沉默CTGF对肝星状细胞凋亡及胞外基质表达的影响

目的 观测沉默结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)基因对肝星状细胞T6(hepatic stellate cell T6,HSC_T6)的生长与凋亡,以及增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、CTGF、整合素α5(integrin alpha 5,Itgα5)和Ⅰ型胶原(collagenⅠ, ColⅠ)表达的影响。方法 将CTGF-shRNA病毒感染HSC_T6(实验组)。空病毒感染的HSC_T6(空病毒组)或未感染的HSC_T6(正常组)作对照。在显微镜下观测被感染HSC_T6的生长与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的表达变化;采用CCK-8(cell count kit-8)比色检测被感染HSC_T6的增殖情况;流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测被感染HSC_T6的凋亡情况。定量PCR、Western blot及免疫荧光细胞化学分别检测PCNA、CTGF、Itgα5和ColⅠ的表达变化。结果 在显微镜下观察到被感染的HSC_T6高表达GFP。CCK-8结果表明,与对照相比,沉默CTGF基因的HSC_T6生长显著受抑,72 h开始其差异具统计学意义(P<0.05)。FCM检测结果显示,沉默CTGF基因可诱导HSC_T6凋亡。定量PCR、Western blot及免疫荧光细胞化学结果证实,沉默CTGF基因可在mRNA及蛋白水平明显下调HSC_T6的PCNA、CTGF、Itgα5与ColⅠ的表达,与对照比较,差异均具统计学意义(P<0.05)。结论 沉默CTGF基因可下调HSC_T6的PCNA、CTGF、Itgα5及ColⅠ的表达,抑制HSC_T6的生长,诱导HSC_T6凋亡,其机制可能和HSC_T6的CTGF/Itgα5信号通路受阻紧密相关。

S100A4 siRNA对佐剂性关节炎大鼠炎症及细胞因子的影响

目的研究S100A4siRNA对关节炎大鼠炎症及细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法建立大鼠佐剂性关节炎模型,造模后第11天给模型干扰组大鼠关节腔内注射S100A4siRNA片段。观察各组大鼠关节炎指数(AI)的变化及踝关节的病理变化;ELISA检测血清TNF-α、IL-1β和VEGF的表达变化。结果模型干扰组大鼠TNF-α、IL-1β和VEGF表达水平均比模型组降低(P<0.05);AI值及踝关节病理积分与模型组比较显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抑制S100A4基因表达,能显著降低致炎细胞因子TNF-α、IL-1β及促血管生成因子VEGF的表达,减轻关节滑膜的病理损伤。

双向电泳-质谱法寻找类风湿关节炎疾病相关蛋白

目的建立正常人及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血浆蛋白质的双向凝胶电泳图谱,并分析其差异表达的蛋白质,寻找RA疾病相关蛋白,以阐明RA的发病机制。方法采用固相pH梯度(immobilized pH gradi-ent,IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及类风湿关节炎患者血浆总蛋白质,凝胶经银染显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定。结果获得正常人及类风湿关节炎患者血浆蛋白双向凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为592和563,匹配率分别为89%和87%,通过比较分析,差异表达蛋白质点数为24,选取15个点进行质谱鉴定,成功鉴定7个蛋白质,其中6个蛋白质表达上调。结论两者间存在一些差异表达的蛋白质,为阐明RA的发病机制打下了坚实的基础。

