LRP16结合poly(ADP-ribose)关键位点的识别

LRP16作为macro domain家族成员,可识别、结合poly(ADP-ribose),参与DNA损伤修复的早期反应.但究竟LRP16通过其何种氨基酸位点识别、结合poly(ADP-ribose)(PAR)尚不十分清楚.本研究首先通过对LRP16蛋白的结构分析,查找LRP16结合PAR的候选氨基酸位点,然后利用丙氨酸扫描技术构建系列LRP16(点)突变体,并且进行原核蛋白表达与纯化,将获得的蛋白质进行斑点杂交实验,检测LRP16突变体蛋白与PAR的结合活性.测序结果显示,LRP16点突变基因序列成功插入到原核表达载体pGEX-6p-1中;斑点杂交实验显示,LRP16中第160位D和第161位I突变成A后,其与PAR结合能力明显减弱,而第181位G、183位V、184位D同时突变为A,LRP16与PAR的结合活性有部分减弱.结果表明,LRP16中第160位和第161位的氨基酸是其与PAR结合的关键位点.

Gateway技术构建转基因重组质粒pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP

目的构建转基因重组质粒pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP,为转基因鼠的建立奠定基础。方法利用重叠PCR技术扩增attB1-LRP16-His-attB2,经BP反应,将LRP16基因插入到载体pDown上,pUp-EF1A、pDown-LRP16-His、pTail-IRES-eGFP和PRP.Des3d经LR反应,将LRP16转移到pRP.EX3d上,转化Stbl3细胞,用氨苄西林进行抗性筛选,经PCR鉴定后将阳性克隆送测序。结果测序及酶切结果验证获得正确的pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP重组质粒。结论成功构建pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP重组质粒,可用于下一步LRP16转基因小鼠的构建。

结肠癌中ASPM对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的探讨头小畸形相关基因(abnormal spindle-like microcephaly associated,ASPM)对结肠癌细胞SW116和HCT116增殖、侵袭和凋亡的影响以及对β-catenin的调节作用。方法挑选ASPM含量较高的结肠癌细胞株HCT116和SW116。体外培养结肠癌细胞HCT116和SW116,设计siRNA-ASPM序列,转染细胞,分为阴性对照组(negative control,NC)组、siRNA1组和siRNA2组。采用CCK8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞的凋亡率。qRT-PCR和Western blot法检测HCT116各组细胞中ASPM和β-catenin mRNA和蛋白的表达。挽救实验探究加入LiCl处理后,结肠癌细胞中ASPM对β-catenin表达的影响。结果siRNA-ASPM转染HCT116和SW116细胞后,siRNA组中ASPM表达量下降(P<0.05)。与NC组相比,siRNA1组、siRNA2组细胞的增殖和侵袭能力均降低,凋亡率升高;siRNA1组、siRNA2组中ASPM和β-catenin蛋白表达明显降低(P<0.05)。挽救实验结果证实,与siRNA-ASPM组相比,LiCl能部分恢复β-catenin mRNA的表达。结论沉默ASPM表达可抑制结肠癌细胞活力,降低细胞侵袭能力并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

LRP16转基因小鼠的繁殖与鉴定

目的繁殖和鉴定携带有外源LRP16基因的转基因小鼠,为体内研究LRP16的生物学功能提供动物模型。方法首先将构建好的LRP16转基因重组质粒转染到293T细胞,鉴定该质粒是否可以有效表达目的蛋白,随后利用原核显微注射方法将线性化的重组质粒注射入品系为FVB的小鼠受精卵中,获得F0代小鼠。应用PCR方法对F0代小鼠进行鉴定,并将阳性F0代小鼠继续繁殖。结果 LRP16转基因重组质粒在293T细胞中可以有效表达,经PCR鉴定获得3只阳性F0代小鼠,阳性率为6.23%,选取其中1只整合有LRP16基因的F0代雄鼠,通过其与野生型FVB小鼠杂交获得7只F1代子鼠,其中4只为阳性鼠,阳性率为57.14%。从F1代中再次选取其中1只阳性雄鼠与野生型小鼠杂交繁殖获得5只F2代子鼠,PCR鉴定结果显示2只为阳性,阳性率为40%。结论 LRP16基因成功整合到小鼠基因组中,并且能够稳定遗传,为后续在动物整体水平研究LRP16的功能奠定了基础。

