河蚬汤纳米颗粒细胞毒性及对大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

许多传统食品中存在大量的伴生性纳米颗粒,其纳米尺度的构造赋予它们特殊的活性与功能,然而这类纳米颗粒对人体细胞的影响尚未被充分揭示。以河蚬汤及其伴生纳米颗粒为例,采用狗肾上皮细胞(MDCK)、人结肠腺癌细胞(Caco-2)、人正常肝细胞(L-02)和大鼠原代腹腔巨噬细胞模型,研究以液相色谱方法分离制备的河蚬汤纳米颗粒的细胞毒性,以及其对大鼠原代腹腔巨噬细胞功能的影响。实验结果表明:15.63~500.00μg/mL河蚬汤伴生纳米颗粒对4种细胞均无明显毒性;这些纳米颗粒能被大鼠原代腹腔巨噬细胞吞噬,对正常巨噬细胞的膜电位和吞噬功能无明显影响,抑制AAPH诱导氧化应激引起的细胞膜超极化,拮抗线粒体的氧化应激与细胞吞噬功能损伤。抗氧化测试结果显示,河蚬汤伴生纳米颗粒具有FRAP、ABTS抗氧化活力,但不具有ORAC活性。研究旨在为后续深入开展河蚬汤及其伴生纳米颗粒的功效以及作用机制提供必要的基础数据和理论支持。

葛根蛋白分离鉴定及其自组装纳米颗粒性质研究

目的:纯化并表征一种葛根水溶性蛋白,将该蛋白通过热诱导的方式构建为蛋白纳米颗粒载体。方法:采用阴离子交换色谱High Q纯化获得葛根蛋白,通过SDS-PAGE和蛋白质N端测序方法鉴定蛋白的分子量和氨基酸序列。采用激光粒度分析仪对蛋白纳米颗粒的粒径、光散射强度和Zeta电位进行研究,采用高效液相色谱法测定纳米载体对药物的装载效率。结果:从葛根中抽提并分离纯化获得一种主要的水溶性蛋白,命名为PP。N-端氨基酸序列测得为DFVYDMCGNVLNGGTYYIL,通过NCBI数据库比对和蛋白酶活性测定确定PP为一种新的胰蛋白酶抑制剂,且PP在pH2~10的环境中及20~50℃的温度范围内均具有较好的稳定性。PP溶液(0.1 mg/mL,pH6.0)在100℃下加热60 min可以形成分布均匀的纳米颗粒PP-NPs,测定其平均粒径为172.78 nm,Zeta电位为-25.40 mV。PP-NPs能有效装载葛根素及小檗碱,测得的药物装载率分别为33.83%和24.61%。结论:从葛根中纯化获得的主要水溶性蛋白PP能通过热诱导构建蛋白纳米颗粒,该颗粒具有成为药物载体的潜力。

不同加工工艺鹿茸的蛋白成分和活性比较

比较冻干、冷冻和传统热加工工艺制备的鹿茸药材的蛋白成分和活性差异,并探讨加工工艺对鹿茸药效的影响。用Folin-酚法测定冻干鹿茸水溶性蛋白含量最高(126.54 mg/g),为热炸茸的13.1倍;蛋白在SDS-PAGE电泳上分布广,以分子量60.0 kDa^50.0 kDa的蛋白浓度最高。冻干鹿茸水提物促大鼠成骨样细胞增殖活性(MTT法)高达245.25%,是传统热炸鹿茸的2.2倍;IGF-I分泌量也高达66.3 ng/ml,是热炸茸的1.2倍;抑制肝癌细胞活性为47.64%,是热炸茸的1.4倍。冷冻鲜茸的活性虽低于冻干茸,但也远高于热炸茸。结果说明冻干有可能最大限度地保存鹿茸的活性蛋白,有利于提高鹿茸的药效。

苦瓜干制前后氨基酸组分的变化

经酸水解,利用氨基酸自动分析仪测定干制加工前后的苦瓜中总氨基酸和游离氨基酸含量。结果表明干制前后的苦瓜在氨基酸质量分数上有明显差别,总氨基酸质量分数分别为11.99%和10.87%,游离氨基酸分别为2.36%和0.70%。结论:干制前后的苦瓜中氨基酸质量分数差别明显,其中碱性氨基酸质量分数的变化尤其显著,总氨基酸中精氨酸质量分数下降50%,在游离氨基酸中下降78%;同时还原糖质量分数也由干制前的4.86%下降为干制后的1.86%,说明苦瓜干制过程中发生了美拉德反应,造成了氨基酸和还原糖含量的下降。

