四种独立通风笼具(IVC)的检测

目的比较4种独立通风笼具(individually ventilated cages,IVC)的环境参数。方法参考GB14925-2001的检测方法对分别来自4个厂家生产的4种不同的IVC进行环境检测。结果4种IVC在空气洁净度、落下菌、噪声和照度等4个指标检测数据较为一致;在梯度压差、换气次数、气流速度等3个指标存在较大的差别;而温湿度等指标取决于IVC所处的外部环境。结论目前缺乏国家标准对IVC环境指标进行限定,各厂家所生产的IVC存在差异,需要在此方面加强研究,以促进IVC的标准化,更好的服务于实验动物行业。

实验动物屏障系统微生物动态状况

目的研究运行中的实验动物屏障系统微生物的情况。方法采用沉降菌法、棉拭子法等方法,研究运行中的屏障系统不同区域、不同环境指标下屏障系统内微生物的状况。结果动态下的屏障系统微生物情况与国标GB14925-2001中静态环境有较大不同,动物饲养室和动物实验室沉降菌浓度远高于静态要求;辅助区域在规范化消毒及严格管理的情况下,能达到国标要求。屏障系统的微生物情况存在一定的昼夜变化规律,在晚间出现峰值。结论合适的换气次数可有效控制实验动物屏障系统的沉降菌浓度;加强消毒及硬件的管理,是屏障系统内环境稳定的保障。

实验用斑马鱼养殖地方标准的初步探讨

斑马鱼因其特有的优势,正越来越广泛的运用于药物筛选、环境保护等领域,但斑马鱼的标准化问题一直未能很好的解决,目前既无国家标准,也没有行业标准,一定程度上局限了斑马鱼作为实验用鱼的广泛应用,也不利于管理部门颁发实验用斑马鱼的行政许可证书。在此背景下,本文从斑马鱼的环境与设施、养殖用水、饲料等方面的标准化问题进行初步探讨,以期促进实验用斑马鱼的浙江省地方标准的形成。

浙江省实验动物行政许可现状

浙江省自2002年开始实施实验动物行政许可,本文在对我省近几年实验动物行政许可的情况进行统计总结的基础上,分析我省实验动物行政许可的特点,找出存在的问题,并提出促进实验动物发展的建议。

实验动物信息网建设分析与思考

调研国内省级及以上实验动物信息网络建设情况,对其栏目设置、网站运行、主办单位等方面进行统计,分析国内实验动物信息网站的特点,在此基础上结合浙江省实验动物行业实际情况,提出浙江省实验动物信息网建设建议。

大学生考试焦虑与考试成绩关系的初步探讨

通过了解大学生考试焦虑的特点及规律,探讨大学生考试焦虑与考试成绩的关系。采用考试焦虑测量表进行调查。结果显示,考试焦虑在不同性别、不同专业的大学生之间无显著差异,而与人格密切相关,考试焦虑与某些课程的成绩亦有一定关系(p<0.05)。从而认为轻度考试焦虑对大学生考试成绩有着积极的影响作用。

大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取方法的比较

目的比较两种肠内容物前处理和两种提取方法对清洁级SD大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取效率。方法分别选用PBS多次离心漂洗、液氮破细胞两种前处理方法和酚/氯仿抽提、试剂盒过柱法两种提取方法进行组合分析,对4份肠内容物和16份含金黄色葡萄球菌肠内容物进行随机提取。结果大鼠肠内容物细菌基因组DNA含量和纯度测定结果显示,与PBS反复离心相比,液氮研磨前处理能显著提高大鼠肠内容物基因组DNA。荧光定量PCR表明,液氮研磨前处理较PBS反复离心能更好地收集细菌基因组DNA,其Ct值最低。结论研究结果表明,采用液氮研磨试剂盒法在大鼠肠内容物DNA提取中是较为优良的方法,该方法为建立实验动物中微生物的定量PCR检测方法打下了基础。

磁流体热疗对体外人肺癌细胞A549的影响

背景与目的磁流体热疗是将纳米技术和热疗相结合的一种新兴热疗方法,具有高度的靶向性和特异性,已成为目前研究的热点。本研究旨在探讨Fe3O4纳米磁流体热疗在体外对人肺癌A549细胞的影响。方法在体外将不同浓度的Fe3O4纳米磁流体和人肺癌A549细胞共培养,在交变磁场中作用30min,采用M法细胞计数、流式细胞术、倒置显微镜、透射电镜等方法观察磁流体热疗对人肺癌A549细胞活细胞数的光密度值、杀伤率、细胞形态、细胞周期及凋亡情况的影响。结果磁流体热疗后人肺癌A549细胞增殖受到明显抑制,活细胞数的光密度值下降;杀伤率(cytotoxityindex,CI)增加;细胞凋亡率逐渐增强;细胞周期停滞于S期,S期细胞和G2期增加,与磁流体浓度呈明显依赖关系。电镜观察磁流体热疗后的肺癌细胞呈凋亡样改变,高温时呈坏死样改变。结论磁流体热疗能明显抑制人肺癌A549细胞的增殖,诱导凋亡,阻滞细胞于S期。

