禽流感病毒检测方法的研究进展

禽流感病毒准确、快速检测已成为抗击禽流感的一个至关重要的环节,文章对最新的检测方法及其研究进展进行了综述。

H5亚型禽流感病毒多肽疫苗的初步研制

本试验利用生物软件对H5亚型禽流感病毒A/CK/GD/178/04的血凝素进行抗原特性分析,结合关于禽流感病毒血凝素抗原位点的文献报道,选定97～212位氨基酸和369～529位氨基酸两个区域作为多肽表位候选区域。利用本实验室自主研发的原核表达载体pBT载体,串联表达HA的两个区域,经SDS-PAGE和Western Blotting分析,证明重组产物得到表达,Ni2+柱纯化重组蛋白后,对2周龄SPF鸡进行免疫,经HI试验检测该重组蛋白可以刺激机体产生HI抗体。本研究为H5亚型AIV多肽疫苗的进一步研制奠定了基础。

鸭IL-18基因克隆与序列分析

[目的]为深入研究鸭IL-18的基因表达及其生物学活性和分子佐剂的应用奠定基础。[方法]依据GenBank中香港鸭IL-18基因的序列设计1对特异引物,以广东水鸭脾淋巴细胞总RNA为模板进行RT-PCR扩增,克隆广东水鸭IL-18基因并进行序列分析。[结果]测序结果表明,广东水鸭的IL-18基因开放阅读框为603 bp,编码201个氨基酸,分子量为23.2 kDa。序列分析表明,所获得的广东水鸭IL-18基因与GenBank中香港鸭的核苷酸同源性为98.2%,氨基酸同源性为100%。它与鸡和火鸡的核苷酸同源性分别为86.9%和87.1%,而氨基酸同源性分别为96.5%和97.0%。[结论]进化树分析结果表明,鸭IL-18基因与鸡和火鸡进化关系较近。

浅谈蛋鸡无抗养殖及疫病防控技术

随着人们物质生活水平的提升,食品健康安全成为大众高度关注的热点。传统的规模化养鸡为了减少鸡群疫病发生,提高生长速度,常在养殖过程中使用抗生素,从而提高产量,增加经济效益。然而由此引发滥用抗生素以及导致禽肉蛋产品食品安全问题日益凸显,严重威胁消费者的身体健康,故而传统养殖模式已逐步被追求高品质禽产品的无抗养殖技术模式所替代。该文通过介绍蛋鸡无抗养殖的技术要点以及在无抗养殖条件下蛋鸡疫病防控进行探讨和分析,旨在提高蛋鸡养殖水平和供给优质鸡蛋产品提供帮助。

2022年全球动物高致病性禽流感疫情流行特征分析

高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza,HPAI)是由H5和H7亚型HPAI病毒(HPAIV)感染引起的一种人兽共患传染病,禽类感染后大量死亡或全群扑杀,常造成严重经济损失[1];已有报道表明感染人的HAPIV亚型主要包括H5N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N4、H7N9、H5N6和H5N8,人在感染后出现类似感冒的症状,也有发展为肺炎、器官衰竭、败血症、甚至死亡病例[2-3],可见HPAI是威胁全球养禽业及人类健康的一大传染疾病,其发展趋势是全世界关注的焦点。本文基于农业农村部畜牧兽医局发布的国际动物疫情动态信息及我国内地禽流感疫情信息(http://www.xmsyj.moa.gov.cn/yqfb/),分析疫情相关数据,综述2022年全球HPAI疫情的时空流行特征、宿主分布规律和优势流行亚型等信息,为我国HPAI防控及公共卫生安全提供参考。

布鲁菌抗原免疫层析检测方法的建立与应用

本试验应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测分娩动物羊水中布鲁菌的方法,并应用于临床检测。用胶体金标记提纯的布鲁菌M5-90疫苗株光滑型脂多糖(smooth lipopolysaccharides,S-LPS)C表位的单克隆抗体16C5,摸索与优化标记条件并制备成金垫;将抗布鲁菌的单克隆抗体16C5和羊抗鼠IgG单克隆抗体喷在硝酸纤维素膜上,优化并确定最佳包被浓度,组装成试纸卡,最后制作成带有样本采集部件的检测卡。结果表明,布鲁菌抗原快速检测卡可检测最低细菌含量为10^(5)CFU/mL;临床检测分娩母羊的羊水样本,与qPCR试剂盒结果对比,本检测卡灵敏度为83.3%,特异性为100%。表明该方法能快速、便捷地查出牛群、羊群中布鲁菌抗原阳性的牛羊,适合普通实验室及饲养场现场临床应用。

冰鲜金鲳鱼样品中一株副溶血性弧菌的分离与鉴定

目的对一株分离于冰鲜金鲳鱼样品中的菌株进行分析鉴定。方法利用TCBS培养基和弧菌选择性培养基从冰鲜金鲳鱼样品中分离到1株菌株sznj V083,并对该菌株的菌落形态、生理生化特征及其分子生物学特性进行分析。同时进行副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)标准菌株ATCC33847,创伤弧菌(Vibrio vulnificus)标准菌株ATCC27562的质控检验。结果该菌株在TCBS平板上呈现蓝绿色菌落,而在弧菌显色平板上呈现深蓝色菌落,其全自动生化鉴定结果显示其为创伤弧菌。PCR试验和16S rDNA序列分析表明,该菌株为副溶血性弧菌并与参考菌株Vibrio parahaemolyticus BB22OP(登陆号CP003973.1)的同源性最高。且该菌株的毒力基因tdh、trh检测为阴性。结论分离于冰鲜金鲳鱼样品中的菌株sznj V083为副溶血性弧菌。在副溶血性弧菌的检测中,除了常规的生理生化等方法外,还应该结合16S rDNA基因序列分析或PCR方法提高检测结果的特异性和灵敏度,以保证检测结果的真实性和准确性。

