B细胞在荷瘤小鼠PD-(L)1抗体治疗中的作用

目的探讨肿瘤浸润性B细胞对程序性死亡受体(配体)1[programmed death(ligand)1,PD-(L)1]抑制剂治疗效果的影响,阐明B细胞影响免疫治疗的潜在机制。方法通过使用公共数据库中的黑色素瘤患者免疫治疗队列,分析B细胞与无进展生存时间(progression-free survival,PFS)以及免疫治疗响应的关系;使用TC-1和B16-OVA肿瘤细胞对6~8周龄雌性C57BL/6小鼠的皮下及肝脏进行荷瘤,构建肿瘤模型。比较B细胞清除对PD-(L)1抗体治疗效果的影响;对第15天的TC-1肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)进行流式细胞术检测,明确T细胞的数目、功能及表型变化;通过流式细胞术及实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)检测B细胞表面分子以及细胞因子。结果基于ICBatlas公共数据库中的ERP105482数据分析,肿瘤中CD19高表达的黑色素瘤患者PFS较低表达者更长(753 d vs 95 d,HR=0.3,95%CI:0.13~0.65,P=0.003)。B细胞在免疫治疗应答的患者中显著富集(P=0.01)。在小鼠TC-1肝脏荷瘤模型中,PD-(L)1抗体治疗后肿瘤质量明显减小(P<0.01),而B细胞的清除削弱了治疗效果。B细胞通过促进T细胞浸润和功能来增强PD-(L)1抗体治疗,且治疗后B细胞亚群发生变化,表现为PD-1低表达亚群增加(P<0.01)。结论PD-(L)1抗体治疗后,B细胞亚群中PD-1表达的下降可能是B细胞促进PD-(L)1抗体治疗效果的潜在机制。

肿瘤相关性贫血与SARS-CoV-2特异性记忆CD8^(+)T细胞丰度的相关性分析

目的 探讨肿瘤相关性贫血对外周血中新型冠状病毒特异性记忆CD8^(+)T细胞丰度的影响。方法 纳入2023年6-7月在火箭军特色医学中心住院治疗的HLA-A*11∶01阳性中晚期实体瘤患者34例。根据血红蛋白浓度将患者分为无贫血组(HGB≥120 g/L,n=14)、轻度贫血组(120 g/L> HGB≥90 g/L,n=14)与中重度贫血组(HGB<90 g/L,n=6)。分离外周血单个核细胞,利用新冠病毒抗原表位刺激并扩增记忆CD8^(+)T细胞,使用ELISPOT筛选阳性表位,构建Tetramer。利用扩增后细胞检测Tetramer+细胞比例、数量及ELISPOT斑点数,用以反映新冠病毒特异性记忆CD8^(+)T细胞丰度。分析患者血红蛋白浓度与Tetramer+细胞比例、数量及ELISPOT斑点数的相关性。分析不同贫血组Tetramer+细胞比例、数量及ELISPOT斑点数的差异。结果 34例患者中男性25例,女性9例;年龄36~78岁,中位年龄57岁。患者扩增后Tetramer+细胞比例、数量及ELISPOT斑点数与血红蛋白浓度均呈正相关关系(P<0.05);与无贫血组相比,中重度贫血组患者Tetramer+细胞比例、数量及ELISPOT斑点数均明显降低(P<0.05)。结论 肿瘤患者外周血新冠病毒特异性记忆CD8^(+)T细胞的丰度与血红蛋白浓度正相关,提示肿瘤相关性贫血可能通过降低外周血中记忆CD8^(+)T细胞的丰度导致患者病毒易感性增高。

二线化疗方案治疗小细胞肺癌的疗效及预后分析

目的:分析小细胞肺癌(small-cell lung cancer, SCLC)患者二线化疗的近期疗效和生存的预后因素,为临床治疗此类患者提供一定的依据。方法:回顾性地分析2010年01月至2014年12月接受二线化疗的152例SCLC患者的临床资料及随访结果。生存期采用Kaplan-Meier法模拟,生存期影响因素分析采用单因素分析和Cox比例风险模型分析。结果:入组SCLC患者二线化疗客观缓解率(objective response rate, ORR)为39.5%,中位无进展生存时间(progression-free survival, PFS)为3.1个月,中位总生存时间(overall survival, OS)为5.3个月;二线化疗的近期疗效与一线化疗的近期疗效相关(P<0.001);敏感型患者较耐药/难治型患者能够获得更好的二线化疗治疗反应(P=0.003);敏感型组、耐药型组和难治型组二线化疗的中位OS分别为5.5、5.3和4.7个月,差异无统计学意义(P=0.071);影响二线PFS的独立预后因素为诊断时和二线化疗前的ECOG PS评分(P=0.001/0.001)、肝转移(P=0.001)、骨转移(P=0.007);影响二线OS的预后因素为诊断时及二线化疗前的ECOG PS评分(P=0.023/0.003)、肝转移(P=0.001)。结论:一线化疗疗效较好的患者能在二线化疗后得到更好的治疗反应和生存获益,患者诊断时和二线治疗前的ECOG PS评分、肝转移为二线化疗重要的生存预后因素。

