修复基因MTH1与OGG1在H_2O_2诱导的DNA氧化性损伤中的作用研究

背景与目的:利用H2O2作用于Ⅱ型人肺泡上皮细胞A549,分析8-羟基脱氧鸟苷(8-oxo-dG)的形成,探讨修复基因hMTH1与hOGG1在DNA氧化性损伤中的作用。材料与方法:在A549细胞培养液中分别加入终浓度为0、50、100、200和300μmol/L的H2O2孵育不同时间(0、6、12、18和24h)后,利用高压液相色谱串联电化学检测技术、核酸内切酶切割法及RT-PCR技术分析细胞8-oxo-dG水平、8-oxo-dG修复酶活性及hOGG1和hMTH1基因表达水平。结果:与对照组比较,100、200、300μmol/LH2O2浓度时均能使A549细胞DNA的8-oxo-dG水平增高(P<0.05或P<0.01)。200μmol/LH2O2作用12h后8-oxo-dG水平上升到峰值并在24h降至基线水平,8-oxo-dG水平在6～18h处理组显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。而8-oxo-dG修复酶活性在200μmol/LH2O2暴露后12～24h均高于对照组(P<0.05或P<0.01),在18h达到峰值。hOGG1及hMTH1mRNA的表达水平也因H2O2暴露而升高(P<0.05或P<0.01),但峰值在时间上交替出现。结论:H2O2能诱导8-oxo-dG修复酶活性增高,hOGG1及hMTH1在DNA氧化损伤的修复活动中呈现时间上的交替关系。

肉类烧烤等烹调师DNA氧化损伤监测研究

目的 研究不同种类烹调操作厨师外周血淋巴细胞DNA氧化损伤的作用。 方法 采用高效液相色谱系统结合电化学测定分析法对不同种类烹调操作厨师外周血淋巴细胞DNA中 8-OHdG的含量进行分析。 结果 ①外周血淋巴细胞DNA中的 8-OHdG水平显示 ,肉类烧烤师和煎炸烹调师分别为 ( 2 3 7± 10 3 )和 ( 19 2± 8 5 ) ,明显高于其他粤菜师的 ( 12 6± 5 2 ) (P <0 0 5 ) ;而其他粤菜师与一般服务员的 ( 11 5± 3 6)无显著差异 (P >0 0 5 ) ;②肉类烧烤师外周血淋巴细胞DNA中的 8-OHdG水平与其工龄有关 :③同岗位厨师DNA氧化损伤的效应个体差异较大。 结论 肉类烧烤师和煎炸烹调师的DNA氧化损伤水平高于一般人群 。

甲醛对人Ⅱ型肺泡上皮细胞DNA氧化和甲基化水平的影响

目的：分析甲醛染毒对体外培养的人Ⅱ型肺泡上皮细胞（A549）内8-羟基鸟嘌呤脱氧核苷（8-oxo-dG）水平、DNA 5-甲基胞嘧啶（5-mC）含量的影响及其时间-效应和剂量-效应关系，探讨甲醛所致的细胞DNA氧化与DNA甲基化的关联性。方法：用5～20μmol/L甲醛作用于A549细胞，用高压液相色谱串联电化学检测技术分析细胞DNA 8-oxo-dG水平，用免疫荧光和高效毛细管电泳法检测细胞全基因组DNA 5-mC含量改变。结果：甲醛染毒提高了细胞8-oxo-dG水平，但是降低了细胞的DNA 5-mC含量。甲醛致细胞DNA氧化与DNA甲基化呈现不同特点，A549细胞暴露于20μmol/L甲醛后，DNA氧化水平在1周甚至更早时间就已显著增高，而相同条件下DNA甲基化水平的改变需要6周以上的时间，DNA甲基化的改变滞后于DNA氧化。A549细胞经5～20μmol/L甲醛染毒8周后，DNA氧化水平与甲醛剂量呈正相关关系，而同样条件下DNA甲基化水平与甲醛剂量呈负相关关系。结论：甲醛染毒可提高DNA氧化水平，降低细胞DNA甲基化水平。在甲醛的毒作用效应中，细胞DNA氧化损伤可能是早于其DNA甲基化的一个重要分子事件。

