黄颡鱼病原嗜水气单胞菌分离鉴定及致病性研究

2015年江苏淮安地区养殖黄颡鱼暴发出血性肠炎。从濒死鱼肠组织和腹水中分离纯化出2株细菌,通过16S rRNA进化树分析显示,这2株菌与气单胞菌属的嗜水气单胞菌亲缘关系较近。致病性试验显示,2株菌对健康黄颡鱼具有较强的致病性,病原菌浓度达到5×10~4CFU/m L时,死亡率在40%~50%,病原菌浓度达到5×10~8CFU/m L时,死亡率在90%~100%。药敏试验显示,分离到的2株菌都对依诺沙星、头孢曲松、舒巴坦、恩诺沙星敏感。确定了淮安地区暴发的黄颡鱼出血性肠炎病原为嗜水气单胞菌,对黄颡鱼健康养殖和疾病防控具有重要意义。

中华绒螯蟹多倍体诱导的研究进展

水产动物多倍体诱导是一项具有重要经济价值的生物技术,其诱导方法包括物理、化学以及生物学等方法。关于水产类动物多倍体的诱导在鱼类和贝类中已有过较多的报道,相比之下对十足目甲壳类动物的研究就比较缓慢,仅在日本绒螯蟹、中国对虾、罗氏沼虾等少数虾蟹中有过报道。通过物理热休克法对河蟹进行多倍体诱导可以得到50%的三倍体率和52%的四倍体率,细胞松弛素B(CB)溶液处理河蟹受精卵来进行诱导也获得了58.18%的三倍体率和57.89%的四倍体率。将KCl溶液添加到一定盐度的海水里进行河蟹三倍体诱导试验,在探索到诱导的最佳时间和浓度后获得了100%的三倍体诱导率。本文综述多倍体诱导的原理、方法以及发展过程,对中华绒螯蟹多倍体的多种诱导方法及其诱导效果进行了比较,旨在为中华绒螯蟹多倍体诱导的研究提供参考。

“清苔灵”对河蟹、青苔及2种水草的毒性试验

[目的]探讨"清苔灵"对河蟹、青苔和2种水草的毒性。[方法]采用正交法和梯度法在添加水草和空白水体中加入"清苔灵",研究"清苔灵"对河蟹、青苔和2种水草的毒性。[结果]有蟹组"清苔灵"浓度达到30 mg/L时对河蟹无毒害作用,对水质影响有限。无蟹组高浓度"清苔灵"有稳定水体的pH的作用,氨氮、硫化氢和亚硝酸盐虽有较微升高,但对河蟹的生长影响不大。[结论]该研究可为"清苔灵"在河蟹养殖中的合理使用提供依据。

氯化钙对中华绒螯蟹卵巢组织中5种酶活性的影响

在盐度为1.2%的海水中,添加2、4、6、8、10 g/L CaCl2,可对中华绒螯蟹卵巢中超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LZM)的活性产生影响。结果表明,中华绒螯蟹在试验海水中浸泡4 h后,与对照组相比,试验组中华绒螯蟹卵巢中5种酶的活性随CaCl2浓度上升均出现了不同程度的降低;当CaCl2浓度为2 g/L时,除LZM外其他免疫酶的活性均显著下降;当CaCl2浓度为10 g/L时,各种酶的活性均降至最低,AKP、ACP的活性分别为对照组的2.81%、1.10%,SOD、CAT的活性分别为对照组的2.99%、1.48%,LZM活性为对照组的44.01%。说明提高海水中CaCl2浓度会引起中华绒螯蟹体内自由基代谢的紊乱,从而导致机体正常生理功能的破坏和免疫力的下降。因此继续提高海水中的CaCl2浓度,将会影响中华绒螯蟹的活性和成活率。

