锈毛草莓积雪草合剂对STZ小鼠降血糖作用研究

采用75%乙醇萃取锈毛草莓及积雪草,制备成合剂,通过STZ诱导建立糖尿病小鼠模型,随机分为模型组、低剂量组及高剂量组,分别以蒸馏水、4及8 g·kg^(-1)锈毛草莓积雪草合剂灌胃,1次·d^(-1),持续4周,另设正常组作为对照。探究绣毛草莓积雪草合剂对糖尿病小鼠的降血糖效果及作用机制。结果表明:(1)不同剂量的锈毛草莓积雪草合剂均能显著降低糖尿小鼠血糖值,提高糖耐量并减轻其多食、多饮、多尿的症状。(2)低剂量组小鼠血清TC、TG含量较模型组有显著提高(P<0.01或P<0.05),肝脏SOD、CAT活性显著提高(P<0.05),MDA含量明显降低。(3)低剂量黄毛草莓积雪草合剂效果优于二甲双胍,毒性实验显示锈毛草莓积雪草合剂实属无毒。该研究结果表明锈毛草莓积雪草合剂具有降血糖作用,同时能够降低糖尿病小鼠的血脂水平,其作用机制可能与提高肝脏抗氧化能力有关。

蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备

蛋白质谷氨酰胺酶(Protein-glutaminase,简称PG)是一种新型蛋白质脱酰胺酶,在蛋白质改性领域具有广阔的应用前景。但是,目前关于蛋白质谷氨酰胺酶的测定方法主要是通过苯酚-次氯酸盐反应测定铵离子含量指示蛋白质谷氨酰胺酶的酶活,该方法精确度和灵敏度有限。因此,利用原核表达系统表达解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum)分泌的蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg,纯化后制备其多克隆抗体用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶的含量。首先以解朊金黄杆菌基因组为模板扩增出成熟肽基因mpg,将其与pET32a载体连接构建重组质粒pET32a-mpg,转化至大肠杆菌BL21(DE3)。在25℃条件下,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h,目的蛋白表达量最高、呈可溶性蛋白。通过Ni-NTA柱纯化的重组蛋白mPG-His 6,将其作为抗原,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测其效价,所得抗体效价为1∶5 000。蛋白质免疫印迹实验结果说明,该多克隆抗体特异性良好。最后使用该多克隆抗体对解朊金黄杆菌的发酵上清液进行蛋白质免疫印迹反应,检测天然蛋白质谷氨酰胺酶,结果表明该抗体特异性良好,可用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶,为深入研究蛋白质谷氨酰胺酶的生物学功能、建立蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株的高通量筛选方法奠定了基础。