不能手术切除的结直肠癌肝转移微波消融治疗体会

目的探讨不能手术切除的结直肠癌肝转移行微波消融治疗的疗效及预后影响因素分析。方法对51例行结直肠癌根治术未能行肝转移癌切除的患者,超声引导下经皮肝穿刺行微波消融治疗;同时选取同期45例未能手术切除的肝转移癌患者,采用Seldinger技术经股动脉插管行介入栓塞治疗作为对照组;两组术后均采用FOLFOX4全身化疗方案;CT评价治疗有效率,随访其1、3、5年复发率和生存率,分析微波消融治疗预后影响因素。结果①治疗组与对照组治疗有效率分别是92.2%:62.6%;1、3、5年复发率分别是3.9%:4.4%、45.1%:66.7%、68.6%:86.7。②治疗组与对照组中位生存期分别是38个月和22个月;1、3、5年生存率分别是88.2%:84.4%、52.9%:31.1%、29.4%:8.9%。③转移灶大小及是否多发转移,与大血管、胆管的关系等是影响微波消融预后的主要因素,而与微波治疗次数及肿瘤病理类型关系不大。结论微波消融治疗结直肠癌肝转移比介入栓塞疗效好、并发症少、复发率低、明显延长病人生存期、且操作简便,可作为不能手术切除肝转移癌首选治疗方案。

ω—3多不饱和脂肪酸对肝癌患者术后免疫代谢的影响

目的研究添加ω-3多不饱和脂肪酸对肝癌术后患者肝脏蛋白合成和免疫功能的影响。方法肝癌切除术后患者40例，按入院顺序随机分为对照组和研究组，两组患者均接受等氮等热卡肠外营养支持，研究组加用ω-3多不饱和脂肪酸。比较两组患者术前、术后血浆蛋白、CD4＋、CD8＋及其比值、免疫球蛋白的变化。结果经过术后连续7天的治疗，研究组血浆蛋白、CD4＋、CD8＋及其比值、免疫球蛋白水平明显改善，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论添加ω-3多不饱和脂肪酸有利于肝癌术后患者肝脏白蛋白合成，提高免疫功能。

营养剥夺通过诱导自噬促进肝癌细胞侵袭

目的明确营养剥夺促进肝癌细胞侵袭的机制。方法以Hank’s平衡盐缓冲液对肝癌细胞系HepG2和BEL7402细胞进行营养剥夺培养,同时构建转染针对自噬基因Atg3的siRNA(siRNA-Atg3),观察营养剥夺在Atg3基因沉默前后对肝癌细胞自噬活性和侵袭能力的影响,分析自噬活性与侵袭能力之间的关系。结果平衡盐缓冲液较对照完全培养液能明显诱导肝癌细胞HepG2和BEL7402内自噬体形成[(93±5)vs.(40±6)/高倍视野,P<0.05;(83±4)vs.(36±4)/高倍视野,P<0.05]及LC3蛋白的表型转换,抑制P62蛋白表达,同时显著增加HepG2和BEL7402细胞的侵袭数[(60 875±1 051)vs.(15 812±515),P<0.05;(59 750±1 571)vs.(15 500±645),P<0.05]。转染siRNA-Atg3可沉默细胞Atg3表达并显著对抗营养剥夺诱导的LC3蛋白表型转换和P62蛋白表达下调,HepG2和BEL7402肝癌细胞的侵袭数较未转染细胞也明显减少[(17 438±427)vs.(59 875±520),P<0.05;(17 250±408)vs.(59 500±540),P<0.05]。结论自噬可能是营养剥夺条件下促进肝癌细胞侵袭性增加的主要机制。

阿托伐他汀对移植动脉硬化抑制作用的实验研究

目的研究阿托伐他汀(atorvastatin)对大鼠移植动脉硬化的抑制作用。方法建立大鼠腹主动脉移植模型。动物分为3组:(1)异系移植对照组;(2)异系移植实验组;(3)同系移植对照组。6 0 d后对移植动脉行病理组织学检测,观察移植动脉内膜增生程度,并行免疫组织化学染色(SP法)检测移植动脉增殖细胞核抗原(PCNA)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。结果异系移植实验组血管内膜增厚程度显著低于异系移植对照组,(1),(2),(3)组移植动脉内膜增厚面积比分别为(3 5.2 0±6.3 5)%,(1 2.4 0±2.6 5)%,(1.2±1.1 0)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。PCNA在异系移植实验组表达明显低于异系移植对照组和高于同系移植对照组,(1),(2),(3)组分别为(1 7.2 0±1.6 5)%,(5.4 0±0.8 0)%,(1.1 0±0.2 5)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿托伐他汀可抑制大鼠移植动脉硬化,PCNA基因表达的下调可能是阿托伐他汀抑制移植动脉硬化的机制之一。

