荧光环介导恒温扩增技术检测嗜肺军团菌方法的建立

目的探讨利用环介导恒温扩增技术(LAMP)建立可以准确快速检测嗜肺军团菌的方法。方法选取嗜肺军团菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希氏菌、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌、副溶血性弧菌菌株,根据嗜肺军团菌毒力mip基因的6个特殊区域,使用Primer Explorer Version 4软件设计LAMP引物(mip-1、mip-2、mip-3),提取病原菌基因组DNA进行LAMP,评价其特异性、最低检测限和稳定性。结果筛选出mip-3引物在测定嗜肺军团菌的LAMP反应体系中扩增约10min出峰且峰值较高;非嗜肺军团菌菌株没有扩增反应;LAMP检测限可达100fg/μL;mip-3引物在10次重复检测中几乎同时出峰,稳定性良好。结论建立的LAMP检测方法具有特异性强、稳定性高特点,能快速、准确检测出嗜肺军团菌,具有较大的推广及应用前景。

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌表型检测及其耐药性研究

目的了解耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)感染状况及其产酶类型。方法采用最低抑菌浓度(MIC)法分析肠杆菌科细菌的耐药情况。采用厄他培南纸片扩散法初筛产碳青霉烯酶菌株,对初筛阳性菌株分别采用改良Hodge试验、加硼酸或苯唑西林的改良Hodge试验、EDTA亚胺培南复合纸片法进行表型确证。结果肠杆菌科细菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为2.7%、2.3%。厄他培南纸片扩散法初筛阳性菌株11株,其中改良Hodge确证试验阳性(或弱阳性)菌株3株,包括产金属酶菌株1株,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)或AmpC酶菌株2株。2株改良Hodge确证试验弱阳性菌中未检出碳青霉烯酶基因,但检出AmpC、TEM、CTX-M基因,改良Hodge试验阳性菌中检出blaIMP基因。结论改良Hodge试验、加硼酸或苯唑西林改良Hodge试验及EDTA亚胺培南复合纸片法相结合进行碳青霉烯酶检测,在暂无条件开展基因分型的医院具有很好的应用前景。

LAMP技术检测社区获得性非典型肺炎中的嗜肺军团菌感染

目的探讨环介导恒温扩增技术检测社区获得性肺炎非典型病原体嗜肺军团菌感染的可行性。方法收集195例CAP患者急性期双份合格痰液标本,一份痰液标本用作嗜肺军团菌分离培养,一份痰液标本经处理后-80℃保存至DNA提取运用LAMP技术及荧光定量PCR检测,验证LAMP试验方法的敏感性、特异性及可行性。结果 195例痰培养嗜肺军团菌检出率1.54%(3/195),荧光定量PCR灵敏度达10^(-3)/mL,检出率8.72%(17/195);LAMP方法学灵敏度达10^(-7)/μL,检出率9.23%(18/195);两者阳性符合率94.44%(17/18),两者阴性符合率99.44%(177/178),两者总符合率99.49%(194/195)。结论采用LAMP技术检测临床痰液标本中的嗜肺军团菌具有高度的特异性和敏感性,实验时间约1.5h且操作简便,更合适基层医院开展。

儿童急性呼吸道感染9种病原体的IgM抗体检测结果分析

目的分析顺德地区儿童急性呼吸道感染的主要病原体及流行情况,为儿童呼吸道感染的诊疗提供科学依据。方法采用间接免疫荧光法检测医院门诊及住院患儿908例血清标本中嗜肺军团菌血清1型（LP1）、肺炎支原体（MP）、Q热立克次体（QFR）、肺炎衣原体（CP）、腺病毒（ADV）、呼吸合胞病毒（RSV）、甲型流感病毒（INFA）、乙型流感病毒（INFB）和副流感病毒（PIVs）9种呼吸道病原体的IgM抗体。结果呼吸道病原体IgM抗体阳性率为39.6%（360/908）,检出率最高为MP（23.6%）,其次依次为INFB（17.1%）、LP1（3.3%）、ADV（1.8%）、QFR（1.7%）、PIVs（1.1%）、INFA（0.7%）、CP（0.6%）、RSV（0.4%）。混合感染占10.5%（95/908）,以MP＋INFB最为多见,占8.0%（73/908）。春、夏、秋季检出阳性率较高,冬季最低,差异有统计学意义（P〈0.05）;1～13岁均为易感人群,与小于1岁组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论顺德地区儿童急性呼吸道感染以MP、INFB为多见,且MP和INFB易合并感染;LP1感染应引起注意;应做好儿童呼吸道感染的预防工作。