非酒精性脂肪肝大鼠PPARα基因表达及脂代谢和胰岛素水平的变化

目的观察非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝组织中PPARα基因的表达,并用PPARα激动剂进行干预,探讨其与胰岛素抵抗、脂代谢紊乱的关系。方法大鼠随机分为①正常对照组、②高脂模型组、③PPARα激动剂干预组,利用高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪肝模型。12周后,检测大鼠血脂、肝功能、血糖、胰岛素水平及胰岛素抵抗指数;RT-PCR法分析PPARα基因的表达;观察肝脏的形态学改变。结果PPARα激动剂可降低NAFLD大鼠转氨酶、血脂水平及胰岛素抵抗指数,可促进NAFLD大鼠中PPARα基因的表达;肝脏形态学明显改善。结论PPARα激动剂能改善NAFLD大鼠脂质代谢紊乱,有明显的保肝降酶作用,具有适度的胰岛素增敏作用。PPARα及其配体在NAFLD发病机制及治疗中的进一步深入研究,将为临床防治NAFLD提供新的思路。

长爪沙鼠线粒体DNA控制区全序列测定及分析

目的对长爪沙鼠线粒体DNA控制区全序列进行测定,并对其进行鉴定及进化分析。方法根据长爪沙鼠已知基因序列设计引物,采用PCR产物测序法,对所得的片段进行测序鉴定。结合已公布啮齿类动物D-loop区序列,分析其碱基组成、遗传距离、并基于最小进化法和UPGMA法构建系统进化树。结果获得长爪沙鼠D-loop区序列,其与家鼠、小家鼠和仓鼠平均同源性为58%;碱基组成分析显示,长爪沙鼠与啮齿类动物有相似的碱基组成和碱基偏离,其A-skew和G-skew分别为0.0047和-0.28。进化分析结果显示,长爪沙鼠与家鼠(0.35)、黑家鼠(0.38)和仓鼠(0.39)具有较近的遗传距离,其分化顺序为跳鼠、蔗鼠、长爪沙鼠、仓鼠、家鼠和小家鼠。结论本研究获得长爪沙鼠D-loop区全序列,确定了长爪沙鼠与仓鼠、家鼠、小家鼠及其它啮齿动物的进化关系,为长爪沙鼠进化研究、线粒体的结构和功能研究奠定基础。

磁流体体内毒性的初步实验研究

目的:检测肿瘤热疗用四氧化三铁磁流体的急性毒性,为进一步研究其长期毒性以及体内抗肿瘤实验打下基础。方法:按不同剂量的磁流体分别通过静脉注射法及腹腔注射法给予小鼠纳米级四氧化三铁磁流体,于注射前、注射后12、24、36h,经眶静脉采血,用自动血球计数仪测定外周抗凝血中的白细胞,观察小鼠的毒性反应和主要脏器的病理学改变。结果:各剂量组细胞计数与对照组比较,差异均无统计学意义,小鼠静脉注射半数致死剂量LD50>1136.36mg/kg,最大无毒性剂量ED0为652.18mg/kg;腹腔注射LD50>2162.62mg/kg,ED0为1338.1mg/kg。主要脏器未见明显病理改变。结论:纳米四氧化三铁磁流体在动物体内的急性毒性很低,可以作为肿瘤热疗材料。

生物净化前后长爪沙鼠微生物和寄生虫携带情况的比较

目的比较生物净化前后长爪沙鼠微生物携带情况。方法采集生物净化前后长爪沙鼠的气管、回盲部样本，经血平皿培养后，分离菌落进行纯培养，利用细菌鉴定仪进行菌种鉴定；气管经研磨后，转入选择性培养基鉴别培养；分离血清进行泰泽病原体抗体检测。结果生物净化后F1代、F2代和F3代长爪沙鼠泰泽病原体血清抗体检测均为阴性，生物净化后的其他微生物和寄生虫普查结果也表明，各项检测中均未发现清洁级啮齿类动物中需排除的病原微生物和寄生虫。结论剖宫产和代乳技术能有效减少长爪沙鼠携带的微生物和寄生虫。

高脂血症长爪沙鼠模型的转录组检测和代谢性炎症通路的初步研究

目的研究饮食诱发的高脂血症长爪沙鼠模型的关键基因及代谢性炎症通路调控网络。方法利用RNA-Seq测序技术及生物信息学技术对正常组与模型组两个RNA池进行测序和分析。结果 De novo拼接后获得有效长爪沙鼠基因47 522个(即≥100 bp的unigene),大小26.9 Mb,与GenBank中现有的基因比对结果表明,约82.53%的序列与基因组上的外显子序列同源;诱发高脂血症动物与正常动物之间共获得21 125个差异基因,其中16 087个下调,5 038个上调,模型组相对于正常组存在显著的下调关系(P<0.01)。其中与长爪沙鼠高脂血症代谢性炎症密切相关的通路有8个(P<0.01),这8个通路所表达的基因中有15个与免疫和炎症相关的基因显著下调(P<0.01)。结论 RNA-Seq测序和生物信息技术可作为研究高脂血症动物模型的整体基因转录的工具,筛选出的关键基因和通路可作为研究的候选基因或操作靶点。