细菌脂多糖对人肝细胞过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1a、线粒体融合蛋白2基因表达的调节及对线粒体形态和功能的影响

目的观察细菌脂多糖（LPS）对肝细胞株L02细胞过氧化物酶体增殖物受体1共激活因子1a（PGC—la）、线粒体融合蛋白2（Mfn2）基因表达的调节作用以及对线粒体形态和细胞三磷酸腺苷（ATP）、活性氧（ROS）生成的影响。方法分别以LPS（10μg/L）、LPS（10μg/L）＋罗格列酮（10txmol／L）、LPS（10μg/L）＋GW9662（10μmol／L）作用L02细胞株12h，实时定量一聚合酶链反应（Real—timePCR）和Westernblot法检测各组细胞PGC．1a、Mfn2mRNA转录及蛋白表达水平，透射电镜观察线粒体形态变化，荧光素酶二磷酸腺苷（ADP）／ATP发光检测细胞ATP含量，荧光探针2’，7’-二氯荧光素乙二酯（DCFH—DA）测定细胞ROS生成水平。结果经LPS处理L02细胞后PGC—la、Mfn2基因的mRNA及蛋白表达水平显著低于空白对照组，差异有统计学意义（1．23144-0．0366比2．5896±0．259l；0．7432±0．1626比1．6236±0．3058，P〈0．05）；细胞线粒体数量减少、肿胀明显、嵴模糊不清、基质密度低、少数线粒体膜不完整；细胞内ATP浓度显著低于对照组（2．50±O．15比5．814-0．31，P〈0．05）；而ROS生成水平较对照组明显升高（150．1920±6．3571比55．1920±9．1140，P〈0．05）。罗格列酮可通过提高PGC-1a、Mfn2基因表达逆转这一改变；而GW9662抑制PGC—la、Mfn2基因表达，进一步加重线粒体损伤。结论LPS通过抑制肝细胞PGC-1a、Mfn2基因表达诱导线粒体形态改变及功能障碍。

应用S-腺苷蛋氨酸预处理在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用

目的研究S-腺苷蛋氨酸预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法将54只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注(I/R)组和S-腺苷蛋氨酸预处理(S-arleneyslmethioaine,SAM)组。SAM组大鼠缺血前2 h行腹腔注射SAM预处理。假手术组仅做分离,不阻断肝门;其余两组大鼠均在阻断肝门左、中叶肝蒂60 min后复流,并于再灌注0、3和6 h抽取下腔静脉血检测ALT、AST;切取肝组织检测氧化应激活性氧(ROS)、线粒体能量代谢指标三磷酸腺苷(ATP)、能荷(EC),并制备病理切片在透射电镜下观察线粒体的超微结构。结果同一时相SAM组ALT、AST、ROS明显低于I/R组,而ATP、EC明显高于I/R组,差异有显著的统计学意义(P<0.01)。超微结构观察I/R组线粒体有明显的损伤,线粒体数量减少,肿胀明显,嵴模糊不清,基质密度低;而SAM组与I/R组对比损伤程度明显减轻。结论 SAM能抑制线粒体脂质过氧化反应,提高ATP的产生,最终提高线粒体的能量代谢水平,有效地减轻肝脏的缺血再灌注损伤。