S100A4,A10在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中的表达及意义

目的:探讨正常人与类风湿关节炎(RA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,分析差异蛋白在RA发病中的作用.方法:应用固相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)分离正常人及RA患者滑膜成纤维细胞总蛋白质;应用双向电泳凝胶分析软件(PDQuest 7.3.1)对2-DE凝胶进行量化比较分析;应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定部分差异蛋白质,并用Western Blot、免疫细胞化学技术验证表达差异蛋白质.结果:正常人及RA患者滑膜成纤维细胞蛋白2-DE凝胶图谱上分别平均显示896和992个点.有64个蛋白质点表达存在2倍以上的差异.选取9个在RA滑膜成纤维细胞中表达上调的蛋白质点进行质谱鉴定,成功鉴定出钙结合蛋白S100A4和S100A10两个蛋白质.经Western Blot、免疫细胞化学技术验证这两个蛋白在RA滑膜成纤维细胞中表达上调,与上述结果一致,并且发现S100A4在RA滑膜成纤维细胞中的表达分布发生了变化.结论:结合蛋白S100A4和S100A10可能参与RA的发病.S100A4在细胞中的表达易位可能与RA滑膜成纤维细胞表型改变有关.

类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞的差异蛋白质谱分析

目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异，探讨差异蛋白在类风湿关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度（immobilized pH gradient，IPG）双向凝胶电泳（two—dimensional gel eleetrophoresis，2-DE）分离正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质，银染显色，PDQuest软件分析图像，比较两种细胞蛋白质组表达差异，对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定，并用Western blot验证部分表达差异蛋白质。结果①采用窄范围的pH4～7IPG胶条进行2-DE分析，正常人及RA患者滑膜细胞蛋白胶图上分别平均显示852、837个点。有49个蛋白点在正常、RA滑膜细胞问有2倍以上的显著性量变。②分别在胶图上共选取40个表达水平存在明显差异的蛋白质点进行质谱鉴定，鉴定出23个在RA患者滑膜细胞中表达上调蛋白质。Western blot验证Enolase α、Annexin I、CathepsinD、SOD2、Peroxiredoxin2在RA滑膜细胞中表达显著升高。结论正常人及类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异。这些差异蛋白可能参与类风湿关节炎的发病。

鳖甲煎改良方对肝星状细胞生长及TGFβ1、Smad3与Smad7表达的影响

目的探讨鳖甲煎改良方(modified turtle shell decoction,MTSD)对肝星状细胞T6(hepatic stellate cell T6,HSC-T6)TGFβ1、Smad3及Smad7表达的影响。方法用含生药量为0.71 g/ml的MTSD处理HSC-T6作为实验组,与MTSD剂量相同的鳖甲煎丸(turtle shell pills,TSP)处理的HSC-T6作为阳性对照组,常规培养的HSC-T6作为正常对照组,倒置显微镜下观察比较各组HSC-T6的形态变化。CCK-8检测各组HSC-T6细胞的生长情况,并绘制生长曲线;采用Real time-PCR、免疫荧光细胞化学及Western blotting技术分别检测各组HSC-T6的TGFβ1、Smad3及Smad7基因及其编码蛋白的表达变化。结果倒置显微镜下观察显示,与阳性对照细胞比较,MTSD处理48 h的HSC-T6,胞体变小,部分细胞死亡碎裂。CCK-8检测证实,MTSD对HSC-T6生长具有抑制作用,与2个对照组比较,MTSD处理的HSC-T6的生长减慢,从48 h开始差异具有统计意义(P<0.01)。Real time-PCR、免疫荧光细胞化学及Western blotting检测显示,MTSD能在m RNA及蛋白水平明显下调HSC-T6的TGFβ1、Smad3的表达,上调其Smad7的表达,与2个对照组相比,差异均具统计学意义(P<0.01)。结论 MTSD能有效抑制HSC-T6的生长,下调其TGFβ1、Smad3的表达,同时使Smad7的表达上调。MTSD抑制HSC-T6的生长可能与干扰TGFβ1/Smad3信号通路密切有关。

谷氨酸在低氧性脑损伤中的作用

目的探讨谷氨酸(Glu)在低氧性脑损伤的作用机制。方法实验采用氨基酸分析和放免技术,研究缺氧后12,24,48h脑组织Glu和钙调蛋白(CaM)含量的变化以及钙/钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/CaM-PKⅡ)活性的影响及其机制。结果缺氧组脑组织Glu、CaM含量在缺氧后48h明显高于12,24h和对照组;缺氧组脑组织Ca2+/CaM-PKⅡ活性在缺氧后48h明显低于12,24h和对照组;而N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂地佐环平(MK-801)和钙通道拮抗剂尼莫地平(nimodipine)可对抗这种改变。结论缺氧后Glu的兴奋毒引起脑损伤和Ca2+/CaM-PKⅡ的活性下降,主要由NMDA受体介导和胞外Ca2+内流增加有关。