DNA去甲基化与基因激活过程

目前认为DNA去甲基化有两种方式:一种是主动去甲基化,另外一种是与复制相关的DNA去甲基化。DNA甲基化对机体内的生命现象具有重要的作用,然而,我们对那些DNA已甲基化并有可能会形成兼性异染色体的基因,其如何由沉默状态转变为活性转录状态的过程还不清楚。最近在对拟南芥的研究中发现,DNA糖基化酶DME和ROS1参与了DNA去甲基化的过程。DME在胚乳中的基因组印记是必需的,而ROS1在植物性组织的基因以及转座子的DNA甲基化区域的剪切中起作用。这些发现为我们在分子层面上理解DNA去甲基化以及基因激活的机制提供了线索。本文中,我们对DNA去甲基化的方式、机制以及与基因激活的关系作一综述。

饮食业四类人群DNA氧化损伤尿8-羟基脱氧鸟苷水平分析

目的了解特定人群DNA氧化损伤情况,比较肉类烧烤师、煎炸烹调师、面点师和一般服务员尿中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平。方法用8-OHdG的酶联免疫试剂盒检测尿中8-OHdG水平,用苦味酸法测定尿中的肌酐,计算8-OHdG的肌酐校正值。结果肉类烧烤师、煎炸烹调师、面点师、一般服务员尿中8-OHdG水平分别为(16.24±3.56)ng/mgCr、(17.53±4.28)ng/mgCr、(11.65±2.45)ng/mgCr、(12.38±2.12)ng/mgCr。显示肉类烧烤师和煎炸烹调师的尿中8-OHdG水平高于面点师和一般服务员。且前二者的8-OHdG水平与其工龄有关。结论饮食业肉类烧烤师和煎炸烹调师尿中8-OHdG较高,应加强相应的职业防护。

利用生物标记oh8dG研究化学物质对DNA的氧化损伤与保护作用

利用ＨＰＬＣ（高效液相色谱）电化学检测法分析ＤＮＡ内８—羟基—２’—脱氧鸟苷（Ｏｈ８ｄＧ）的含量是一个定量分析ＤＮＡ氧化性损伤的有效方法。研究发现大鼠经口给予溴酸钾（ＫＢｒＯ３）能在其靶器官肾脏产生ｏｈ８ｄＧ；硫酸锂能有效保护大鼠肾ＤＮＡ免遭ＫＢｒＯ３的氧化损伤，未见保护作用有剂量—反应关系。

肉类烧烤作业对厨师末梢血淋巴细胞微核影响的观察

目的 了解肉类烧烤作业对厨师末梢血淋巴细胞微核率的影响。 方法 采用微量末梢血淋巴细胞微核检测法 ,对 80名肉类烧烤师及 5 0名服务员外周血淋巴细胞微核率进行测定。 结果 观察组肉类烧烤厨师末梢血淋巴细胞微核率高于对照组餐饮服务员 ,且与每日接触时间有关。 结论 肉类烧烤作业可能导致厨师末梢血淋巴细胞微核率升高。

不同健康教育方式对预防食物中毒知识、态度、行为的影响

目的 揭示不同健康教育方式对食品从业人员有关知识的知晓程度和有关卫生行为形成状况的影响 ,并试图找到最佳的预防食物中毒健康教育模式。方法 分别对 60 0名集体食堂厨师以教材授课法、声像材料法及综合教育法进行干预 ,比较分析不同方式的食物中毒预防控制效果 ,设置相同人数的平行对照组。结果 干预组人群卫生知识知晓率、认识态度正确率及卫生行为形成状况均有显著提高 ,以综合教育方式效果最为显著 ,而各对照组无显著差别。结论 提高有关知识知晓水平是改变不良行为的基础 ,3种干预方式均有作用 ,其中以综合教育方式效果最佳。

食品添加剂诱导8-羟基鸟嘌呤糖基酶的实验研究

目的 探讨食品添加剂KBrO3对哺乳类组织中 8 羟基鸟嘌呤糖基酶的氧化诱导作用。方法 比较用KBrO3处理大鼠后 ,其肾和肝中修复酶活性的变化规律。酶活性分析用高效液相色谱 电化学检测法。结果 腹膜下给予 80mg kg剂量KBrO3后 ,在肾脏发现酶活性在 3h时显著升高 ,而在 6h时 ,其活性达到高大值 (1 2 5± 0 14 )pmol,该值是 0h的 6倍。然后 ,活性开始下降并在 12h回到 0h水平 ;不加处理时 ,其活性只有 (0 2 0± 0 0 6 )pmol,而在 2 0、4 0、80及 16 0mg kgKBrO3腹膜下给予时 ,其活性分别是 (0 33± 0 0 9)、(0 5 3± 0 10 )、(0 75± 0 13)及 (1 30± 0 0 8)pmol,在 4 0mg kg以上时活性显著增高 ,且显示剂量反应关系。在肾中观察到该酶活性变化是时间与剂量依赖性的 ,而在肝中未发现这种变化。结论 哺乳类组织中 8 羟基鸟嘌呤糖基酶能被氧化诱导 ,提示DNA中氧化损伤的修复是机体在有氧环境中生存的重要过程。