γ-干扰素促进Fas配体诱导血管平滑肌

目的探讨宋γ-干扰素（IFN-γ）对Fas配体（Fa出）诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡的促进作用和机制。方法体外培养大鼠VSMCs，给予IFN-γ、FasL单独处理或两者联合处理后，采用Westernblot、流式细胞学分析、Hoeehst33342染色等技术，检测IFN-γ对VSMCs凋亡、Fas表达和分布的影响。观察衣霉素预处理是否影响IFN-γ联合F”L诱导的VSMCs凋亡，探讨Fas膜转位在IFN-γ促进FasL诱导VSMCs凋亡中的作用。结果、体外条件下，Hoechst33342染色显示，IFN-γ和FasL单独处理的凋亡诱导作用均较弱[凋亡率为（7．4±1．9）％、（6．8±2．5）％]，与前者比较，IFN-γ联合FasL可显著诱导VSMCs凋亡[凋亡率为（20．1±2．2）％，P〈0．01]。Westernblot结果显示，经IFN-γ处理36、72h后VSMCs总的Fas蛋白表达水平，相对表达量分别为0．469±0．129、0．383±0．045，与磷酸盐缓冲液（PBS）对照组（0．402±O．031）比较差异无统计学意义（P〉0．05），但可以诱导细胞表面Fas增多（0．266±0．042比0．042±0．017，P〈0．01）而细胞内Fas减少（0．193±0．038比0．426±0．074，P〈0．01）。膜转运阻断剂衣霉素预处理可有效抑制IFN-γ和FasL联合处理诱导的VSMCs凋亡，凋亡率[（6．14-0．8）％]较对照组[（23．0±1．0）％]显著降低（P〈0．01）。流式细胞学分析结果亦证实Hoechst染色结果。结论IFN-γ通过诱导Fas受体膜转位，显著增强VSMCs对FasL的敏感性，促进VSMCs凋亡。

上皮-间充质转化在营养剥夺促进肝癌细胞侵袭中的作用

目的 观察上皮-间充质转化在营养剥夺条件下促进肝癌细胞侵袭的作用.方法 以Hank＇s平衡盐缓冲液对肝癌细胞株HepG2和BEL7402细胞进行营养剥夺培养,观察营养剥夺对肝癌细胞上皮间质标记表达和侵袭能力的影响,并以转化生长因子（TGF）-β/Smad3通路抑制剂SIS3（2μmol/L）处理营养剥夺的肝癌细胞,分析上皮间质标记表达与细胞侵袭力之间的关系.结果 平衡盐缓冲液显著增加HepG2和BEL7402肝癌细胞的侵袭数[（58 450±1245）个；（61 750±1800）个,P＜0.05],同时其上皮标记CK18表达下调而间质标记纤维连接蛋白（fibronectin）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达升高.以TGF-β/Smad3通路抑制剂SIS3处理平衡盐溶液培养的HepG2和BEL7402细胞后,较对照组细胞未出现明显上皮间质标记表达改变,细胞侵袭数较SIS3未处理组也明显减少[（16500±1050）个比（15 450±985）个,P＜0.05].结论 上皮-间充质转化可能是营养剥夺条件下促进肝癌细胞侵袭性的机制之一.

沉默p21活化激酶1对肝癌细胞的影响及其机制

目的观察小干扰RNA(siRNA)沉默P-21活化激酶1(PAK1)基因对肝癌细胞的增殖、凋亡及迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。方法设计合成针对PAK1的特异性siRNA(siPAK1)和通用无义siRNA序列,转染肝癌细胞,分为siPAK1组和NC组,通过实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)技术和Westernblot法检测肝癌细胞中PAK1的表达;利用细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞仪、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验,分别检测其对肝癌细胞生物学特性的影响;利用Westernblot检测肝癌细胞中磷酸化的细胞蛋白调节激酶1/2(p-ERK1/2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)分子的蛋白表达量。结果转染siPAK1能明显抑制肝癌细胞中PAK1的表达;沉默PAK1基因能明显减少肝癌细胞的增殖[NC组:Hep3B(100.00±0.00)%,SMMC-7721(100.00±0.00)%;siPAK1组:Hep3B(30.35±3.44)%,SMMC-7721(41.76±5.91)%(PHep3B=0.018,PSMMC-7721=0.022)]、促进肝癌细胞凋亡(PHep3B=0.004,PSMMC-7721=0.006)并且抑制其迁移(PHep3B=0.028,PSMMC-7721=0.018)和侵袭(PHep3B=0.012,PSMMC-7721=0.006)的能力;沉默PAK1基因可抑制肝癌细胞中p-ERK1/2、bcl-2和CyclinD1分子的蛋白表达量。结论沉默PAK1基因可通过PAK1/ERK通路促进肝癌细胞凋亡,并抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。