高效液相色谱法测定人血浆中阿托伐他汀浓度

目的 建立高效液相色谱法（HPLC）测定人血浆中阿托伐他汀的浓度.方法 采用Nova-pak C18色谱柱（3.9×150mm,4μm）;流动相为甲醇-0.02 mol·L-1,醋酸铵缓冲液（63：27,V/V）;流速为0.9mL·min-1;检测波长245nm;柱温为30℃;血浆样品用乙酸乙酯提取浓缩后分析,黄体酮为内标.结果 阿托伐他汀的血药浓度在1.0～535.0ng·mL-1范围内回归方程为y=0.1366x＋0.0484（r=0.9992）,检测限为0.5ng·mL-1 （S/N≥3）.阿托伐他汀在2.0、201.1、535.0ng·mL-1三种浓度水平的平均回收率分别为100.8%、101.1%、99.5%,日内和日间RSD均小于2.80%.结论 本法准确、快速、稳定,适用于阿托伐他汀的血药浓度检测.

中国青年男性左旋多巴药动学研究

目的探讨左旋多巴在中国青年人药动学。方法征集14名健康男性志愿者,口服200/50mg左旋多巴/苄丝肼片,给药后10,20,30,45,60,90,120,180,240,360,480,600min采血,高效液相色谱-电化学法测定左旋多巴血药浓度,3P87药动学软件计算药动学参数。结果左旋多巴t1/2β、AUC0-∞、CL/F、Cmax、tmax和V/F分别为54.97±12.4min、351.10±64.12μg.min/mL、589.12±118.54mL·min-1、2.41±0.98μg.mL-1、55.60±16.55min和45.82±20.02L。结论积累了左旋多巴在青年人药动学资料,可为临床合理用药提供参考。

红细胞药物载体研究进展

目的介绍红细胞作为药物载体的研究和应用现状。方法查阅国内外相关文献,进行分析、归纳和综述。结果对红细胞作为药物载体特点、制备和应用情况进行综述。结论红细胞作为药物载体具有广阔应用前景。

高效液相色谱-电化学法测定人红细胞儿茶酚氧位甲基转移酶活性

目的:建立高效液相色谱-电化学法测定人体红细胞儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)活性。方法:以S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)为甲基供体,3,4-二羟基苯甲酸(DBA)为酶反应底物,COMT催化DBA生成4-羟基-3-甲氧苯甲酸(4-OH-3-MBA),高氯酸沉淀蛋白后直接进样,电化学检测4-OH-3-MBA;以每毫克蛋白每分钟生成的4-OH-3-MBA的pmol数表示COMT活性。色谱柱为Nova-pak C18(3.9mm×150mm,4.0μm);流动相为0.1mol·L-1磷酸二氢钠缓冲液(内含EDTA0.15mmol·L-1)-甲醇(85∶15),pH3.2,流速0.8mL·min-1,柱温25℃;工作电位+900mV。结果:4-OH-3-MBA在0.2～6μmol·L-1范围内线性良好,r=0.9997(n=6),4-OH-3-MBA最低检测浓度为0.02μmol·L-1(S/N≥3);4-OH-3-MBA0.2,2,6μmol·L-1浓度的日内、日间精密度RSD在1.09%～7.71%之间,回收率在96.0%～100.3%之间。结论:本法准确、灵敏、简便,适于红细胞COMT活性测定。

我国福建汉族人群儿茶酚氧位甲基转移酶基因多态性研究

目的:了解福建省汉族人儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)1947位点基因多态性分布,为探讨该基因多态性与疾病的相关性及对药物代谢影响提供遗传背景资料。方法:应用聚合酶链反应技术-限制性内切酶分析检测了166名福建汉族正常人的COMT基因1947位点多态性,并比较了不同人群之间的基因型与等位基因频率。结果:福建汉族人COMT1947位点基因型(GG,GA和AA)分布频率分别是58.4%,36.7%,4.8%。COMT1947位点等位基因频率G和A分别是77%和23%。福建汉族人COMT1947位点的基因型分布和等位基因频率同肯尼亚人、日本人、台湾地区汉族人群比较差异无显著性,与美国、英国、芬兰和东南亚人比较,差异有极显著性(P<0.01)。福建汉族人COMT的GG纯合型显著高于美国、英国、芬兰和东南亚人群;而AA纯合型显著低于美国、英国、芬兰和东南亚人群。结论:福建汉族人COMT1947位点基因多态性分布不同于某些地区的人群,具有种族差异。