壳聚糖对克氏原螯虾生长、血清相关免疫因子、肌肉成分和消化酶的影响

以体质量为(21.55±1.62)g的克氏原螯虾Procambarus clarkii为研究对象,投喂壳聚糖添加量分别为0(对照)、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、3.0%的饲料,研究壳聚糖对克氏原螯虾生长、血清相关免疫因子、肌肉成分和消化酶活性的影响。试验共进行60 d。结果表明:1.0%壳聚糖添加组试验虾的特定生长率显著高于其他各组(P<0.05),1.5%壳聚糖添加组试验虾的死亡率和蜕壳死亡率均最高,且显著高于对照组(P<0.05);1.0%和2.0%壳聚糖添加组试验虾血清中的酚氧化酶(PO)活性显著高于对照组(P<0.05),各添加组血清中碱性磷酸酶(ALP)活性均显著高于对照组(P<0.05);除1.0%、2.0%壳聚糖添加组外,其他添加组血清中谷丙转氨酶(ALT)活性均低于对照组;各添加组血清中谷草转氨酶(AST)的活性均显著低于对照组(P<0.05);除2.0%壳聚糖添加组外,其他添加组试验虾肌肉粗蛋白质含量较对照组均低;除2.0%壳聚糖添加组外,其他添加组粗脂肪含量较对照组均高,其中1.0%、1.5%和3.0%添加组显著高于对照组(P<0.05);仅1.0%添加组肌肉灰分显著低于对照组(P<0.05);仅2.0%添加组肌肉水分含量显著高于对照组(P<0.05);1.0%添加组试验虾肝胰腺中胰蛋白酶和脂肪酶活性以及肠道中的脂肪酶活性显著高于对照组(P<0.05);1.5%添加组试验虾肝胰腺和肠道中的淀粉酶活性均显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,在本试验条件下,建议成虾饲料中壳聚糖的添加量为0.5%～1.5%,壳聚糖对克氏原螯虾起到一定的免疫保护作用,并能增强其消化生理机能。

壳聚糖对克氏原螯虾存活、血清生化指标和非特异性免疫功能的影响

以基础饲料为对照,在基础饲料中分别添加0.0%(对照)、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、3.0%的壳聚糖,分别投喂平均体重为(21.55±1.62)g的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)60 d,研究壳聚糖对克氏原螯虾存活、蜕壳、血液生化指标及非特异性免疫功能的影响。结果显示:0.5%添加组存活率为84.44%,与对照组和1.0%添加组无显著性差异;总蜕壳率和相对增重率随壳聚糖含量升高而呈现先升高后降低的趋势,当添加量为1.0%时,总蜕壳率和相对增重率显著高于对照组;各试验组肝胰指数差异不显著。2.0%添加组血清中总蛋白、白蛋白和总胆固醇显著高于对照组,添加组甘油三酯的含量显著高于对照组。1.5%添加组血清和肝胰腺中的溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著高于对照组;与对照组相比,0.5%添加组血清中的酸性磷酸酶(ACP)和过氧化氢酶(CAT)的活性显著升高;0.5%添加组肝胰腺中CAT活性最高,为4.93 U/mL,显著高于对照组。结果说明,壳聚糖可以提高克氏原螯虾的生长性能和非特异性免疫功能,饲料中添加0.5%～1.5%较为适宜。

不同放养密度和水草覆盖率下克氏原螯虾池塘底泥中微生物群落特征

在底部埋有生物饵料培养基的克氏原螯虾池塘中,利用变性梯度凝胶电泳和基因测序技术,研究了2种放养密度(375 kg/hm2、600 kg/hm2,即A和B组)和2种水草覆盖率(占水域面积比20%、35%,即C和D组)条件下(每组设2个重复),底泥中微生物菌落结构特征。试验结果表明:4个试验组池塘底泥中微生物种类和数量存在一定差异。各试验组池塘底泥微生物的Shannon指数分别为2.72、2.94、2.82和2.96,说明水草覆盖率35%试验组池塘底泥微生物种类最丰富。聚类分析表明,不同月份不同处理组池塘底泥微生物群落结构相似度偏低,而放养密度600 kg/hm2试验组和水草覆盖率20%试验组在8月份相似度较高(70%以上),整体上,各样品在时间上的相似度比空间上的相似度高。对微生物组成多样性的分析表明,4组池塘底泥微生物克隆主要隶属于4个门:变形菌门(71%)、疣微菌门(9%)、放线菌门(8%)、绿弯菌门(11%)及其他门类未知的菌群,其中变形菌门的Ideonella属占主要优势,占总比例的24%。

黄芪多糖对鲤化学性肝细胞损伤的抑制作用

为探讨黄芪多糖对鲤肝细胞的保护作用,利用8 mmol/L的四氯化碳(CCl4)作用肝细胞4 h来构建鲤肝细胞体外损伤模型,用不同质量浓度(0.2、0.4和0.8 mg/mL)的黄芪多糖分别前处理、后处理和前后处理肝细胞,然后观察肝细胞形态,检测肝细胞活力,细胞上清中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量以及肝细胞中细胞色素P450酶1A和3A(CYP1A和CYP3A)mRNA的相对表达量。结果显示:黄芪多糖显著地抑制由CCl4损伤引起的肝细胞培养上清中GPT、GOT、LDH活性和MDA含量的升高,提高SOD活性及肝细胞的活力(P<0.05或P<0.01);同时,0.4和0.8 mg/mL黄芪多糖显著提高CYP1A mRNA的相对表达量(P<0.05),0.4 mg/mL黄芪多糖显著提高CYP3A mRNA的相对表达量(P<0.05),形态学观察结果也显示黄芪多糖有效地抑制鲤肝细胞死亡。以上结果表明,黄芪多糖可有效保护鲤化学性肝细胞损伤,并对CYP1A和CYP3A的表达有积极作用。