人骨关节炎滑膜成纤维细胞差异蛋白质谱初步分析

目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在骨关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度(immob ilized pH grad ient,IPG)双向凝胶电泳(two-d imensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest2-DE软件分析图像,比较2种细胞蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定。结果胶图差异分析显示36个表达水平存在明显差异的蛋白质,选取15个点进行质谱鉴定,鉴定出6个表达上调蛋白质。结论正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异。这些差异蛋白可能参与骨关节炎的发病。

益气活血药对慢性缺氧大鼠肺血流动力学的影响

目的:探讨由黄芪、川芎组方的益气活血药对慢性缺氧大鼠肺血流动力学的影响。 方法:将Wistar大鼠分为3组:正常组、缺氧组、中药组(给药浓度270g/L),各组12只。通过常压间断缺氧21d建立大鼠肺动脉高压模型,采用右心导管法检测肺血流动力学指标。观察益气活血药对肺血流动力学的影响。 结果:正常组、缺氧组、中药组的肺动脉平均压分别为(21.3±1.5)mmHg,(37.0±7.1)mmHg,(24.1±2.0)mmHg,缺氧组明显高于正常组(t=6.845,P<0.01),中药组与正常组相比,无显著性差异(t=0.241,P>0.05);右室收缩压、右室压力最大上升(下降)速率、血细胞比容、心率在各组之间的比较也得到上述结果,中药组的益气活血药可降低肺动脉压,改善心功能及血液流变学。 结论:由黄芪、川芎组方的益气活血药可防止低氧性肺动脉高压的形成。

益气活血药对低氧性肺动脉高压大鼠神经肽Y、降钙素基因相关肽的影响

目的 :探讨由黄芪、川芎组方的益气活血药对低氧性肺动脉高压大鼠神经肽Y(NPY)、降钙素基因相关肽 (CGRP)的影响。方法 :采用常压低氧 2 1天复制大鼠肺动脉高压模型 ,应用放射免疫技术测定大鼠血浆、肺组织中NPY、CGRP的含量变化。结果 :益气活血药可降低肺动脉压 ,改善心功能及血液流变学。益气活血药中剂量组血浆及肺组织中NPY含量与缺氧组比较明显降低 ;而CGRP含量较缺氧组有所回升 ,肺组织中CGRP含量与缺氧组比较则趋于下降。结论 :益气活血药可防止低氧性肺动脉高压的形成 ,也提示益气活血药的降压作用可能通过影响NPY、CGRP的含量来调节肺血管舒缩 。

低氧性肺动脉高压大鼠PLA_2、TNF的含量变化及意义

为探讨ＰＬＡ２、ＴＮＦ与肺血管收缩，肺动脉高压形成的关系，本研究建立了常压低氧大鼠肺动脉高压模型，观察这些物质的含量变化并探讨其意义。１材料与方法１．１动物及分组Ｗｉｓｔａｒ鼠１８只，雌雄不拘，体重１８０～２４０ｇ。随机分为正常对照组（６只），慢性缺...

浅谈多媒体教学的利与弊

多媒体教学以其题材丰富形象、形式新颖、课堂信息量大、节约课堂时间等优势,确立了现代教学手段中的主要地位.但现阶段的多媒体教学还存在一些需要改进之处.本文分析了多媒体教学的利弊,探讨了多媒体教学应用中出现的问题,并提出了相应的改进对策.

