抗人跨膜型肿瘤坏死因子-α多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备特异的能区分人跨膜型肿瘤坏死因子(TM TNFα)和分泌型肿瘤坏死因子(sTNFα)的多克隆抗体。方法借助抗原肽预测软件对TM TNFα的抗原表位进行预测,合成TM TNFα特异的20个氨基酸的多肽,将之与匙孔碱血蓝蛋白(KLH)耦联,BALB/c小鼠皮背部多点注射,收集分离血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞术鉴定其特异性。结果成功免疫BALB/c小鼠,ELISA证实该抗血清与免疫多肽有良好的结合,而与sTNFα、白细胞介素2(IL2)和γ干扰素(IFNγ)无交叉反应,流式细胞术显示该抗血清可与细胞系U937表达的TM TNFα发生特异性结合。结论成功制备了TM TNFα特异性多克隆抗体,为制备TM TNFα特异性单克隆抗体奠定了基础,为区分TM TNFα和sTNFα的生物学作用提供了有力的工具。

人跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)特异性单克隆抗体的制备、鉴定及功能初探

目的:制备TM-TNF-α特异性单克隆抗体,并进行鉴定和初步功能分析。方法:用表位预测软件选定TM-TNF-α特异的20个氨基酸多肽,偶联载体蛋白,免疫BALB/c小鼠;用杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用ELISA、流式细胞术和Western blot鉴定单抗的特异性,观察单抗对Jurkat细胞在AICD模型中凋亡率的影响。结果:成功制备了6株抗TM-TNF-α的单克隆抗体。ELISA结果显示6株单抗均特异性结合免疫原多肽,与S-TNF-α等细胞因子无交叉反应;流式细胞术显示6株单抗均能结合细胞膜表面TM-TNF-α分子,并可区分人源和鼠源TM-TNF-α;Western blot结果证实6株单抗只能识别26kD的人TM-TNF-α,而不识别17kD的S-TNF-α。在AICD模型中,单克隆抗体不影响Jurkat细胞凋亡率。结论:成功制备了6株TM-TNF-α特异性单克隆抗体,且单抗不干扰TNF-α与TNFR结合,为进一步研究TM-TNF-α在相关疾病中的作用提供又一研究手段。