汉族青年人群中性别对儿茶酚氧位甲基转移酶活性的影响

目的分析性别与儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)活性之间的相关性。方法建立测定红细胞COMT活性的高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)法,测定166名健康汉族志愿者红细胞COMT活性,分析性别与COMT活性之间的相关性;采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性方法对志愿者COMT基因1947位点进行基因分型,进一步分析该位点不同基因型组内性别和COMT活性相关性。结果建立的测定红细胞COMT活性的HPLC-ECD法准确、灵敏、重现性好,可满足测定需要。84名男性COMT活性为(1.347±0.621)pmol.mg-1.min-1,82名女性为(1.255±0.473)pmol.mg-1.min-1,两者差异无统计学意义(P>0.05);COMT基因1947位点G/G、G/A和A/A基因型组内男性和女性COMT活性差异也无统计学意义(P>0.05)。结论性别对COMT活性无明显影响。

MDR1基因多态性与美罗培南血药浓度及临床疗效的相关性研究

目的考察多药耐药基因1(MDR1)的基因多态性在中国南方人群中的分布,明确其对美罗培南稳态血药浓度的影响及临床疗效的相关性。方法纳入101例美罗培南治疗的患者,用高效液相色谱法测定美罗培南稳态血药浓度,聚合酶链式反应(PCR)和DNA测序技术检测基因分型。比较MDR1 C3435T(rs1045642)不同基因型对美罗培南稳态血药浓度及临床疗效的影响。结果101例患者中,浓度达到5~20μg/mL的比例为34.9%,5~10μg/mL与10~20μg/mL浓度范围美罗培南的临床有效率(83.3%,91.7%)显著高于5μg/mL以下浓度范围(44%)(P<0.05),同时5~10μg/mL与10~20μg/mL浓度范围美罗培南的临床有效率无显著差异(P>0.05)。MDR1 C3435T突变型和野生型患者的美罗培南浓度、浓度/剂量比及临床疗效无显著差异(P>0.05)。结论MDR1 C3435T基因突变可能与患者美罗培南稳态血药浓度及临床疗效无关。

处方前置审核模式的实践与分析

目的探讨处方前置审核的实施与效果,提升药师对处方前置审核的理解与干预能力,促进临床合理用药。方法依据《处方管理办法》及《医疗机构处方审核规范》等审方规则,结合已建立的处方前置审核系统,收集福建医科大学附属第一医院2018年1月至2018年12月7121张门诊和急诊前置审核回退的问题处方进行分类统计。结果我院7121张不合理处方中,主要存在诊断与用药不符、用法用量不适宜、药品选择不适宜、用药途径不适宜、药物配伍不适宜等问题。相比传统审核处方模式,前置处方审核模式可以简化不适宜处方修改过程、减少不合格处方、提升就诊者取药效率等优势。结论处方前置审核可以保证医生用药规范性、提高处方质量和药师工作效率,促进临床合理用药、保障患者用药安全。

PDCA法在“缩短患者取药等候时间”中的应用

目的探究有效缩短我院门诊患者取药等候时间的措施。方法针对我院门诊患者取药等候时间长的现象,通过鱼骨图分析法找出原因,并采用PDCA循环法进行持续改进。结果针对鱼骨图分析法得到的4个引起患者取药时间延长的因素制定了相应的解决措施:提供多种形式的指引信息,帮助患者了解取药流程;引进设备,增加发药窗口,优化操作规程等措施,使药房管理趋向规范化,缩短患者取药等候时间。结论应用PDCA循环法对"缩短患者取药等候时间"的管理进行持续改进,取得了良好的效果。