毛细管电泳法研究板蓝根水提物抗流感病毒的作用机制

目的:探讨板蓝根水提物抑制H1N1型流感病毒细胞结合活力的机制。方法:显微镜检判定板蓝根不同处理方式下的红细胞经流感病毒侵染后的形态学差异,通过毛细管电泳结合显微镜镜检、血凝滴度指标进一步阐述板蓝根抗流感病毒的生化机制。结果:经过板蓝根保护过的细胞,能阻止病毒对细胞的吸附,推测其可能是通过与细胞膜的作用来保护细胞。结论:板蓝根通过结合到细胞膜上而起到保护细胞的作用,有效抑制了流感病毒对细胞的结合,从而达到抗病毒的目的。

高效液相色谱法测定龙眼果中水溶性单糖和寡糖

用高效液相色谱-蒸发光散射测定龙眼果中水溶性单糖和寡糖组分的种类和含量，考察这些糖组分在龙眼晒干前后的变化。采用Hypersil NH2柱为固定相，V（乙腈）：V（水）=80：20为流动相，体积流量1mL／min，蒸发光散射法检测。绘制7种标准糖的线性回归方程并计算其检测限，进而分别分离测定新鲜龙眼果和龙眼干中水溶性糖的种类和含量。研究发现：龙眼鲜果和干果中的单糖和寡糖主要为果糖、葡萄糖、蔗糖。3种糖在25～1000μg／mL范围内与其色谱峰面积之间有良好的线性关系，标准品回收率在97％～106％之间，相对标准偏差（RSD）小于0．40％。3种糖中以蔗糖的质量分数为最高，达517．28mg／g。3种糖的总质量分数在鲜果中为830．36mg／g，而在干果中下降了14．8％，其中又以蔗糖的下降最为显著，达20．6％，质量分数降低的原因可能是晒干过程发生了美拉德反应和寡糖的水解。

鹿茸粗提液对大鼠成骨肉瘤细胞增殖的调节作用

目的 :观察鹿茸粗提液 (PAE)对大鼠成骨肉瘤细胞系UMR 10 6增殖的影响 ,从而为研究鹿茸强筋健骨的分子机理以及筛选鹿茸防治骨质疏松的生物活性成分提供实验依据。方法 :通过SephacrylS 2 0 0HR凝胶过滤色谱对PAE进行初级分离 ,用MTT法检测不同分离组分对UMR 10 6细胞增殖的影响。结果 :发现SephacrylS 2 0 0HR凝胶过滤色谱第 2峰P2次组分 ,当其蛋白质浓度高于 0 .972mg·L - 1并低于 97.2mg·L - 1时 ,对UMR 10 6细胞增殖活性的影响表现为抑制 ;若浓度达到 97.2mg·L- 1后则会促进细胞的增殖 ,且增殖效应随蛋白质浓度的增加而明显上升。当样品蛋白质浓度达到 9.72g·L- 1时 ,相应的细胞增殖率为 477.92 % ,接近PAE的增殖水平 (499.62 % )。经SDS PAGE电泳分析第 2峰分子量集中于 59kDa左右。此外 ,发现第 3、第 4和第 5峰对UMR 10 6细胞增殖有显著的抑制作用。结论 :鹿茸蛋白中含有多种双向调控UMR 10 6细胞增殖的生物活性因子 ,既有剂量双向效应 ,也有与分子量相关的不同调控蛋白 。

鹿茸中促大鼠成骨样细胞增殖活性组分的纯化与表征

目的:通过鹿血清白蛋白对大鼠成骨样细胞系UMR-106增殖活性和促胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)分泌水平的研究,为阐明鹿茸强筋健骨的作用机理及对骨质疏松的防治提供研究线索。方法:运用SephacrylS-200HR凝胶色谱、POROS20QE阴离子交换色谱和TSKG3000SW高效液相色谱等分离手段,从冷冻干燥鹿茸粉粗提液中分离纯化得到鹿血清白蛋白。并用MTT法检测其对UMR-106细胞的增殖活性;用平衡饱和竞争放射免疫分析法(RIA)测定其促IGF-Ⅰ分泌水平。结果:经分离纯化得到的鹿血清白蛋白分子质量为56.3kDa,在蛋白含量为0.149μg·mL-1时,其促大鼠成骨样细胞增殖率为241.03%,IGF-Ⅰ分泌量为66.89ng·mL-1。结论:鹿茸中的鹿血清白蛋白在14.9ng·mL-1-14.90μg·mL-1具有显著的促大鼠成骨样细胞增殖和IGF-Ⅰ分泌等活性。

