梨ISSR-PCR反应体系的正交优化研究

以‘饼子梨’为试材,利用正交设计L16(45)研究了反应体系中引物、模板DNA浓度等5个因素4个水平对梨反应体系的影响,PCR结果应用极差分析和MINITAB软件对扩增结果进行方差分析.梨最佳ISSR-PCR反应体系:25μL反应体系中含2.5μL 10×Buffer,2.0mmol/L Mg2+,0.25mmol/L dNTPs,0.25μmol/L引物,60ng模板DNA,0.75UTaq DNA聚合酶.优化的ISSR-PCR反应体系稳定性高和重复性较好,为梨品种指纹图谱构建和遗传多样性分析奠定基础.

梨品种ISSR-PCR反应体系的优化与应用

以海子梨（Haizili）品种的DNA为材料，对影响ISSR—PCR扩增的重要因子进行单因素的优化设计，建立了最佳体系：25μL反应体系中含2．5μL 10×buffer、0．75U Taq DNA聚合酶、0．2mmol／L dNTPs、2．5mmol／L MgCl2、0．25μmol／L引物、10-60ng模板DNA。将最佳体系应用于黔西南的22个梨品种，证实了该体系的重复性好，很稳定。