大鼠左旋多巴给药后纹状体高香草酸水平变化

目的:探讨左旋多巴给药后大鼠纹状体细胞外液高香草酸浓度随时间变化规律。方法:大鼠单次灌胃给予左旋多巴48mg.kg-1和苄丝肼12mg.kg-1后,采用脑微透析活体取样和高效液相色谱技术,测定给药后6h内不同时间点大鼠纹状体细胞外液高香草酸和左旋多巴浓度。结果:左旋多巴+苄丝肼给药后大鼠纹状体细胞外液高香草酸水平升高明显迟于左旋多巴,显示左旋多巴代谢为高香草酸需一定时间;左旋多巴水平在给药4h后基本恢复到基础水平,而高香草酸水平给药6h后仍远高于给药前水平。结论:大鼠如以左旋多巴48mg.kg-1和苄丝肼12mg.kg-1每6h一次给药,高香草酸水平可能存在蓄积现象,其临床意义有待进一步研究。

粗糠柴毒素对前列腺癌细胞经典Wnt信号通路影响

目的:探讨粗糠柴毒素(Rottlerin)对前列腺癌细胞PC-3经典Wnt信号通路作用。方法:以不同浓度Rottlerin处理PC-3细胞24 h,谷胱甘肽转移酶-E-钙粘蛋白(GST-E-cadherin)结合法提取胞浆游离β-连环蛋白(β-catenin),Western blot法测定总β-连环蛋白、胞浆游离β-连环蛋白、低密度脂蛋白相关受体-6(LRP6)及磷酸化LRP6(p-LRP6)蛋白水平。结果:Rottlerin可明显降低PC-3胞浆游离β-连环蛋白水平、LRP6及p-LRP6蛋白水平,并成剂量依赖性,和对照组比较,Rottlerin0.25、0.5、1.0和2.0μmol·L-1组胞浆游离β-连环蛋白水平分别下降54.0%,78.6%,79.7%和79.6%,LRP6表达分别下降17.9%,38.8%,63.2%和85.0%,p-LRP6水平分别下降29.4%,67.1%,96.3%和97.4%。结论:Rottlerin可通过LRP6受体抑制PC-3细胞经典Wnt信号通路。

CYP3A4*18A、CYP3A4*18B和MDR1 C3435T基因多态性对阿托伐他汀血药浓度及疗效的影响

目的探讨高脂血症患者CYP3A4*18A、*18B和MDR1 C3435T基因多态性对阿托伐他汀血药浓度、调脂疗效的影响。方法 115例福建籍汉族高脂血症患者以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)进行基因分型,HPLC-UV检测阿托伐他汀稳态血药谷浓度,均相酶法监测治疗前、用药1个月后血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)水平。用SPSS13.0软件以ANOVA方差分析高脂血症患者基因型与调脂疗效、血药浓度之间的关系。结果 115例高脂血症患者,CYP3A4*18A、*18B的突变频率分别为3.48%和23.48%,MDR1 C3435T突变率为31.74%,三基因位点SNPs分布与文献报道的国人正常人群无显著性差异(P>0.05);CYP3A4*18A和MDR1 C3435T各基因型患者ATV血药浓度组间及组内差异均无统计学意义(P>0.05)。CYP3A4*18B基因突变纯合子(AA)组患者ATV血药浓度显著高于突变杂合子(GA)组和野生型纯合子(GG)组(P=0.016)。CYP3A4*18A、MDR1 C3435T不同基因型患者的调脂效率无显著性差异(P>0.05),CYP3A4*18B基因的AA组患者TC调脂效果显著优于GA组和GG组患者(P=0.02);LDL-C变化率三基因型组间均有显著差异,依次为AA组>GA组>GG组(P=0.01),对TG和HDL-C的调节作用3种基因型患者无显著性差异(P>0.05)。治疗前后,TC的变化率与血药浓度呈显著性相关(P=0.031),而其余3种脂质变化率与血药浓度相关性无统计学意义(P>0.05)。结论 MDR1 C3435T与CYP3A4*18A基因SNPs(single nucleotide polymorphisms),不影响ATV血药浓度及其疗效。携带CYP3A4*18B基因的患者接受ATV治疗时,比未携带者血药浓度高,调脂疗效更显著。

新型冠状病毒肺炎疫情防控期间借助互联网开展医院药学服务的实践与思考

新型冠状病毒肺炎疫情防控期间,大力推进互联网医院建设,对病情稳定的慢性病复诊患者提供线上药学服务,不仅可降低患者交叉感染的风险,还可保障患者治疗药物管理得以持续。本文从福建医科大学附属第一医院的互联网医院平台运行实际出发,介绍了互联网药学服务特色以及新思路,可为当下及未来互联网医院药学服务发展提供借鉴和参考。