美拉德反应产物的抗氧化活性研究

主要研究在不同条件下反应得到的美拉德反应产物(Maillard Reaction Products,MRPs)的抗氧化活性。通过单因素和正交试验,发现MRPs中具有抗氧化活性的物质产生在反应的初始阶段并保持稳定,在110℃、精氨酸与葡萄糖摩尔比为1∶2.5,反应初始pH为8.0,保温时间为120 min条件下反应所得MRPs抗氧化活性最强,正交试验设计结果同时表明只有温度对其抗氧化活性的影响最为显著。

食品科学还必须研究什么?

起源于食品加工的现代食品科学和食品工业,提供了前所未有的丰富食物,是全人类的进步与发展不可或缺的基础。迄今,食品科学系统地研究和掌控了食品的保藏、营养及感官特性,但对食物与人体的作用尚乏独立了解,现有知识限于营养学和毒理学。食品工业彻底改变了食物的生产和消费方式,也改变了食物与人体的作用,而对后者研究的缺位,助长了公众对工业食品的安全与健康隐忧的疑惑。回顾历史、鉴析现状,我们试对未来"食物-人体作用"的研究提出3个方向:阐明食品组成分子的存在状态;破译人体对食物的反应信号;研究食品特性互补的利用方法。以全新的角度研究食品与人体的相互作用,是累积食品科学独有的方法与发现、充实学科提高地位的需要,也是回答并解决食品工业界面临的急迫问题的必须,将使食品学科能够以原创性发现构建出完整的食品的科学。

苦瓜提取物对链脲佐菌素诱导糖尿病小鼠的降糖作用研究

目的:研究苦瓜提取物(Mornordica charantia extract,MCE)对实验性糖尿病小鼠血糖、糖耐量和血清胰岛素水平的影响,旨在建立一个分析和评价苦瓜提取物降血糖活性的动物模型。方法:采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立小鼠糖尿病模型,通过灌胃给药比较不同样品作用效果。结果和讨论:苦瓜提取物有明显的降血糖效果,其降血糖效果与其放免分析数值的高低相一致。实验所使用的苦瓜提取物对实验小鼠血清胰岛素水平的影响均不显著。苦瓜提取物的降血糖作用可能是通过调节糖代谢、促进肝糖原合成引起的而非通过刺激胰岛素分泌引起的。

地黄炮制过程氨基酸组分分析

利用氨基酸自动分析仪分别测定加工前后地黄中的总氨基酸和游离氨基酸质量分数。分析、比较炮制前后地黄的氨基酸成分变化。炮制前后地黄的氨基酸种类及含量有明显变化,多数氨基酸的含量在炮制后明显下降甚至消失。结论:炮制前后的地黄中氨基酸质量分数差别明显,其中碱性氨基酸质量分数的差别尤其显著,该差异可能是由于炮制过程中发生美拉德反应造成的。

蛹虫草的抗氧化性和热稳定性及归经作用研究

研究蛹虫草的抗氧化性、热稳定性和归经作用,测定蛹虫草的SOD活力和总抗氧化力。将20名志愿者分为两组,分别每日服用蛹虫草片(1 g)和SOD蛹虫草片(蛹虫草片1 g、SOD片1 g),连续服用14 d,记录左右两侧的肾经、肺经、脾经和肝经经络电压的变化。结果表明:蛹虫草的SOD活力和抗氧化能力很强,且耐高温,性质稳定。受试者服用蛹虫草片和SOD蛹虫草片主要表现在对肾经的影响,减少肾经的氧化应激水平,研究结果与已报道的蛹虫草的功效基本吻合。

板蓝根热加工过程中氨基酸组分分析

利用氨基酸自动分析仪对板蓝根的新鲜植物组织和不同加工程度的板蓝根药材中的总氨基酸和游离氨基酸含量进行测定。结果表明:板蓝根的新鲜植物组织和不同加工程度的板蓝根药材氨基酸在含量上有明显差别。结论为:不同加工程度的板蓝根药材中氨基酸含量差别明显,其中碱性氨基酸含量的差别尤其显著,该差异可能是由于加工过程中发生美拉德反应造成的。