不同饵料培养基对克氏原螯虾池塘浮游藻类及水质的影响

【目的】筛选出适合克氏原螯虾养殖的新型饵料培养基,为开展池塘施肥养殖虾蟹提供科学依据。【方法】将不同饵料培养基(底栖饵料生物培养基、鸡粪培养基、鸡粪+猪粪混合培养基)施入克氏原螯虾养殖池塘,每种培养基设两个重复,试验期间以视野法计数浮游藻类,并测定pH、溶解氧(DO)、氨氮、亚硝酸盐、H2S等相关水质化学指标。【结果】与其他池塘相比,施底栖饵料生物培养基池塘的蓝藻门和裸藻门种类数明显减少,硅藻门种类数极显著增加并成为优势种群(P<0.01);浮游藻类的Margalef丰富度指数和Shannon-Weaver多样性指数也均高于其他两种培养基。在浮游藻类生物量方面,施底栖饵料生物培养基池塘的硅藻门生物量及其所占比例分别为51.01 mg/L和44.4%,约是其他两种培养基的两倍;而裸藻门和蓝藻门的生物量及其所占比例也明显低于其他两种培养基。在水质化学指标方面,底栖饵料生物培养基能稳定水体pH,有效降低氨氮、亚硝酸盐和H2S含量。【结论】底栖饵料生物培养基可有效抑制有害蓝藻的繁殖,促进有益藻类生长并改善水质,在螯虾池塘养殖中可大面积推广应用。

精养克氏原螯虾池塘底泥微生物群落特征分析

【目的】分析克氏原螫虾不同放养密度和水草覆盖率下池塘底泥微生物群落结构特征，为构建克氏原螯虾的健康养殖模式提供参考依据。【方法】以底部埋有生物饵料培养基的克氏原螯虾池塘为研究对象，利用PCR．DGGE和基因测序技术，研究不同放养密度（375、600kg／ha）和水草覆盖率（20％、35％）条件下的底泥微生物菌落结构特征；2种放养密度和2种水草覆盖率按随机区组排列，设4个处理组（A、B、C和D组），每组重复2次。【结果】4个处理组4～6月池塘底泥中微生物种类和数量均存在一定差异，各处理组池塘底泥微生物的Shannon．Wiener指数分别为3．03、3．35、3．24和3．40，以D组池塘底泥微生物种类最丰富。UPGMA分析结果表明，不同月份不同处理组的池塘底泥微生物群落结构相似度偏低，而B组在4月和5月聚成一支，相似度相对较高（在65％以上），各样品在时间上的相似度总体上高于空间相似度。4组池塘底泥微生物克隆主要隶属于4个门：变形菌门（45％）、绿弯菌门（36％）、拟杆菌门（11％）、螺旋体门（7％），其中绿弯菌门的绿弯菌属占主要优势，占总细菌比例为19％。【结论】在底埋培养基的克氏原螯虾池塘中，放养密度和水草覆盖率对底泥菌群结构及组成多样性均有影响，以虾放养密度600kg/ha、水草覆盖率35％的池塘底泥微生物多样性指数和丰富度指数最高，更有利于维持池塘底质微生态的稳定。

一龄四指马鲅形态性状对体重的影响分析

在人工养殖的一龄四指马鲅中随机选取236尾,测量其全长、体长、体重、体高、体厚等11个表型性状,以表型性状为自变量,采用通径分析计算体重为因变量的决定系数、通径系数及复相关指数。然后比较各个表型性状对体重的影响大小,确定各表型性状中影响一龄四指马鲅体重的主要外部形态性状,为四指马鲅选育提供理论依据和测量指标。结果表明:体重与所测定的表型性状的相关系数都达到了其显著水平(P<0.01);叉长对体重的直接影响(0.696)最大和决定程度(48.44%)最高,是影响体重的主要因素。体重与实验研究中所选表型性状的复相关系数为R2=0.909,表明实验所选性状是主要影响体重的表型性状。以体高、体厚和叉长为自变量,利用逐步回归分析方法,建立估计体重的多元回归方程为:y=-96.045+6.231x3+7.636x8+9.609x7。