成人慢性肾小球肾炎患者他克莫司群体药动学研究

目的:建立成人慢性肾小球肾炎患者他克莫司群体药动学(population pharmaco-kinetics,PPK)模型。方法:收集55例慢性肾小球肾炎患者的268个他克莫司血药浓度数据。采用非线性混合效应模型考察CYP3A5基因型、体质量、年龄、实验室指标、合并用药等对他克莫司药动学参数的影响,建立他克莫司PPK模型,并通过拟合优度诊断、Bootstrap自举法及正态预测分布误差法对模型进行验证。结果:他克莫司表观清除率及表观分布容积的群体典型值分别为13.8L·h-1和733L,CYP3A5基因型和合并用药五酯胶囊对他克莫司清除率具有显著影响。经验证他克莫司PPK模型稳定有效。结论:首次建立成人慢性肾小球肾炎患者他克莫司PPK模型,可为慢性肾小球肾炎患者的他克莫司个体化给药提供参考。

左旋多巴在大鼠血液和纹状体细胞外液中的药动学行为

目的探讨左旋多巴在大鼠血液和纹状体细胞外液药物浓度随时间变化规律。方法大鼠单次灌胃给予左旋多巴48mg.kg-1和苄丝肼12 mg.kg-1后,采用脑微透析活体取样和高效液相色谱技术,测定给药后6 h内不同时间点大鼠血浆和纹状体细胞外液左旋多巴浓度,应用3P87药动学程序拟合药动学参数。结果左旋多巴在血浆及纹状体细胞外液药-时曲线均符合一室模型,左旋多巴在纹状体细胞外液半衰期(t1/2)、达峰时间(tm ax)、达峰浓度(mρax),药-时曲线下面积(AUC0→∞)分别为(63.25±25.80)m in,(34.21±8.70)m in,(112.98±76.85)μg.L-1,(14 443±8 744)μg.m in.L-1(n=7),血浆t1/2,tm ax,ρm ax,AUC0→∞分别为(78.94±7.95)m in,(6.763±3.579)m in,(4 373±1 815)μg.L-1,(509 940±134 619)μg.m in.L-1(n=7),其中左旋多巴在纹状体细胞外液和外周血t1/2相近(P>0.05),而纹状体tm ax远大于外周血(P<0.01)。结论左旋多巴在血液和作用靶部位纹状体药物浓度随时间变化不完全一致,血药浓度变化规律不能完全反映药物在脑内变化情况。

LRP6受体胞内区赖氨酸位点突变和经典Wnt信号通路相关性分析

目的:探讨LRP6受体胞内区赖氨酸位点突变对经典Wnt信号通路影响。方法:构建胞内区3个赖氨酸位点(K8R、K48R及K82R)同时突变的突变型LRP6受体,瞬时转染HEK293细胞,运用荧光素酶报告基因技术分析其对β-catenin/TCF转录活性影响;同时运用谷胱甘肽转移酶-E-钙粘蛋白(GST-E-cadherin)结合法提取胞浆游离β-连环蛋白(β-catenin),Western blot法测定总β-连环蛋白、胞浆游离β-连环蛋白、低密度脂蛋白相关受体-6(LRP6)及磷酸化LRP6(p-LRP6)蛋白水平。结果 :和转染空白质粒PcDNA3比较,转染LRP6增强TOPflash活性593倍(P<0.05),提高胞浆游离β-catenin水平126.3%;而转染赖氨酸突变的LRP6将进一步增强TOPflash活性,达2 989倍(P<0.05),胞浆游离β-catenin水平提高580.5%;和转染未突变LRP6相比,转染胞内区赖氨酸突变LRP6受体激活Wnt信号通路作用更强。结论:LRP6胞内区赖氨酸位点在LRP6参与Wnt信号通路活化过程中可能具有重要作用。