LRP16短发夹RNA慢病毒载体的构建及LRP16稳定抑制细胞的建立

目的:构建靶向LRP16基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,鉴定其在HeLa细胞中对LRP16的抑制效果。方法:构建pWPT-U6-LRP16shRNA-CMV-GFP慢病毒载体,通过病毒感染、细胞筛选、Western印迹等步骤,获得LRP16基因稳定抑制的细胞株。结果:构建了具有LRP16干扰效果的慢病毒载体,感染HeLa细胞后获得了稳定沉默LRP16及对照的细胞株;经克隆筛选,在荧光显微镜下观察到近似100%感染细胞发出绿色荧光;Western印迹证实pWPT-U6-L374-CMV-GFP和pWPT-U6-L668-CMV-GFP均可显著抑制HeLa细胞株中LRP16蛋白的表达,其中pWPT-Gsi-L374-GFP的抑制效果更好。结论:构建了靶向人LRP16基因shRNA慢病毒载体及LRP16稳定抑制的HeLa细胞系。

改良肌肉注射苄星青霉素的疼痛效果观察

目的探究改良肌肉注射苄星青霉素应用于链球菌感染患儿临床治疗中的疼痛效果。方法选取2018年1月至2019年5月首都医科大学附属北京儿童医院收治的240例链球菌感染患儿作为研究对象,所有患儿均接受双侧臀部苄星青霉素肌肉注射治疗。以自身对照法,对患儿左侧臀部实施常规苄星青霉素注射(常规组),右侧臀部实施改良肌肉注射苄星青霉素(改良组),对比患儿两侧臀部的一次注射成功率以及患儿疼痛反应程度。结果改良组患儿的一次注射成功率显著高于常规组(96.67%vs.65.00%,P<0.05),同时改良组患儿的疼痛等级显著低于常规组(P<0.05)。结论改良肌肉注射苄星青霉素的应用,可以提升一次性肌肉注射成功率,并有效降低患儿的疼痛反应。

稳字当头,小长小涨--8月份国内石化行业运行态势分析

8月,国内石油及炼制行业、塑料及制品行业、橡胶及制品行业整体平稳运行:有机化工产品r A的长一现;化纤市场整体先涨后跌。石油及炼制行业价格方面,虽然国际油价继续震荡,但多数石油及炼制产品保持均价环比上涨。截至8月31日,主营单位92号汽油批发均价5924元/吨,较7月底上涨1.61%,0号柴油批发均价5425元/吨,较7月底上涨0.06%;地练92号国六汽油币2比油市场吨,较7月上涨4.10%,0号柴油市场均价4754元/吨,较7月上涨0.11%。

年末化工产品价格普遍平稳收官

年末,国内石油及炼制行业稳中趋好运行;有机化工行业整体趋好运行;化纤行业市场行情震荡下行;塑料及制品行业继续向好运行;国内橡胶及制品行业弱稳运行。

整体运行平稳下价格涨跌交错--6月国内石化行业运行态势回顾

6月份国际油价上涨,国内石油及炼制行业运行平稳,化纤行业弱势震荡,有机化工行业、塑料及制品行业、橡胶及制品行业弱势运行。石油及炼制行业6月份石油炼制产品市场整体呈上涨走势。全国92号汽油均价为8026.60元(吨价,下同),环比上涨2.69%,同比上涨49.71%;0号柴油均价为6525.71元,环比上涨3.88%,同比上涨24.82%。

拉闸限电致能化价格七上八下

9月,石油炼制产品市场整体行情呈震荡上涨走势,有机化工市场保持稳定,化纤行业市场弱势震荡运行,塑料及制品价格均环比上涨,橡胶及制品市场运行显跌。

跟随国际能源价格上高台--10月国内全行业市场运行态势分析

10月,欧洲天然气紧缺依然严重,国际原油价格震荡上行,石油炼制产品价格大幅上涨。在此背景下,国内石油化工品、塑料及制品、橡胶及制品价格重心上移,化纤产品价格大幅走高后高位震荡。石油及炼制行业10月石油炼制产品市场整体呈震荡上行走势,其中成品油价格涨幅较大。

化工产品市场向稳回归

6月份有机化工行业整体运行平稳。一方面,国际油价震荡回暖,价格重心大幅提升,有机化工产品获得成本支撑;另一方面,主要产品开工负荷小幅波动,库存水平上升,供应承压。生产方面,甲醇装置平均开工负荷61.08%,较上月下降5.05个百分点,月产量预估502.76万吨,较上月减少43.62万吨。

疫情反扑导致乙醇价格再刷新高

近期疫情反扑是推动乙醇市场价格节节攀升的重要原因。截至2021年1月15日,国内乙醇市场均价为7125元/吨,同比上涨39.63%,环比上涨2.13%,较2021年首个交易日上涨4.48%。这是自2020年4月3日至今,乙醇市场经历的第5轮上涨行情,最终创下了历史最高价。

有弱有强皆在震荡调整--5月国内全行业市场运行态势分析

石油及炼制行业5月,石油及炼制行业运行示弱。国际油价重心上移,石油炼制行业成本增加,同时销售价格涨幅不及成本涨幅,山东地炼利润综合炼油亏损继续扩大。生产方面,主营炼厂及山东地炼平均开工负荷有升有降。其中,主营炼厂平均开工负荷为67.75%.