壳聚糖对水质和克氏原螯虾仔虾非特异性免疫酶的影响

用0、0.25%、0.50%、0.75%壳聚糖溶液浸泡克氏原螯虾仔虾,探讨壳聚糖对相关水质因子和克氏原螯虾仔虾非特异性免疫酶的影响。结果显示,处理后7 d,pH值的变化不显著(P>0.05),各试验组铵态氮、H2S和亚硝酸盐的浓度与对照组差异显著(P<0.05)。随着处理时间延长,各组酸性磷酸酶(ACP)活性先下降后上升,7 d时0.50%、0.75%组ACP显著高于对照组。碱性磷酸酶活性呈上升趋势,试验组与对照组差异不显著。过氧化物歧化酶(SOD)的活性先下降后上升,7 d时0.50%组SOD显著高于对照组。各组过氧化氢酶活性多呈略微下降后上升趋势,到7 d时,各试验组均显著高于对照。丙二醛(MDA)的浓度呈下降趋势,处理后2 d到试验结束,各试验组MDA的浓度均显著低于对照。

克氏原螯虾池塘放养密度对浮游生物群落的影响

研究了在克氏原螯虾和河蟹3个放养密度水平下浮游生物群落的变动情况。结果表明:可能由于浮游动物的摄食对浮游植物产生影响,二者生物量的消长在大多数池塘中都呈负相关。随着养殖密度的增加,浮游植物生物量增加,而浮游动物有所减少;前者的优势种群由硅藻门和绿藻门变为裸藻门、蓝藻门和甲藻门等有害藻类,后者由枝角类、哲水蚤和剑水蚤等大型浮游动物变为轮虫、原生动物和无节幼体等小型浮游动物为主。浮游动植物比值与虾蟹放养密度呈显著的负相关性。在考虑生态效益和经济效益最适的情况下,以中密度养殖最为适宜。

培养基和放养密度对池塘底质及底栖动物的影响

研究了3种底栖动物培养基和3种虾、蟹混养方式对池塘底质总氮、总磷、总有机碳积累量和底栖动物种类及其生物量的影响。3种培养基（底栖饵料生物、鸡粪、鸡粪与猪粪混合）和3种虾、蟹混养方式（虾、蟹分别为6000、1000,8000、800,10000、300 ind./667 m2,虾放养规格为300-400尾/kg,蟹放养规格为120只/kg）按随机区组排列,共设置9个试验组,每组设3个重复。结果表明：底栖饵料生物培养基组的总氮、总磷和总有机碳积累量均显著低于鸡粪培养基和鸡粪与猪粪混合培养基组（P〈0.05）,而底栖动物种类及总生物量明显高于其他培养基组（ P〈0.05）；在不同培养基条件下,高密度克氏原螯虾Procambarus clarkia组底质中总氮、总磷和总有机碳积累量均显著高于克氏原螯虾中、低密度组（P〈0.05）,而底栖动物生物量明显低于中、低密度组（P〈0.05）；养殖密度水平对底栖动物种类则无显著影响（P〉0.05）。研究表明,为兼顾生态效益和经济效益,采用底栖饵料生物培养基,克氏原螯虾与河蟹Eriocheir sinensis的养殖密度分别为8000、800 ind./667 m2时的组合为最佳。

猪血多肽对草鱼离体培养免疫细胞活性的影响

【目的】评估猪血多肽对草鱼的免疫增强作用,为进一步推广猪血多肽在水产养殖中的应用提供参考依据。【方法】采用密度梯度离心技术分离纯化草鱼头肾细胞、巨噬细胞和外周血白细胞,分别体外暴露在不同质量浓度的猪血多肽(0、10、20、40、80μg/mL)中作用24 h,然后测定草鱼外周血白细胞增殖、巨噬细胞呼吸爆发活性和头肾细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,以探讨猪血多肽对草鱼体外培养免疫细胞活性的影响。【结果】猪血多肽体外作用24 h后,有效促进了草鱼体外培养免疫细胞的免疫活性,且以80μg/mL猪血多肽的增效作用最明显,能极显著促进外周血白细胞增殖和增强巨噬细胞氧呼吸爆发活性(P<0.01),显著提高巨噬细胞氮呼吸爆发活性和头肾细胞SOD活性(P<0.05)。【结论】猪血多肽对草鱼非特异性免疫具有促进作用,且作用效果呈剂量依赖性。实际生产中,可将猪血多肽开发成一种免疫添加剂,以增强水产动物对疾病的抵抗能力,提高水产养殖效益。

