自体外周血干细胞移植联合利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤及相关因子的表达

背景:目前国内已有较多采用利妥昔单抗联合自体外周血干细胞移植治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的临床报道,但其作用机制还不是很明确。目的:对比分析利妥昔单抗联合自体外周血干细胞移植与利妥昔单抗治疗弥漫大B细胞淋巴瘤的效果与相关因子水平的变化。方法:选择96例弥漫大B细胞淋巴瘤患者为研究对象,其中男62例,女34例,年龄20-75岁。48例采用利妥昔单抗联合化疗方案(对照组),另48例采用利妥昔单抗联合化疗、自体外周血造血干细胞移植方案(试验组),对比两组临床疗效、不良反应发生情况,随访记录患者生存期,治疗前、化疗6个疗程后及移植后6个月,检测两组血清血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及白细胞介素17水平。结果与结论:①试验组患者均采集到了足够的外周血造血干细胞,回输CD34+细胞数为(3.6±0.6)×106/kg,回输后中性粒细胞植入时间为(11.1±1.2)d,血小板植入时间为(12.3±2.4)d;②试验组治疗有效率明显高于对照组(81%,56%,P<0.05);③从确诊开始至随访结束,试验组生存率为79%、无进展生存率为50%,对照组生存率为56%、无进展生存率为31%,两组间生存率与无病生存率比较差异显著(P<0.05);④两组不良反应发生情况比较差异无显著性意义(P>0.05);⑤治疗前与化疗6个疗程后,两组间3种细胞因子水平比较差异无显著性意义;与治疗前比较,两组化疗6个疗程后的白细胞介素17水平升高(P<0.05),血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子水平降低(P<0.05);与化疗6个疗程后比较,试验组移植后6个月的白细胞介素17水平升高(P<0.05)、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子水平降低(P<0.05),对照组3种细胞因子水平无显著变化(P<0.05);⑥结果表明,利妥昔单抗联合自体外周血干细胞移植可提高弥漫大B细胞淋巴瘤患者的生存期,其作用途径可能与调控白细胞介素17、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子水平有关。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨积雪草酸对急性肺损伤大鼠氧化应激和NLRP3炎症小体的影响

目的 观察积雪草酸对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤大鼠氧化应激和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白的影响,并探讨其相关分子机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、积雪草酸低剂量组、积雪草酸高剂量组和地塞米松组,每组12只。除对照组外,其余组大鼠均采用LPS气管滴注法建立急性肺损伤模型。模型建立成功后第2天,积雪草酸低、高剂量组大鼠分别腹腔注射25 mg/kg和75 mg/kg积雪草酸溶液,地塞米松组大鼠腹腔注射2 mg/kg地塞米松注射液,对照组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水,均1次/d,连续注射8周。HE染色观察大鼠肺组织病理形态,称重法计算肺组织湿/干重比值,TUNEL染色检测大鼠肺组织细胞凋亡情况,试剂盒检测大鼠支气管肺泡灌洗液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠肺组织可见明显病理损伤,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著升高(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著降低(P均<0.05)。与模型组比较,积雪草酸低、高剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理损伤显著改善,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著降低(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著升高(P均<0.05),且积雪草酸高剂量组和地塞米松组大鼠上述指标变化均显著优于积雪草酸低剂量组(P均<0.05)。结论 积雪草酸可通过抑制氧化应激和NLRP3炎症小体激活减轻LPS诱导的急性肺损伤,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