益气活血中药对常压缺氧性大鼠肺动脉压的影响

目的:探讨益气活血中药(下简称中药)对低氧性肺动脉压升高的干预作用。方法:将实验动物分为5组,即正常组、缺氧组、中药低剂量组(0.45 g/kg)、中药中剂量组(1.35 g/kg)和中药高剂量组 (2.70 g/kg)。通过常压间断缺氧21天建立大鼠肺动脉高压模型,采用右心导管法检测肺血流动力学指标,观察中药对肺血流动力学的影响。结果:中药低、中、高3个剂量组肺动脉压均降低,心功能及肺血液流变学得到改善,其中中、高剂量组效果较佳。结论:益气活血中药可防止低氧性肺动脉高压的形成。

大鼠NPY、CGRP的含量变化与代氧性肺动脉高压的关系

目的 探讨低氧性肺动脉高压形成的机制。方法 采用常压低氧21d复制大鼠肺动脉高压模型，应用放射免疫技术测定大鼠血浆、肺组织中神经肽Y（NPY）及降钙素基因相关肽（CGRP）的含量变化。结果 缺氧组大鼠血浆及肺组织中NPY含量明显高于正常组，而血浆CGRP含量较正常组明显降低，肺组织中CGRP含量明显高于正常组。结论 NPY、CGRP与低氧下肺血管的收缩及肺动脉高压的形成有密切的关系。局部组织中CGRP的升高可能是机体的一种代偿机制。

Th1/Th2细胞因子谱在类风湿关节炎患者外周血和关节积液中的表达及意义

目的鉴定类风湿关节炎患者外周血和关节积液中Th1/Th2细胞因子谱的表达并探讨其在炎症中的意义。方法采用微量样本多指标流式蛋白定量技术(cytometric bead array,CBA)检测41例类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者(2006年1月至2007年12月西南医院风湿病中心首诊病例)血清和关节积液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ的表达。对照组(n=5)为西南医院健康查体人员。结果与对照组和/或RA患者外周血比较,RA患者关节积液中IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-10的表达显著增高(P<0.01),IFN-γ和IL-6的表达在RA患者外周血中也显著增高(P<0.01),TNF-α的表达在RA患者关节积液和外周血中也增高(P<0.05),并且在关节积液中IFN-γ/IL-4比例显著增高(P<0.01)。与抗环瓜氨酸肽抗体(cyclic citrullinated peptide,CCP)阴性的患者相比,CCP抗体阳性的患者关节积液中IL-2、IL-6表达增高(P<0.05),TNF-α和IFN-γ的表达显著增高(P<0.01)。结论Th1/Th2极化失衡是RA炎症损伤的主要免疫病理机制,在关节局部是以Th1极化诱导的炎症反应为主,并且CCP抗体阳性患者关节炎症程度明显高于CCP抗体阴性患者。

401例类风湿关节炎患者中医证候要素分析

目的对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者的中医症状及相关资料进行统计分析,探讨其结果与相关指标间的关系。为RA的证候学研究及临床治疗提供依据。方法采用临床流行病学的方法设计调查问卷,收集分析资料,利用多元统计方法进行数据统计。结果401例RA患者中医症状可归纳为寒、热、虚3个公因子,可分为寒证、热证、虚证、寒热错杂证、虚寒证、虚热证6类证候。差异性统计分析结果提示健康问卷调查评分、血小板、类风湿因子、抗角蛋白抗体在各证候间有统计学差异(P<0.05)。结论重庆地区RA患者中以寒热错杂证多见,热证多见于疾病活动期,而稳定期多见寒证,RA疾病活动性与中医证候相关。

青藤碱对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞核因子κB信号转导的影响及其机制(英文)

