6-姜烯酚介导Hedgehog/Gli1通路对三阴性乳腺癌细胞侵袭及迁移作用机制

目的研究Hedgehog(Hh)通路转录因子Gli1表达及6-姜烯酚介导Hh/Gli1通路对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及分子机制。方法应用慢病毒建立过表达Gli1基因MDA-MB-231稳转细胞株;qRT-PCR及Western blot实验验证Gli1过表达效率;CCK-8和EdU实验检测Gli1表达及6-姜烯酚对细胞活力的影响;细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot实验检测Hh通路相关基因蛋白表达水平。结果成功建立MDA-MB-231-Gli1过表达稳转细胞株,当Gli1基因过表达时,细胞侵袭迁移能力明显提高,MDA-MB-231细胞中Hh通路基因Gli1,EMT标志基因Vimentin及Hippo通路基因YAP、TEAD4表达升高;应用Hh/Gli通路抑制剂Gant61抑制Gli1表达时,增殖、侵袭、迁移能力降低。应用6-姜烯酚处理细胞其增殖及侵袭迁移能力减弱,且Hh通路基因Gli1、Vimentin、YAP、TEAD4蛋白表达降低。结论Gli1基因能促进MDA-MB-231细胞侵袭迁移能力;6-姜烯酚能够通过Hedgehog信号通路抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移能力,转录因子Gli1可能是其作用靶点之一。

柴胡桂枝干姜汤对小鼠乳腺癌并发静脉血栓形成作用研究

目的研究柴胡桂枝干姜汤对乳腺癌移植瘤小鼠肿瘤生长及静脉血栓形成干预作用,初步探讨其作用机制。方法建立小鼠乳腺癌移植瘤模型,随机分为空白对照组、模型组、柴胡桂枝干姜汤组,药物处理20 d后,行下腔静脉(Inferior vena cava,IVC)结扎术,建立静脉血栓栓塞(venous thromboembolism,VTE)模型,48 h后取材,测量血栓长度、肿瘤体积及肿瘤重量,HE染色观察肿瘤组织形态学改变;qRT-PCR、Western Blot检测肿瘤组织EMT标志物及凝血相关因子表达。结果成功建立小鼠乳腺癌移植瘤VTE模型,柴胡桂枝干姜汤能够抑制小鼠乳腺肿瘤生长及下腔静脉血栓形成(P<0.05);qRT-PCR及Western Blot结果表明柴胡桂枝干姜汤可降低EMT间充质标记物Vimentin、N-Cadherin及血管性血友病因子VWF、血小板活化标志物P-selectin在mRNA及蛋白水平表达。结论柴胡桂枝干姜汤能够改善小鼠乳腺癌微环境凝血状态,其作用可能通过干预血小板活化、黏附及聚集抑制肿瘤进展及VTE形成。