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A型塞内卡病毒VP3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
1
作者
林铱婷
姬康
+8 位作者
谭姗姗
晋怡
宋若琪
马瑞一
王颖
牛胜
赵宇军
田文霞
任建乐
《中国动物检疫》
CAS
2024年第4期96-102,共7页
为制备A型塞内卡病毒(SVA)VP3蛋白多克隆抗体,采用同源重组技术将SVA VP3基因连接至原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-SVA-VP3。将重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),以1 mmol/L的IPTG进行诱导表达并纯化表达产物...
为制备A型塞内卡病毒(SVA)VP3蛋白多克隆抗体,采用同源重组技术将SVA VP3基因连接至原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-SVA-VP3。将重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),以1 mmol/L的IPTG进行诱导表达并纯化表达产物,随后将纯化的VP3重组蛋白皮下多点注射新西兰白兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot分别对抗体效价、反应性和特异性进行鉴定。结果显示:重组VP3蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约36 kDa;制备的VP3蛋白多克隆抗体能与VP3重组蛋白和SVA发生特异性反应,其ELISA效价达1:10000以上,Western blot和IFA效价达1:5000。综上,本研究成功制备了SVA VP3多克隆抗体,其具有较高的效价和特异性,可为后续SVA致病机制及检测方法等研究奠定基础。
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关键词
A型塞内卡病毒
VP3蛋白
原核表达
多克隆抗体
效价
特异性
下载PDF
职称材料
A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立
2
作者
任建乐
林铱婷
+9 位作者
姬康
谭姗姗
陈新新
晋怡
王颖
牛胜
梁立滨
李俊平
赵宇军
田文霞
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期678-688,共11页
[目的]制备A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP2蛋白多克隆抗体,建立检测SVA抗体的间接ELISA方法,以期为SVA致病机制及诊断提供研究基础。[方法]利用同源重组技术将VP2基因克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-VP2,...
[目的]制备A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP2蛋白多克隆抗体,建立检测SVA抗体的间接ELISA方法,以期为SVA致病机制及诊断提供研究基础。[方法]利用同源重组技术将VP2基因克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-VP2,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,表达产物经纯化后皮下多点注射新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和中和试验鉴定多克隆抗体的特异性、反应性和中和活性。以VP2为抗原包被酶标板,通过矩阵优化、临界值确定、特异性鉴定及敏感性和重复性分析建立检测SVA抗体的间接ELISA方法。采集50份临床血清样品,分别用间接ELISA与IFA方法进行检测,分析间接ELISA方法的符合率。[结果]重组VP2蛋白以包涵体形式表达,大小为40 ku。制备的多克隆抗体能与重组VP2蛋白和SVA特异性结合,与其他病毒无交叉反应,且具有较高的中和活性。经对间接ELISA条件的优化,确定VP2包被浓度为4μg/mL,阳性血清稀释浓度为1∶250,封闭液为5%脱脂乳+5%BSA,血清样品和二抗孵育时间均为90 min, TMB底物反应时间为10 min,临界值为0.182。建立的间接ELISA方法与常见的猪病毒阳性血清不反应,与IFA符合率达94.0%。[结论]原核表达系统表达的VP2蛋白具有良好的免疫原性,制备的多克隆抗体能与SVA和VP2发生特异性反应。建立的间接ELISA方法特异性高,与IFA符合率高,适用于临床SVA抗体检测和疫苗效力评价。
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关键词
A型塞内卡病毒(SVA)
VP2蛋白
原核表达
多克隆抗体
间接ELISA
下载PDF
职称材料
题名
A型塞内卡病毒VP3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
1
作者
林铱婷
姬康
谭姗姗
晋怡
宋若琪
马瑞一
王颖
牛胜
赵宇军
田文霞
任建乐
机构
山西农业大学动物医学学院
出处