山楂酸通过调节HMGB1/TLR4信号通路抑制炎症反应和细胞凋亡保护急性肺损伤的研究

目的 研究山楂酸对急性肺损伤的影响及对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路的调控作用。方法 78只SD大鼠饲养1周后,随机选取15只作为正常组,其余大鼠腹腔注射5 mg/kg脂多糖制备急性肺损伤模型。将造模成功大鼠随机分为肺损伤组、山楂酸低剂量组、山楂酸高剂量组、地塞米松组,每组15只。山楂酸低剂量组和山楂酸高剂量组大鼠分别腹腔注射25 mg/kg和100 mg/kg山楂酸溶液,地塞米松组大鼠腹腔注射2 mg/kg地塞米松注射液,正常组和肺损伤组大鼠均腹腔注射等量生理盐水,均1次/d,连续注射8周。称重法计算肺组织湿/干重比值,HE染色观察肺组织病理形态,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡情况,Western blot法检测肺组织中HMGB1、TLR4蛋白表达情况。结果 肺损伤组大鼠肺组织出现明显病理损伤,肺组织湿/干重比值、肺组织细胞凋亡率和支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-8、TNF-α含量及肺组织中HMGB1、TLR4蛋白相对表达量均明显高于正常组(P均<0.05);各给药组大鼠肺组织病理损伤均较轻,肺组织湿/干重比值、肺组织细胞凋亡率和支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-8、TNF-α含量及肺组织中HMGB1、TLR4蛋白相对表达量均明显低于肺损伤组(P均<0.05),且山楂酸高剂量组和地塞米松组肺组织损伤更轻,上述各指标均明显低于山楂酸低剂量组(P均<0.05)。结论 山楂酸可通过调控HMGB1/TLR4信号通路抑制炎症反应而减轻急性肺损伤。

党参多糖调控NF-κB信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠T细胞免疫紊乱和气道炎症的影响

[目的]研究党参多糖通过调控核转录因子κB(NF-κB)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)大鼠T细胞免疫紊乱和气道炎症的影响。[方法]从60只SD大鼠中随机挑出50只建立慢阻肺“肺脾气虚证”模型,余下10只作为对照组。通过烟熏加脂多糖法并配合番泻叶浸液建立大鼠慢阻肺脾肺气虚证模型。将建模成功的大鼠随机分为5组,地塞米松组给予1.95 mg/kg的地塞米松,党参多糖高、中、低剂量组分别给予200、100、50 mg/kg的党参多糖,模型组和对照组均按照大鼠体质量1 mL/kg灌胃生理盐水。每日1次,连续治疗30 d。流式细胞仪检测大鼠外周血中CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平;瑞氏-吉姆萨染色(Giemsa)后对肺组织灌洗液中炎性细胞计数;苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠肺组织病变;实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测大鼠肺组织NF-κB、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)信使核糖核酸(mRNA)相对表达量;通过免疫共沉淀法检测肺组织中NF-κB和IκBα结合水平;通过凝胶迁移实验(EMSA)检测大鼠肺组织中NF-κB与DNA结合情况;通过蛋白免疫印记(WB)检测大鼠肺组织核NF-κB、胞浆NF-κB、IκBα蛋白表达水平及磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)水平。[结果]治疗后,地塞米松组和党参多糖高、中、低剂量组大鼠外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均高于模型组(P<0.05);模型组巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数量均高于对照组(P<0.05),地塞米松组和党参多糖高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);与对照组相比,模型组大鼠肺组织出现严重炎性细胞浸润,气管壁变形增厚,地塞米松组和党参多糖高、中、低剂量组均出现好转;免疫共沉淀结果显示,IκBα与NF-κB可结合,且模型组IκBα和NF-κB结合最少,党参多糖低剂量组稍多,地塞米松组和中剂量组较多,党参多糖高剂量组更多,对照组最多。IκBαmRNA、胞浆NF-κB蛋白和IκBα蛋白相对表达水平结果显示:模型组均低于对照组(P<0.05),地塞米松组和党参多糖高、中、低剂量组均高于模型组(P<0.05)。[结论]党参多糖可抑制慢阻肺肺脾气虚证大鼠T细胞免疫紊乱,减轻气道炎症反应和肺组织病变,推测可能与抑制NF-κB信号传导,下调NF-κB mRNA和核NF-κB蛋白表达水平,上调IκBαmRNA和蛋白表达水平,上调胞浆NF-κB蛋白表达水平,抑制NF-κB核位移,抑制p-IκBα有关。