肉类烧烤厨师免疫功能的调查分析

目的 了解肉类烧烤作业对厨师免疫功能的影响。方法 采用抗人T淋巴细胞亚群单克隆抗体APAAP桥联酶标法对 5 0名烧烤师及 30名面点师外周血T淋巴细胞亚群进行测定 ,同时应用单向免疫扩散法测定调查者血清抗体滴度。结果 肉类烧烤师外周血T淋巴细胞CD3+ 、CD4 + 细胞百分率明显低于对照组 (P <0 0 1) ,CD8+ 细胞百分率高于对照组 (P <0 0 1) ,CD4 + /CD8+ 比值低于对照组 (P <0 0 1)。肉类烧烤厨师血清IgG抗体滴度高于对照组 (P <0 0 1)。结论 肉类烧烤作业可能导致细胞免疫功能抑制、部分体液免疫功能增强。

中学生膳食行为干预研究

目的 :为增强中学生合理膳食、预防心血管疾病的意识 ,以减盐、控油为重点 ,探讨膳食干预措施的效果和可行性。方法 :在深圳某中学随机抽样 2 96人 ,将合理膳食的相关知识以讲座、宣传册及播放录像的形式进行干预。结果 :干预后提高了学生的合理膳食的知识水平 ,尤其是在减盐的控油的认识和行为上都有了明显的改变 ;在摄粗杂粮、水果、豆制品等膳食的频率方面也显示出较为合理的改变。结论

三氯乙烯对肝细胞代谢酶基因与凋亡基因表达的影响

目的:探讨三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)对人L02肝细胞代谢酶基因CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1和凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2 mRNA表达水平的影响。方法:以1%二甲亚砜(DMSO)为溶剂对照,用不同浓度TCE(0.25、0.5、1.0和2.0mmol/L)染毒L02肝细胞24h,另外用同一浓度1.0mmol/L TCE染毒细胞3～24h,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术检测L02肝细胞中CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1和凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2 mRNA的表达。结果:不同剂量TCE染毒后CYP1A2、CYP3A4、CYP2E1 mRNA表达明显上升,CYP1A2升高36%～726%,CYP3A4升高56%～525%,CYP2E1升高15%～94%,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);凋亡基因BAX、BAD、Bcl-2表达水平也明显升高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。用1.0mmol/L TCE染毒3～24h,同样发现肝代谢酶基因和凋亡基因表达增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:TCE可诱导L02肝细胞中代谢酶基因及凋亡基因表达变化,肝代谢酶基因和凋亡基因可能在TCE对肝细胞毒性效应中发挥重要作用。

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对大鼠睾丸和卵巢组织激素相关蛋白表达的影响

目的：探讨邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯（DEHP）对大鼠睾丸和卵巢组织激素相关蛋白表达水平的影响。方法：将80只5周龄SD大鼠,雌雄各半,随机分为对照组（玉米油）、DEHP低剂量组（100 mg/kg）、DEHP中剂量组（500 mg/kg）、DEHP高剂量组（1 500mg/kg）,每组雌雄各10只,每周染毒5 d,每天灌胃染毒1次,连续6周。末次染毒24 h后处死动物,提取睾丸或卵巢组织蛋白,应用Western blot分别检测睾丸组织中3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）、促性腺激素释放激素受体（Gn RHR）、卵泡刺激素受体（FSHR）及卵巢组织中黄体生成素受体（LHR）和Gn RHR的蛋白表达水平。结果：与对照组比较,雄鼠睾丸组织在DEHP 500和1 500 mg/kg剂量时3β-HSD蛋白表达水平均显著升高（P均〈0.01）;Gn RHR蛋白表达水平在1 500 mg/kg剂量组显著下降（P均〈0.01）;FSHR蛋白表达水平在500和1 500 mg/kg组显著下降（P〈0.05或P〈0.01）。雌鼠卵巢组织在DEHP 100 mg/kg剂量组时LHR和Gn RHR蛋白表达水平与对照组比较差异均无统计学意义（P〉0.05）,在DEHP 500和1 500 mg/kg剂量组LHR表达水平比对照组下降25%~35%,Gn RHR下降60%~80%（P〈0.05或P〈0.01）。结论：DEHP染毒可引起大鼠睾丸和卵巢组织激素相关蛋白表达水平的改变,干扰大鼠体内性激素的代谢,推测此作用与DEHP的生殖毒性存在密切关系。