《中国动物检疫》
CAS
2024年第4期96-102,共7页
基金
山西省科技创新人才团队专项(202204051001022)
山西省优秀博士来晋奖励基金项目(SXBYKY2021036)
山西农业大学博士科研启动基金项目(2020BQ59)。
文摘
为制备A型塞内卡病毒(SVA)VP3蛋白多克隆抗体,采用同源重组技术将SVA VP3基因连接至原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-SVA-VP3。将重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),以1 mmol/L的IPTG进行诱导表达并纯化表达产物,随后将纯化的VP3重组蛋白皮下多点注射新西兰白兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot分别对抗体效价、反应性和特异性进行鉴定。结果显示:重组VP3蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约36 kDa;制备的VP3蛋白多克隆抗体能与VP3重组蛋白和SVA发生特异性反应,其ELISA效价达1:10000以上,Western blot和IFA效价达1:5000。综上,本研究成功制备了SVA VP3多克隆抗体,其具有较高的效价和特异性,可为后续SVA致病机制及检测方法等研究奠定基础。
关键词
A型塞内卡病毒
VP3蛋白
原核表达
多克隆抗体
效价
特异性
Keywords
SVA
VP3 protein
prokaryotic expression
polyclonal antibody
titer
specificity
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立
2
作者
任建乐
林铱婷
姬康
谭姗姗
陈新新
晋怡
王颖
牛胜
梁立滨
李俊平
赵宇军
田文霞
机构
山西农业大学动物医学学院
北京索莱宝科技有限公司
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期678-688,共11页
基金
山西农业大学博士科研启动基金项目(2020BQ59)
山西省高等学校科技创新项目(2021L145)
+1 种基金
山西省科技创新人才团队专项(202204051001022)
山西省优秀博士来晋奖励基金项目(SXBYKY2021036)。
文摘
[目的]制备A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP2蛋白多克隆抗体,建立检测SVA抗体的间接ELISA方法,以期为SVA致病机制及诊断提供研究基础。[方法]利用同源重组技术将VP2基因克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-VP2,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,表达产物经纯化后皮下多点注射新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和中和试验鉴定多克隆抗体的特异性、反应性和中和活性。以VP2为抗原包被酶标板,通过矩阵优化、临界值确定、特异性鉴定及敏感性和重复性分析建立检测SVA抗体的间接ELISA方法。采集50份临床血清样品,分别用间接ELISA与IFA方法进行检测,分析间接ELISA方法的符合率。[结果]重组VP2蛋白以包涵体形式表达,大小为40 ku。制备的多克隆抗体能与重组VP2蛋白和SVA特异性结合,与其他病毒无交叉反应,且具有较高的中和活性。经对间接ELISA条件的优化,确定VP2包被浓度为4μg/mL,阳性血清稀释浓度为1∶250,封闭液为5%脱脂乳+5%BSA,血清样品和二抗孵育时间均为90 min, TMB底物反应时间为10 min,临界值为0.182。建立的间接ELISA方法与常见的猪病毒阳性血清不反应,与IFA符合率达94.0%。[结论]原核表达系统表达的VP2蛋白具有良好的免疫原性,制备的多克隆抗体能与SVA和VP2发生特异性反应。建立的间接ELISA方法特异性高,与IFA符合率高,适用于临床SVA抗体检测和疫苗效力评价。
关键词
A型塞内卡病毒(SVA)
VP2蛋白
原核表达
多克隆抗体
间接ELISA
Keywords
Senecavirus A(SVA)
VP2 protein
prokaryotic expression
polyclonal antibody
indirect ELISA
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
A型塞内卡病毒VP3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
林铱婷
姬康
谭姗姗
晋怡
宋若琪
马瑞一
王颖
牛胜
赵宇军
田文霞
任建乐
《中国动物检疫》
CAS
2024
0
下载PDF
职称材料
2
A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立
任建乐
林铱婷
姬康
谭姗姗
陈新新
晋怡
王颖
牛胜
梁立滨
李俊平
赵宇军
田文霞
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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