桦褐孔菌水提粉的抗氧化性及对人体经络电压的作用初探

桦褐孔菌,常称为白桦茸,又叫作西伯利亚灵芝,是一种具有良好的抗氧化功效的保健食品。为了研究桦褐孔菌的抗氧化性和归经作用,测定桦褐孔菌水提粉的SOD活力、总抗氧化力和氧化还原电位值。召集30名志愿者并分为两组,分别服用桦褐孔菌水提粉制备的菌汤和添加SOD蛋白的菌汤,志愿者每日服用100 mL,连续服用24 d,记录左、右两侧的24条经络电压的变化。试验结果表明:桦褐孔菌水提粉有很强的抗氧化性,当志愿者服用桦褐孔菌粉和SOD桦褐孔菌粉24 d后,能够显著提高心经、心包经和肺经电压,而且添加SOD蛋白的桦褐孔菌粉能够显著提高脾经、膀胱经、肝经的电压。以上结果与已报道的桦褐孔菌的功效描述基本吻合。

河蚬汤中纳米颗粒作用于大鼠口腔巨噬细胞的研究

食品加工过程中,食品成分的自组装行为会产生大量微纳米级别的胶体颗粒。这类胶体颗粒在人体的吸收、转运及其生理功能尚不完全明确。本文研究了河蚬汤中的纳米颗粒对消化道黏膜免疫细胞的影响。在消化道黏膜来源的巨噬细胞模型中,观测该纳米颗粒进入细胞的过程以及对细胞毒性、细胞膜电位和线粒体超氧自由基的影响。结果显示:河蚬汤纳米颗粒无明显细胞毒性,可进入巨噬细胞胞内并保持颗粒结构,可以改善巨噬细胞的氧化应激状态。本研究结果提供了食品纳米颗粒与免疫细胞之间直接相互作用的证据,揭示了一种食品与人体相互作用的方式。

龙眼肉干制过程氨基酸组分分析

利用氨基酸自动分析仪分别测定加工前后的龙眼肉中的总氨基酸和游离氨基酸含量。结果,干制前后龙眼肉的氨基酸种类没有差别,但含量有明显差别,多数氨基酸的含量在干制后明显下降。结论:除丙氨酸和甲硫氨酸外,干制后的龙眼肉中的总氨基酸和游离氨基酸含量比干制前有明显下降,其中以碱性、酸性氨基酸含量的下降尤其显著。该差异可能是由于干制过程中发生美拉德反应造成的。

河蚬汤中氨基酸组分的分析

利用全自动氨基酸分析仪测定了传统保肝食品——河蚬汤中的总氨基酸和游离氨基酸含量。结果表明,河蚬汤中含有17种常见(色氨酸在酸解时遭破坏)氨基酸,还有鸟氨酸和牛磺酸两种非蛋白质组成氨基酸,总含量为297.4mg.g-1。其中鸟氨酸含量最高,占总氨基酸的12.4%,且87%的鸟氨酸以结合态形式存在。河蚬汤中游离氨基酸含量较低,为33.3mg.g-1,只占总氨基酸的11.2%。进一步分离、纯化河蚬汤中具生物学活性的蛋白和多肽,将有助于阐明其保肝有效成分及作用机理,为更好开发利用河蚬资源提供科学依据。

花臭蛙皮肤分泌物中抗菌肽Odorranin的分离纯化与表征

从花臭蛙(Odorrana schmackeri)皮肤分泌液中分离得到一类(包含三种)新型的抗菌肽。经过一级结构解析和抗菌活性表征后,命名为Odorranin(1,2,3)。该类抗菌肽由21个氨基酸组成。Odorranin对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有明显的抑制活性,其中Odorranin 3对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为4.2、6.06μg/mL。

正山小种红茶、茶多酚、茶多糖的抗氧化活性和对人体经络电压的作用初探

自由基是带有不配对电子的基团,有研究表明体内自由基水平的改变会导致体内生物电发生变化,并能在体表电生理信号(经络穴位电压值)中得以体现。本研究选取正山小种红茶茶汤作为研究对象,测定正山小种茶汤氧化还原电位值、ORAC值,并与茶汤含量相同的茶多酚和茶多糖标准溶液相关数据作比较。跟踪记录30名志愿者饮用4种受试溶液前、后90 min内的体表电生理信号。结果显示:受试者饮用茶汤及茶多酚、茶多糖溶液,体表电生理信号均出现明显变化,且饮用这3种样品造成的体表电生理信号的变化规律存在显著差异,表明这3种受试溶液在体内的抗氧化强度、归经及机制上都存在显著差异。体表电生理信号测定有望成为一个快速、直接反映食物-人体相互作用的新方法,并为食物有效成分的研究提供新的手段。