RSPO4和乳腺癌细胞经典Wnt信号通路相关性研究

目的:探讨R-spondin4 (RSPO4)对乳腺癌经典Wnt信号通路影响。方法:以0,10,50,250 ng·mL-1不同质量浓度RSPO4处理乳腺癌细胞株MDA-MB-231和HS578T24h,运用荧光素酶报告基因技术分析其对β-连环蛋白(β-catenin)/TCF转录活性影响;同时运用谷胱甘肽转移酶-E-钙黏蛋白(GST-E-cadherin)结合法提取胞浆游离β-catenin,Westernblot法测定总β-catenin、胞浆游离β-catenin、低密度脂蛋白相关受体-6 (LRP6)及磷酸化LRP6 (p-LRP6)及Axin2蛋白水平。结果:RSPO4可明显增强乳腺癌细胞株MDA-MB-231和HS578T的TOPflash活性,升高p-LRP6、胞浆游离β-catenin、Axin2蛋白水平,并呈现剂量依赖性。结论:RSPO4可激活乳腺癌细胞经典Wnt信号通路。

苄丝肼对大鼠纹状体细胞外液左旋多巴药动学的影响

目的探讨苄丝肼对左旋多巴大鼠纹状体细胞外液药动学影响。方法大鼠随机分3组(每组7只):左旋多巴合并苄丝肼组,大鼠灌胃给予左旋多巴48 mg.kg-1和苄丝肼12 mg.kg-1;单用左旋多巴组,大鼠灌胃给予左旋多巴48 mg.kg-1;生理盐水对照组,大鼠灌胃给予等体积生理盐水。采用脑微透析活体取样和高效液相色谱技术,测定给药后6 h内不同时间点大鼠血浆和纹状体细胞外液左旋多巴浓度,应用3P87药动学程序拟合药动学参数。结果左旋多巴在血浆及纹状体细胞外液药-时曲线符合一室模型。单用左旋多巴在纹状体细胞外液t12、tmax、ρmax和AUC0→∞分别为(21.55±13.74)min(、46.82±27.49)min、(9.283±2.130)μg.L-1(、2 762±1 257)μg.min.L-1;左旋多巴合用苄丝肼组纹状体细胞外液t12t、max、ρmax、AUC0→∞分别为(83.50±10.24)min(、49.97±11.72)min(、119.62±81.12)μg.L-1(、18 431±9 115)μg.min.L-1。其中,除tmax外,单用左旋多巴组t12、ρmax和AUC0→∞均显著小于左旋多巴合用苄丝肼组(P<0.01)。结论苄丝肼可显著提高左旋多巴进入纹状体药量。

CYP3A5*3基因多态性与他克莫司血药浓度及临床疗效的相关性研究

目的探讨CYP3A5*3在中国人群中的分布,明确其与他克莫司稳态谷浓度及临床疗效的相关性。方法收集55例慢性肾小球肾炎患者的268份他克莫司稳态谷浓度,酶免疫扩大分析法测定其浓度值,采用TL998A荧光检测仪进行CYP3A5*3基因型测定。分析CYP3A5*3不同基因型对他克莫司谷浓度及临床疗效的影响。结果268份他克莫司稳态谷浓度中,5~<10 ng·mL-1与10~20ng·mL-1浓度范围他克莫司的临床有效率(82.0%,82.6%)显著高于<5 ng·mL-1(45.5%)(P<0.05),同时5~<10 ng·mL-1与10~20μg·mL-1浓度范围他克莫司的临床有效率相近。CYP3A5*3各基因型(GA、GG、AA)患者他克莫司在血药谷浓度、日剂量和谷浓度/剂量(C/D)值两两比较结果显示:突变杂合子GA型和突变纯合子GG型患者血药谷浓度高于野生型AA型患者,且突变杂合子GA患者高于突变纯合子GG患者(P<0.05);突变纯合子GG患者的他克莫司日剂量显著低于突变杂合子GA和野生型AA患者,且突变杂合子GA患者显著低于野生型AA患者(P<0.05);突变纯合子GG患者的他克莫司C/D显著高于突变杂合子GA和野生型AA患者,且突变杂合子GA患者显著高于野生型AA患者(P<0.05)。CYP3A5*3基因型不同的患者临床有效率相近。结论CYP3A5*3基因多态性对中国肾小球肾炎患者他克莫司血药浓度有显著影响,等位基因G携带者他克莫司C/D值更高,且每日所需剂量更低;但CYP3A5*3基因多态性可能与临床疗效无关。