气质联用法检测水产品中己烯雌酚含量并用液相色谱串联质谱验证

改进了水产品中己烯雌酚的检测方法。样品用乙酸乙酯提取,HLB固相萃取柱净化,BSTFA-TMCS吡啶溶液80°C衍生;经过HP-5MS(30m×0.25mm,0.25μm)毛细色谱柱分离,再经过单四级杆质谱仪选择离子扫描(m/z:383、397、412、413)确定两种结构的衍生物,用气质联用仪检测其衍生物从而间接检测己烯雌酚。以反式衍生物做定量物质,在5-180μg/kg浓度范围获得良好线性(R=0.995);3个添加浓度(1、2、5μg/kg)下的平均回收率为90.15%-92.82%,标准偏差为6.7%-9.3%。阳性样品经过乙酸乙酯提取后吹干,HLB固相萃取柱净化,甲醇定容后,用配备RBAX SB-C18柱(2.1×150mm,3.5μm)的高分辨率液相色谱串联质谱仪进行验证,确保检测的可靠性。

分析欧盟食品和饲料快速预警系统对宠物食品通报数据的报告

通过对欧盟食品和饲料快速预警系统(RASFF)2006—2014年涉及宠物食品的通报信息进行分析研究,发现产品的通报主要以微生物、黄曲霉毒素、化学危害和未经授权的转基因为主,而我国出口宠物食品风险主要为肠杆菌科超标。分析报告提示出口宠物食品企业需严格控制微生物污染,同时监管部门还应关注进出口宠物食品中未列入安全风险监控的项目。

培养基投放对池塘表层底泥磷形态及底栖饵料生物培育效果的影响

【目的】探究培养基投放对池塘表层底泥磷形态及底栖饵料生物培育效果的影响,为新型培养基在池塘生态健康养殖中的推广应用提供参考依据。【方法】在池塘中按不同比例[4.50×10~3(处理1)、1.35×10~4(处理2)、6.75×10~4(处理3)kg/ha]投放培养基,以不投放培养基为对照,每处理设2个平衡。分别于春、夏、秋三季,每季度采集池塘表层底泥两次,测定不同磷形态含量;每月采集底栖饵料生物一次,统计其生物量。【结果】投放培养基后,池塘底栖水蚯蚓的数量密度随培养基投放比例的增加而增加,而摇蚊幼虫的生物量表现为:处理2(12.82 g/m^2)>处理1(10.77 g/m^2)>处理3(10.02 g/m^2)>对照(8.19 g/m^2),其中处理1、2、3分别比对照高20.85%、43.90%和12.50%。池塘表层底泥中总磷(TP)、无机磷(IP)、钙结合态磷(Ca-P)、铝吸附态磷和(Al-P)及弱吸附态磷(Labile-P)含量均表现为:处理3>处理2>处理1>对照,即与培养基投放量呈正相关;各培养基投放处理组Labile-P含量的季节变化表现为:秋季>春季>夏季,Fe-P、Al-P和Ca-P含量的季节变化表现为:春季>夏季>秋季。Labile-P与Fe-P的平均含量分别高出对照27.00%和31.00%左右。【结论】在池塘中投放培养基可有效提高底栖饵料生物的生物量,其对池塘表层底泥不同磷形态的贡献主要表现为增加Labile-P和Fe-P的含量,尤其是Fe-P的增加有利于摇蚊幼虫培育,更好地为虾蟹类池塘养殖提供天然饵料。

淮安地区首次进口粗鱼油

6月6日，一批货值20万美元的摩洛哥粗鱼油抵达连云港口岸后，直接转检至进口企业所在地淮安市洪泽县工业园区，由淮安检验检疫局完成全过程监管，成为检验检疫一体化以来首批通关直放的进口食品。这也是淮安地区首次进口的动物源性食品。

氯化钙对河蟹肝胰腺中几种酶活性的影响

在盐度为12的海水中,添加不同浓度的CaCl2(2、4、6、8、10g/L)可对中华绒螯蟹肝胰腺中超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化氢酶(CAT)以及溶菌酶(LZM)的活性产生影响。结果表明:在实验海水中浸泡4h后,实验组与对照组河蟹肝胰腺中5种酶的活性随着CaCl2浓度的上升均出现了不同程度的降低,当CaCl2浓度为10g/L时,活性最低;ACP和AKP分别为对照组的56.72%和40.76%;SOD与CAT的活性在10g/L时为对照组的20.11%和7.32%;LZM的活性为对照组的60.14%;该结果说明:正常海水中CaCl2浓度的提高会导致河蟹体内自由基代谢的紊乱,从而影响机体的正常生理功能和免疫力。除LZM外,当CaCl2浓度为4g/L时,其它免疫酶的活性均表现出向下的拐点。因此,继续提高海水中的CaCl2浓度,将对河蟹成活率产生不利的影响。