FOXM1通过调控HJURP表达促进肺腺癌细胞增殖

目的探讨Holliday交叉识别蛋白(Holliday junction recognition protein,HJURP)在肺癌组织中的表达与肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)患者预后的关系及其对肺腺癌细胞(H1299及SPC-A1)增殖的影响机制。方法收集本中心胸外科2019年2月至2020年5月17例非小细胞肺癌患者经手术切除的肿瘤组织样本和正常组织样本,采用RT-qPCR和Western blot分析HJURP在肿瘤组织和正常组织中的表达情况。通过分析癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)和Kaplan-Meier Plotter(KM-plot)数据库,验证HJURP在肿瘤组织和正常组织的表达情况及其与肺腺癌患者预后的关系。采用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2-deoxyuridine,EdU)摄取实验检测HJURP敲低对肺腺癌细胞系增殖的影响。采用裸鼠皮下成瘤实验,检测HJURP敲低对肺腺癌细胞系体内生长的影响。采用Pearson相关性分析收集样本与公共数据库HJURP与叉头盒基因M1(forkhead box protein M1,FOXM1)表达的相关性。通过染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验分析FOXM1对HJURP的转录调控作用。采用双荧光素酶报告基因实验分析FOXM1与HJURP启动子的结合情况。采用SiRNA敲低FOXM1细胞系,检测其对HJURP表达的影响。结果RT-qPCR与Western blot实验均证实,肺腺癌肿瘤组织中HJURP的表达较正常组织显著升高(P<0.05)。基于TCGA及KM-Plot公共数据库肺腺癌患者队列的生存分析显示,肿瘤组织中HJURP高表达与患者不良预后密切相关(P<0.05)。HJURP敲低后显著抑制H1299(P<0.05)及SPC-A1(P<0.05)的体外增殖能力。HJURP与FOXM1的表达呈正相关(本中心样本:r=0.5813,P<0.05;TCGA数据库:r=0.8776,P<0.05;CCLE数据库:r=0.4551,P<0.05)。ChIP实验与双荧光素酶报告基因实验均显示,FOXM1能够与HJURP启动子区域结合。敲低FOXM1后,HJURP表达水平显著下降(P<0.05)。结论HJURP可调控肺腺癌肿瘤细胞增殖,HJURP高表达与肺腺癌患者较差的预后密切相关。FOXM1是调控HJURP的上游主要转录因子。

引流淋巴结在肿瘤记忆CD8+T细胞形成中的作用

目的探究引流淋巴结(tumor-draining lymph nodes,TDLN)在肿瘤记忆CD8^(+)T细胞形成中的作用,明确新辅助PD-L1抗体治疗对抗肿瘤免疫记忆的影响。方法建立小鼠CT26/MC38-OVA结直肠癌皮下移植瘤模型,采用新辅助PD-L1抗体治疗,荷瘤15 d后手术切除肿瘤和TDLN。手术30 d后运用肿瘤再挑战模型评估TDLN在新辅助PD-L1抗体治疗条件下对免疫记忆形成的影响。利用过继回输实验探究新辅助PD-L1对肿瘤特异性CD8^(+)T细胞的影响,运用流式细胞术在术时(效应阶段)和术后30 d(记忆阶段)检测CD45.1^(+)CD8^(+)T细胞在各组织中的分布以及记忆表型变化。结果新辅助PD-L1抗体治疗显著缩小手术时肿瘤大小(P<0.05),肿瘤再挑战结果显示,接受新辅助PD-L抗体治疗,肿瘤生长显著减缓,而TDLN的切除导致肿瘤生长加剧(P<0.05)。但对肿瘤再挑战进行长期观察发现,无论是否接受新辅助PD-L1抗体治疗,肿瘤最终均消退。过继回输实验结果表明,TDLN及非引流淋巴结(no-draining lymph nodes,NLN)中贮存的CD45.1^(+)CD8^(+)T细胞数量最多(P<0.05),且在记忆阶段,中枢记忆T细胞(Tcm)和组织驻留记忆T细胞(Trm)主要分布于TDLN及NLN(P<0.05)。新辅助PD-L1抗体治疗后,引流淋巴结及非引流淋巴结等组织中CD45.1^(+)CD8^(+)T细胞的分布和记忆表型没有明显变化。结论TDLN是记忆CD8^(+)T细胞的主要驻留场所,但新辅助PD-L1抗体治疗条件下,TDLN切除并不影响其长期抗肿瘤免疫能力。

B细胞在肿瘤免疫中作用的研究进展

B细胞是肿瘤微环境中的主要细胞成分,并且在肿瘤免疫中发挥重要作用。既往的研究更多认为B细胞及其产生的抗体能够分别通过分泌免疫抑制性细胞因子和激活补体系统等机制促进肿瘤进展。然而近来的研究显示,B细胞在促进抗肿瘤免疫应答中发挥了重要的作用。文章综述B细胞在肿瘤免疫中的多种作用,讨论其不同效应的内在机制及其对肿瘤患者预后的影响。