背景:青藤碱是从中药青风藤中提取的生物碱单体,在治疗类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)方面,具有较明确的疗效,但其治疗机制尚不清楚。目的:观察不同剂量的青藤碱体外作用对佐剂性关节炎(adjuvantarthri-tis,AA)大鼠滑膜细胞核因子-κB(NF-κB)活性及肿瘤坏死因子(TNF-αmRNA、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA、白细胞介素10(IL-10)mRNA的影响,以阐明该药治疗RA的可能机制。设计:以细胞为研究对象,分组对照的重复测量设计。单位:一所军医大学医院的中医科和烧伤研究所。材料:实验于2002-03/2002-10在全军烧伤研究所实验室完成。实验动物为健康清洁级雄性Wistar大鼠25只。以AA大鼠为模型,收集滑膜细胞,依次作如下分组:正常对照组,AA组,AA+青藤碱30mg/L组,AA+青藤碱60mg/L组,AA+青藤碱120mg/L组。电泳迁移率改变分析法测NF-κB的活性,反转录PCR检测TNF-αmRNA,IL-1βmRNA,IL-10mRNA的表达。主要观察指标:不同剂量的青藤碱体外作用对后佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞NF-κB活性,TNF-1βmRNA,IL-1βmRNA及IL-10mRNA的对比结果。结果:与正常对照组相比,AA后滑膜细胞内NF-κB活性与TNF-αmR-NA,IL-1βmRNA,IL-10mRNA的表达均显著升高,分别为17±6,0.570±0.047,0.730±0.093,0.683±0.081(t=2.71～4.07,P<0.05)。?

青藤碱对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞因子表达的影响

目的 :观察青藤碱对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞核因子 κB(NF κB)活性及TNF αmRNA、IL 1βmRNA、IL 10mRNA的影响 ,阐明该药治疗类风湿关节炎的可能机制。方法 :以佐剂性关节炎大鼠为模型 ,收集滑膜细胞 ,采用电泳迁移率改变分析法检测NF κB的活性 ,反转录 PCR检测TNF αmRNA、IL 1βmRNA、IL 10mRNA的表达。 结果 :佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞内NF κB活性与TNF αmRNA、IL 1βmRNA、IL 10mRNA的表达均显著升高 ,青藤碱在一定的浓度范围内呈浓度依赖性抑制NF κB活性与TNF αmRNA、IL 1βmRNA的表达 ,而对IL 10mRNA的抑制效应与浓度无关。 结论 :青藤碱可能通过抑制NF κB活性而降低滑膜细胞内TNF αmRNA及IL 1βmRNA的表达。

补肾壮骨胶囊治疗原发性骨质疏松症的研究

目的观察补肾壮骨胶囊治疗原发性骨质疏松症的安全性和有效性。方法采用双盲、双模拟、平行对照法,48例原发性骨质疏松症患者分别服用补肾壮骨胶囊1.458/粒,2粒/次,3次/d)和骨松宝颗粒(10g/袋,1袋/次,3次/d)。6个月后分析疗效。结果补肾壮骨胶囊的临床显效率和总有效率分别为50%和100%,与对照药骨松宝颗粒相同。经双能X线骨密度检测,补肾壮骨胶囊可使原发性骨质疏松症患者L2～4的骨密度(g/cm2)由0.71±0.06提高到0.75±0.07(t=-2.08,P<0.05);股骨粗隆的骨密度由0.65±0.01提高到0.71±0.09(t=2.09,P<0.05)。两组患者治疗前后血清钙、血清磷、碱性磷酸酶、尿钙、尿羟脯氨酸水平差异无显著性意义(t=0.5～1.19,P>0.05)。两组不良反应发生率也无显著性差异(χ2=1.03,P>0.05)。结论补肾壮骨胶囊治疗原发性骨质疏松症,其机制为提高患者的骨密度、抑制骨吸收、减少骨量丢失。

健脾益肾升白汤治疗肿瘤放化疗后白细胞减少症

目的观察健脾益肾升白汤治疗恶性肿瘤放、化疗致白细胞减少症的临床疗效。方法将64例恶性肿瘤放、化疗白细胞降低患者随机分为2组,治疗组34例采用健脾益肾升白汤治疗,对照组30例采用利可君片治疗。结果治疗组的总有效率为91%,而对照组仅为63%,2组比较有显著性差异(P<0.05)。结论健脾益肾升白汤对恶性肿瘤放、化疗后白细胞减少具有良好的治疗作用。