HBV S/HEV ORF2融合基因对番茄的遗传转化

应用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在戊肝病毒(HEV)ORF2部分序列的5′端,二者通过柔性肽(Gly4Ser)2序列相连,构建成融合基因BE。将融合基因BE克隆到植物双元表达载体pBin438上,获得pBin438BE,然后用冻融法将其转入根癌农杆菌EHA105中,侵染丽春番茄子叶和下胚轴,经预培养、共培养、筛选培养、生根培养获得了5株抗卡那霉素的番茄植株。提取抗性植株基因组DNA,进行PCR及PCR-Southern检测,4株获得阳性信号。初步表明目的基因已整合到了番茄基因组中。

八氢番茄红素合酶基因人参转化体系的优化

八氢番茄红素合酶(Phytoene synthase,PSY)是类胡萝卜素生物合成的限速酶,通过建立 PSY 基因的人参转化体系,可促进相应类胡萝卜素的合成,从而提高人参的营养价值。本研究以人参愈伤组织为受体,以 PSY 为目的基因,应用根癌农杆菌介导法对人参愈伤组织进行遗传转化,从菌液浓度、侵染胞龄、侵染时间、共培养时间四方面优化了遗传转化体系。经 PCR 分析鉴定,初步证明外源基因 PSY 已整合到人参的基因组中。

乙肝表面抗原小蛋白S基因导入番茄的遗传转化体系的建立

以丽春番茄无菌苗的子叶为外植体,以农杆菌菌株EHA105(包含质粒pBin438S)为载体,将乙肝表面抗原小蛋白S基因导入番茄组织中.基本培养基采用MS+6-BA1 0mg/L+IAA0 2mg/L,在共培养时加入乙酰香酮100μmol/L作为诱导剂,经过组织培养得到转基因植株.对转化植株基因组进行的分子学PCR检测表明,外源基因有可能已整合到番茄基因组中.该转基因遗传体系的建立为利用转基因植物生产乙肝口服疫苗奠定了基础.

几起燃气泄漏事故引发安全应急管理的思考

随着社会的发展,居民使用燃气或工业燃气越发广泛,也带来了较大的风险,致使事故频发,近年来,全国发生多起燃气泄漏事件,本文通过对三起燃气泄漏事故调查报告的深入分析研究,总结燃气泄漏事故的规律与特征,从安全应急管理的角度出发提出相关思考建议,为提升燃气安全管理水平奠定基础。

猪白血病抑制因子的真核表达与活性分析

采用分子克隆技术构建猪白血病抑制因子(LIF)的真核表达载体,表达重组猪LIF蛋白并分析其活性。酶切和DNA测序显示,所构建的真核表达质粒pcDNA3.1-pLIF-MycHis含有编码分泌型猪LIF蛋白的cD-NA序列;免疫印迹分析显示,分泌到上清中的重组蛋白在相对分子质量约37 000的位置上有明显的增强表达条带;活性分析结果显示,重组蛋白能够维持小鼠E-14胚胎干细胞在未分化状态。该结果显示重组猪LIF蛋白在CHO细胞中进行了正确表达并具有很好的生物活性,能够用来培养小鼠胚胎干细胞,为用于猪胚胎干细胞系的研究奠定了良好的基础。

向日葵(Helianthus annuus L.)下胚轴组织培养及植株再生的研究

对向日葵外植体在含有不同激素浓度的培养基上进行了诱导、分化及成苗的研究,建立了一套完整的再生体系。结果表明,在MS添加0.03 mg.L-1IAA和1.2 mg.L-16-BA的培养基上能够实现较高的不定芽再生。不定芽在1/2MS培养基上能健康成苗。

酵母细胞为模板矿化合成SiO_2纳米结构材料的研究

根据无机盐可以在生物细胞膜上沉积形成纳米结构材料的现象和生物矿化理论,在人工培养条件下,成功地以低等真核生物细胞-酵母菌为模板,以正硅酸乙酯(TEOS)作为硅源,矿化合成了一种壳鞘状的SiO2纳米结构材料,厚度达150nm左右,并采用TEM、SEM、EDX、FT-IR、TGA等表征手段对实验结果进行了深入细致的研究,获得了大量的实验数据,为利用生物细胞模板合成介观尺寸有序SiO2纳米材料作出了有益的尝试.

有效提取病毒诱导基因沉默植株中DNA的方法

根据PCR反应的要求,用改良的CTAB法,以番茄植株为材料,实现了微量番茄叶片基因组DNA的快速提取。提取基因组DNA所用的组织量少,所得的DNA经过电泳检测虽有降解,但足以用于PCR检测,以其作模板扩增中国番茄黄化曲叶病毒诱导的硫黄素酶(Su)基因沉默植株中病毒组分中的DNAmβ和1.7A,片段大小分别为1300、500bp。测序结果证明是相应基因的部分片段。该方法的材料不需要使用液氮,可以单人大批量提取,并在基因沉默的番茄植株中能稳定而准确的规模化PCR检测。

猪白血病抑制因子(LIF)的原核表达

根据GenBank中猪LIFcDNA基因序列扩增出目的基因片断,并将扩增的片断克隆进pET-31b表达载体的NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,经转化使其在大肠杆菌BL21中表达,产生重组猪LIF蛋白。结果表明,所构建的原核表达质粒PET-31b-mpLIF含有编码成熟型猪LIF蛋白的cDNA序列;表达结果显示,诱导样品在相对分子质量约20000的位置上有明显的增强表达条带。

基于“情景-应对”的室内燃气事故应急能力评估体系研究

通过开展室内燃气风险分析和案例研究,总结室内燃气事故风险特征和演化规律,筛选典型室内燃气事故情景,梳理情景应对的应急能力需求,制定三级应急能力评估指标,构建室内燃气事故应急能力评估体系,以室内燃气泄漏事故为例进行了应急能力评估,并提出室内燃气事故应急能力提升的建议措施。

基于可拓学的危化品仓储企业突发事件应急能力评价模型研究

从事前监测预警能力、事中应对能力、事后恢复重建能力、政府及外部资源应急支撑能力等四个方面出发,构建危化品仓储企业突发事件应急能力评价指标体系,结合可拓学基本理论构建危化品仓储企业突发事件应急能力评价模型。将传统层次分析法判断矩阵进行转换,并计算各级影响因素的权重,得到危化品仓储企业突发事件应急能力等级为“较强”。实例分析证明该方法能够较好的评价危化品仓储企业突发事件应急能力等级。