长春新碱诱导建立人结肠癌多药耐受性小鼠模型及MDR1和MRP1基因表达

目的建立人结肠癌多药耐受性动物模型并初步探索其耐药机制。方法结合体内外诱导方法建立人结肠癌多药耐受性动物模型,利用VCR和CTX的肿瘤抑制实验评价其MDR特性;利用real-time PCR和West-ern blotting等方法分析其P-gp/MDR1和MRP1基因和蛋白的表达。结果肿瘤抑制实验结果显示,MDR和敏感型结肠癌模型的肿瘤生长速度差异不显著,MDR结肠癌动物模型对于VCR和CTX的耐药性均有较大程度的提高;表达分析结果显示,人结肠癌MDR动物模型的P-gp/MDR1表达水平有较大提高,而MRP1表达没有显著变化。结论人结肠癌多药耐受性动物模型具有较好的多药耐受性,其多药耐受性表型主要是由于P-gp/MDR1过量表达所导致。

长爪沙鼠的生物净化技术

目的实现长爪沙鼠微生物质量升级和实验动物化目标,需对长爪沙鼠实施生物净化。方法在长爪沙鼠生物净化过程中,采取孕鼠选择和临产期判断、无菌剖宫产、仔鼠代乳以及独立通风笼盒(IVC)饲养管理等措施,比较了ICR小鼠、SD大鼠、长爪沙鼠代乳和饲料中添加营养成分对仔鼠代乳的影响。结果本研究共实施长爪沙鼠无菌剖宫产达85胎次,通过ICR代乳鼠代乳并成功断乳167只。结论本研究顺利实现了长爪沙鼠生物净化,形成的关键技术有望为我国特色实验动物资源的生物净化提供参考。

磁流体热疗对肺癌A549裸鼠移植瘤抑制作用的实验研究

目的探讨Fe304磁流体热疗对人肺癌A549裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法将人肺癌A549细胞接种于裸鼠背部皮下建立移植瘤模型,当肿瘤长至直径(6～8mm)时,在预实验的基础上随机分为4组:对照组、低剂量(67.5mg/ml)组、中剂量(90.0mg/ml)组、高剂量(112.5mg/ml)组。3个实验组在注射0.2ml磁流体后24h,分别在交变磁场作用下作用30min,光纤传感器测量肿瘤内部和肛门的温度,每周测量肿瘤体积,观察磁流体热疗后肿瘤体积的变化、瘤体的病理变化,对肿瘤生长影响。结果中、高剂量组的温度可以上升至有效治疗温度(>42℃),热疗后第21天,与对照组比较,中、高剂量组瘤体的增长受到明显的抑制(P<0.05),抑制效果与剂量呈剂量-效果依赖关系。组织学检查肿瘤细胞呈凋亡、坏死样改变。结论磁流体热疗可以明显诱导人肺癌A549凋亡、导致坏死,抑制肺癌裸鼠移植瘤的生长。

长爪沙鼠ATPase8,ATPase6,COX3基因的克隆及序列分析

目的对长爪沙鼠线粒体ATPase8,ATPase6,COX3基因全序列进行测定,并对其进行鉴定及进化分析。方法根据长爪沙鼠已知基因序列设计引物,采用PCR产物测序法,对目的片段进行测序鉴定。结合已公布啮齿类动物ATPase8,ATPase6,COX3基因序列,分析其碱基组成、遗传距离、并基于最小进化法和UPGMA法构建系统进化树。结果获得长爪沙鼠线粒体ATPase8,ATPase6,COX3基因全序列,其与家鼠、小家鼠和仓鼠均具有较高的同源性(76～98%);进化分析结果显示,长爪沙鼠与家鼠、黑家鼠和仓鼠遗传距离较近;碱基G的含量分别为6.9%,10.7%,15.2%,符合mtDNA的特点;A+T含量分别为68.2%,64.1%,59.2%,明显低于G+C含量,符合哺乳动物的特点。结论本研究为首次获得长爪沙鼠ATPase8,ATPase6,COX3基因全序列,长爪沙鼠与家鼠、黑家鼠和仓鼠具有较近遗传距离,本研究为长爪沙鼠进化研究、线粒体的结构和功能研究奠定基础。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在动物流行病学中的研究进展

葡萄球菌是动物中重要的机会性病原体,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)因其多药耐药的特征日益成为动物和公众健康的主要威胁。由于动物与动物及人畜间存在相互传染的风险,在控制MRSA感染的整个体系中,分析MRSA在动物中的流行显得尤为重要。