儿童急性呼吸道感染中C反应蛋白、白细胞计数、降钙素原的应用价值

目的探讨白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)及降钙素原(PCT)在儿童急性呼吸道感染中的应用价值。方法对410例检出病原体的急性呼吸道感染患儿进行回顾性分析,分为细菌感染组95例、病毒感染组94例、肺炎支原体(MP)感染组166例、混合感染组55例,并选择同期健康儿童20例作为健康对照组,比较各组血中WBC、CRP、PCT的检测结果。结果急性呼吸道感染患儿病原体检出比例从高到低分别为:MP感染组(40.5%)、细菌感染组(23.2%)、病毒感染组(22.9%)、混合感染组(13.4%),细菌感染组与混合感染组的WBC、CRP和PCT水平明显高于MP感染组、病毒感染组与健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论儿童发生急性呼吸道感染时,联合细菌培养、病原学检测和血WBC、CRP、PCT检测,综合考虑检测指标,以利于临床早期诊断与治疗。

血清超敏肌钙蛋白T在急性冠状动脉综合征患者中危险分层的研究

目的探讨血清超敏肌钙蛋白(hs-cTnT)在急性冠状动脉综合征(ACS)患者中的临床诊断以及预测冠状动脉病变严重程度的关系,为基层医院提供一种正确评估ACS及危险分层的方法。方法选择拟诊ACS且接收冠脉造影的患者360例,于入院24h或冠脉造影前空腹采血测定血清hs-cTnT。根据冠脉造影结果分为正常对照组、轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组和完全闭塞组,同时根据狭窄病变累及血管范围分为单支病变组、双支病变组和3支病变组,分析其对应的hs-cTnT水平。结果冠状动脉病变程度越严重,其血清hs-cTnT水平越高。正常对照组、轻度狭窄组、中度度狭窄组、重度狭窄组和完全闭塞组其hs-cTnT水平分别为(6.5±4.1)pg/mL、(8.3±6.8)pg/mL、(20.53±16.47)pg/mL、(341.9±382.0)pg/mL、(728.4±511.7)pg/mL,重度和完全闭塞的冠脉病变组与正常对照组比较有显著统计学意义(P<0.01);双支和3支病变组hs-cTnT水平为(345.5±320.8)pg/mL、(679.6±484.7)pg/mL,这两组与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 hs-cTnT的水平高低,可预测冠状动脉病变的程度及冠状动脉病变的范围。测定hs-cTnT,可作为ACS早期危险分层的一个可靠指标,并指导临床治疗。

学龄前儿童急性呼吸道感染鼻咽部菌谱分析

目的了解顺德地区学龄前儿童急性呼吸道感染(ARI)鼻咽部细菌分布及耐药状况,以指导临床诊疗。方法选择2013年10月至2014年12月医院住院治疗的学龄前ARI患儿1 003例,其中急性上呼吸道感染302例,支气管炎126例,肺炎575例。采集咽拭子,进行菌种鉴定、药敏试验和统计学分析。结果 (1)该地区儿童ARI以春季好发;住院患儿肺炎感染占57.3%。(2)1 003份咽拭子分离菌株213株,阳性率为21.2%,其中革兰阴性菌和革兰阳性菌分别占53.1%、42.3%,假丝酵母菌占4.2%。(3)患儿鼻咽部病原菌检测的阳性率随着年龄的增长而降低;各年龄组检出菌谱有所差异,但均以金黄色葡萄球菌(SA)检出为首。(4)SA 100%产β-内酰胺酶,MRSA占28.8%;产ESBL的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为15.4%、25.0%。结论监测期间该地区主要流行菌株是SA;学龄前儿童ARI各年龄段的细菌种类和阳性率不尽相同,临床选择抗菌药物时,应加强监测,综合考虑各种因素。

顺德市健康成年人血液流变学参数正常水平调查

目的通过检测顺德地区健康人群血液流变学指标,初步建立适宜顺德地区人群血液流变学的参考范围。方法采用MVIS-2040血液流变仪,测定1976例健康成年人血液流变学指标并按性别和年龄分`组,统计分析。结果男女组均从40～49岁年龄段开始全血黏度及全血还原黏度随着年龄增长而逐步下降,男、女性别组除血浆黏度和全血还原黏度外其余血液流变学指标各年龄阶段均存在统计学差异;男性60岁以上和60岁以下的全血黏度、红细胞聚集指数和红细胞压积差异明显;女性各年龄段血液流变学指标差异无统计学意义。结论通过调查有助于建立本实验室适用的、健康成人血液流变学参考范围,为临床应用和研究提供相关依据。