大黄酚对Aβ_(1-42)致阿尔茨海默症大鼠学习记忆及海马CA1区组织JNK通路的影响

目的 观察大黄酚对阿尔茨海默症大鼠学习、记忆能力的影响,并探讨对大鼠海马CA1区组织c-JUN氨基末端激酶(JNK)通路的调控作用。方法 70只SD大鼠采用Aβ_(1-42)脑内注射法建立阿尔茨海默症模型,随机分为正常组、模型组、阳性药组及大黄酚低、中、高剂量组。第7天开始,阳性药组予以多奈哌齐0.33 mg/kg,低、中、高剂量组予以大黄酚0.007、0.014、0.028 mg/kg;模型组和正常组均予以等容量生理盐水,灌胃给药,每天1次,连续3周。Morris水迷宫实验评价大鼠学习、记忆能力,HE染色观察大鼠海马CA1区组织病理改变,TUNEL染色检测大鼠海马CA1区组织神经元凋亡情况,RT-qPCR检测大鼠海马CA1区组织JNK、c-JUN、caspase12 mRNA表达,蛋白质免疫印迹法检测大鼠海马CA1区组织JNK、p-JNK、c-JUN、p-c-JUN、caspase12蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠学习、记忆能力变差,海马CA1区组织病理严重改变,细胞凋亡率升高、JNK、c-JUN、caspase12 mRNA与蛋白表达及p-JNK、p-c-JUN蛋白表达均升高(P<0.05);与模型组比较,阳性药组和大黄酚各剂量组上述指标均有改善(P<0.05),其中阳性药组和大黄酚中剂量组作用相近,且高剂量组作用最佳。结论 大黄酚可改善阿尔茨海默症大鼠学习、记忆能力,减轻海马组织CA1区病变,减少细胞凋亡,推测与抑制JNK通路激活有关。

消瘤胶囊对人肝癌耐药细胞株Bel/Fu化疗敏感性的影响

目的:探讨消瘤胶囊对人肝癌耐药细胞株Bel/Fu化疗敏感性的影响。方法:将人肝癌耐药细胞株Bel/Fu随机分为空白对照组、5-氟尿嘧啶组(12.5 mg·L^(-1))、消瘤胶囊组(25 g·L^(-1))、联合用药组(12.5 mg·L^(-1)5-氟尿嘧啶+25 g·L^(-1)消瘤胶囊),每组设置6个复孔。待细胞融合度达80%左右时,各组培养基中加入相应浓度的药物,空白对照组加入等体积细胞培养基,培养48 h。光学显微镜下观察各组细胞状态;MTT法检测细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测细胞GST-π mRNA、p-gp mRNA水平;Western Blot法检测细胞GST-π、p-gp、gp蛋白表达。结果:与空白对照组比较,5-氟尿嘧啶组、消瘤胶囊组和联合用药组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率显著升高(P<0.05,P<0.01),细胞GST-π mRNA、p-gp mRNA水平显著降低(P<0.05),细胞GST-π蛋白表达、p-gp/gp水平显著降低(P<0.05);与5-氟尿嘧啶组比较,消瘤胶囊组和联合用药组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率显著升高(P<0.05,P<0.01),细胞GST-π mRNA、p-gp mRNA水平显著降低(P<0.05),细胞GST-π蛋白表达、p-gp/gp水平显著降低(P<0.05);与消瘤胶囊组比较,联合用药组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),细胞GST-π mRNA、p-gp mRNA水平显著降低(P<0.05),细胞GST-π蛋白表达、p-gp/gp水平显著降低(P<0.05)。结论:消瘤胶囊可增强Bel/Fu细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性,抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,作用可能与抑制GST-π、p-gp表达有关。