伤机理是吻合的,这两种酶活性与氧化还原循环的受阻和调节密切相关。

促分化使肿瘤细胞逆转的生化研究——Ⅲ.硫杂脯氨酸类对H_(22)肝癌细胞中环核苷酸水平的影响

作者测定了在硫杂脯氨酸类药物作用下H_(22)肝癌细胞中cAMP和cGMP水平的变化。发现在该类药物作用下,小鼠H_(22)腹水肝癌细胞中cAMP水平有增高趋势,cGMP水平有下降趋势,cAMP/cGMP比值增高。

DMSO诱导的HL-60细胞分化后胞液Ca^(2+)浓度、磷酸化酶a和微粒体Ca^(2+)-ATP酶活性的改变

Ca^(2+)与肿瘤代谢有着极为密切的关系。本文测定了HL—60细胞经DMSO诱导分化前后胞液Ca^(2+)浓度、磷酸化酶a活性和微粒体Ca^(2+)—ATP酶活性。结果表明,DMSO加入HL—60细胞培养液后120h,细胞NBT染色阳性率为75％,细胞形态趋同于正常分化的细胞。同时,胞液Ca^(2+)浓度和微粒体Ca^(2+)—ATP酶活性明显降低,胞液磷酸化酶a活性则显著升高。结果提示,在DMSO作用下,HL—60细胞不仅吞噬功能增强,细胞内钙及与钙恒稳有关的酶活性也同时发生改变。