高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫幼虫的初步研究

目的 利用实时荧光PCR及高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫Ⅲ期幼虫。 方法 针对广州管圆线虫核糖体RNA基因的内转录间隔区（ITS）序列设计引物，应用实时荧光PCR和高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫Ⅲ期幼虫。并通过检测广州管圆线虫、华支睾吸虫和棘颚口线虫DNA，分析该方法的特异性；分别检测1~10条广州管圆线虫Ⅲ期幼虫DNA，分析该方法的敏感性。 结果 该方法能够特异性检测广州管圆线虫幼虫，检测华支睾吸虫和棘颚口线虫时未出现扩增曲线和熔解曲线峰。检测灵敏度可达到1条幼虫。 结论 实时荧光PCR及高分辨率熔解曲线法检测广州管圆线虫幼虫具有较好的特异性和敏感性。

2021年动物高致病性禽流感疫情的全球流行特征分析

高致病性禽流感(HPAI)是当前对全球家禽养殖业危害最大的禽类烈性传染病,不仅涉及养殖业健康发展和野生动物安全,也是全球公共卫生的主要问题之一。2021年全球报告HPAI疫情4459起,较往年呈现大幅度增加,因而不得不引起高度警惕。本文针对2021年HPAI疫情的概况、时空分布特征、主要感染亚型、物种分布进行了概述,并通过与往年疫情的比较,对HPAI的发展趋势进行了分析。本文将为我国HPAI的防疫和控制措施的制定提供数据支撑。

深圳市畜禽产品中沙门氏菌血清型与耐药性研究

目的了解深圳市畜禽产品检出的沙门氏菌的血清型与耐药性。方法选取2013~2015年分离出的70株沙门氏菌,进行血清型鉴定和药物敏感性试验。结果共确定了18个血清型,以伦敦沙门氏菌检出数量最多。药敏试验结果显示,70株沙门氏菌有24种多重耐药谱,全部菌株对头孢唑啉、阿米卡星和庆大霉素耐药,对厄他培南、亚胺培南和美洛培南敏感。耐药5种及5种以上菌株在猪肉中占78.0%,数量最多。结论建立食源性沙门氏菌耐药性的长期监测机制,对该病原菌的防控及指导养殖业和临床合理用药具有现实和医学意义。

副溶血性弧菌K抗原检测实验条件优化

目的优化副溶血性弧菌K抗原检测的实验条件。方法通过调整菌悬液的浓度、选择基础实验材料和控制反应的温度3个方面的因素,对已知血清型的副溶血性弧菌进行血清学实验。结果当反应温度为37℃时,以90 mm无菌培养皿为基础耗材、20 mg/300μL浓度的菌悬液更容易快捷地观察到凝集现象,并且凝集颗粒较多,较大。结论基于本研究优化后的实验条件,使得凝集结果判读更加容易,实验操作更为简便、安全,且提高了血清学实验的效率。

犬猫弓形虫病real-time荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种灵敏性高、特异性强、可自动化检测犬猫弓形虫的分子学诊断方法,本研究提取弓形虫RH虫株DNA,以致密颗粒蛋白7(GRA7)基因保守区为靶标,设计特异性引物并构建标准质粒pMD18-GRA7,以标准质粒pMD18-GRA7作为模板,建立SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR(real-time PCRor qPCR)检测方法。结果显示,该方法特异性引物只能扩增出弓形虫DNA样品,对阴性样品及其他犬猫寄生虫阳性样品DNA则未见扩增曲线。所建qPCR方法的检测下限为3 copies,当标准品浓度为3 copies/μL时,检测Ct值为29.4。对犬猫临床样品进行检测,并与商品化试剂盒结果相比校,阴阳性符合率达100%。上述结果表明,本研究建立的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法特异性好,敏感性强,结果稳定,可用于犬猫弓形虫病的临床检测。

鹅IL-18基因的克隆和原核表达及其多克隆抗体的制备

参考GenBank中鸡、火鸡和鸭IL-18基因序列,设计了1对特异引物,以提取的鹅脾细胞总RNA为模板,应用RT-PCR扩增、克隆鹅IL-18基因中间的333bp序列。序列分析结果表明,其与鸭IL-18基因对应序列相似性最高,达99%。参考鸭IL-18全基因序列设计上、下游引物各3条,以梯度PCR探索扩增、克隆鹅IL-18全基因。以上述策略成功扩增、克隆了3个广东地方杂交品种鹅的IL-18基因。序列分析表明,这3个杂交品种鹅的IL-18基因序列一致,长642bp,含一个603bp的ORF,编码200个氨基酸,分子质量为23.2ku。ORFN端的30个氨基酸为前导序列,其余170个氨基酸为功能蛋白序列。在GenBank中注册了第一条鹅的IL-18基因序列,登录号为EF159728。随后,构建了鹅IL-18基因ORF的重组原核表达质粒pET-GIL-18,经诱导表达、纯化获得重组鹅IL-18融合蛋白,并以其制备了兔抗重组鹅IL-18多克隆抗体。