库容性Ca^(2+)内流介导大鼠远端结肠平滑肌收缩

目的探讨库容性Ca2+内流(capac itative Ca2+entry,CCE)是否参与大鼠远端结肠平滑肌兴奋-收缩偶联过程。方法利用器官离体装置、张力换能器、Powerlab 4/25T数据采集分析系统测定远端结肠平滑肌的张力。结果毒胡萝卜素(thapsigargin,TG,10 nmol.L-1~1μmol.L-1)诱导结肠平滑肌条产生持续的张力性收缩,不同浓度TG所致的同步收缩反应张力不同。在无钙Krebs液(包含1 mmol.L-1EDTA)中使用TG将肌条培养35 m in后,再加入Ca2+2.5mmol.L-1,比未使用TG处理的肌条产生的收缩张力明显提高(99%±28%vs70%±8%)。且TG耗竭胞内钙库后再复钙所致的收缩效应,不受L型钙通道阻断剂verapam il影响,但可被SOC通道阻断剂La3+减弱。结论TG耗竭胞内钙库后再复钙诱导的大鼠远端结肠平滑肌收缩反应由CCE介导,提示CCE是提供大鼠远端结肠平滑肌收缩的激活信号Ca2+的来源之一,参与完成结肠平滑肌兴奋-收缩偶联过程。

银杏叶提取物对大鼠冷应激引起的胃肠动力紊乱及NO含量变化的影响

目的探讨银杏叶提取物对冷束缚应激引起的胃肠动力紊乱及NO含量变化的影响。方法采用冷束缚应激的方法建立肠功能紊乱模型,应用葡聚糖蓝2000(DB2000)作为染料观察EGb和冷束缚应激状态对胃排空率、小肠推进率的影响,并利用比色法观察大鼠胃肠组织、血浆中NO含量的变化。结果冷束缚应激可抑制大鼠胃排空速度(P<0.05)及小肠推进率(P<0.01),EGb干预可明显拮抗冷束缚应激引起的胃排空速度及小肠推进率降低(P<0.05);EGb可以降低冷束缚应激引起的血浆中NO含量的升高(P<0.01)。结论EGb对冷束缚应激所诱发的肠道功能紊乱具有正向调解作用,NO可能在这一过程中发挥了作用。

铃蟾肽、P物质受体脱敏对迟慢兴奋性突触后电位的影响

目的 :探讨豚鼠肠系膜下神经节 (IMG)细胞铃蟾肽 (bombesin ,Bom)、P物质 (substanceP ,SP)受体间相互作用及对迟慢兴奋性突触后电位 (ls EPSP)的影响。方法 :离体细胞内记录 ,并观察细胞的去极化、ls EPSP的时程、幅度。结果 :SP受体脱敏可使SP敏感细胞的ls EPSP阻抑 ,但对Bom去极化无影响 ;Bom受体脱敏可使Bom敏感细胞的ls EPSP阻抑 ,但对SP受体去极化无影响。结论 :Bom、SP可通过各自的突触后膜受体形成ls EPSP ,无交互脱敏现象。

银杏叶提取物对豚鼠肠系膜下神经节细胞生物电的影响

目的 :通过观察银杏叶提取物 (EGb)对交感神经节细胞生物电的影响 ,为进一步探讨EGb调节肠系膜下神经节 (IMG)支配的包括远端结肠在内的内脏功能活动的作用机制提供依据。方法 :采用细胞内生物电记录技术记录体外IMG电位。结果 :在敏感细胞 ,EGb76 1(35～ 35 0mg/L)可使 71.0 %的肠系膜下神经节细胞产生膜去极化反应 ,且在一定范围内呈现剂量效应关系 ;19.4 %的细胞超极化 ;9.7%的细胞出现先超极化后去极化的双相反应。去极化反应的细胞其膜电阻有降低、增大和不变等多种表现。此去极化反应可被低钙 高镁克氏液部分阻断 ,但不为胆碱和肾上腺素受体阻断剂所阻断。还发现EGb76 1可抑制外源性 5 HT引起的去极化电位。结论 :EGb76 1对IMG细胞可能通过非胆碱能、非肾上腺素能通路产生易化作用 ;

5-羟色胺和环磷酸腺苷对睡眠的影响

目的研究杏仁核中５羟色胺（５ＨＴ）和环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）对大鼠睡眠的影响。方法多导睡眠描记和杏仁核微量注射。结果５ＨＴ前体５羟色氨酸（５ＨＴＰ）引起慢波睡眠、快波睡眠和总睡眠时间增多，入睡潜伏期缩短；５羟色胺受体阻断剂二甲麦角新碱（ＭＳ）对睡眠无直接影响，但可完全阻断５ＨＴＰ的促睡眠效应；ｃＡＭＰ可引起慢波睡眠和总睡眠时间延长，入睡潜伏期缩短。结论杏仁核参与睡眠觉醒调节，杏仁核中５ＨＴ和ｃＡＭＰ有明显的促睡眠效应。

基底外侧杏仁核对睡眠-觉醒的调节作用

采用多道睡眠描记方法，观察了基底外侧杏仁核（BLN）在睡眠-觉醒调节中的作用。结果发现，电损毁双侧BLN引起慢波睡眠（SWS）和快波睡眠（PS）增加，觉醒（W）减少；在双侧BLN内注射选择性损毁神经元胞体剂量的红藻氨酸（KA）引起双相效应，注射KA后第1天出现失眠，自第3天开始，SWS增多，W减少，但PS无显著变化。一侧BLN内注射一氧化氮（NO）供体硝普钠可使W增加，SWS减少，而一氧化氮合酶（NOS）抑制剂L-硝基精氨酸（L-NNA）则引起SWS增多，W减少和睡眠加深；NO前体L-精氨酸（L-arg）对睡眠无直接影响，但可完全对抗L-NNA的促睡眠效应。结果提示，BLN是调节睡眠-觉醒的重要核团，损毁BLN可引起慢波睡眠增多，NO可通过兴奋BLN中神经元胞体而发挥促进觉醒和抑制慢波睡眠效应。

一般人群睡眠质量和自测健康关系的初步研究

目的 了解一般人群的睡眠质量特点及自测健康状况并探讨睡眠质量和自测健康的关系。方法 采用匹兹堡睡眠质量指数量表 (PSQI)、自测健康评定量表 (SRHMS)评定某市睡眠日咨询活动现场的一般人群 (2 0 1例 )睡眠质量、自测健康状况及相互关系。结果 PSQI测评结果显示一般人群中 43 .8% (n =88)的人总分 >7分 ,存在睡眠质量问题 ;56 .2 % (n =1 1 3)的人总分≤ 7分 ,睡眠质量较好 ,两组间PSQI各因子得分、总分均有显著性差异 (P <0 .0 5) ;SRHMS测评结果显示存在睡眠质量问题组与无睡眠质量问题组在身体症状和器官功能、心理症状与负向情绪、角色活动、社会资源与社会接触、生理、心理、社会子量表、健康总量表得分具有显著性差异 (P <0 .0 5)。相关分析显示睡眠质量、睡眠时间、睡眠效率与SRHMS中的身体症状与器官功能、生理健康子量表和总量表得分呈显著性负相关 (P <0 .0 1 ) ,安眠药物同身体症状与器官功能、角色活动得分呈显著性负相关 (P <0 .0 1 )。结论 睡眠质量对一般人群健康状况具有重要影响 ,广泛开展睡眠保健知识的健康教育 。

白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用和机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用及其机制。方法♂SD大鼠60只,随机分为假手术组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)、白藜芦醇预处理组(Res+I/R),每组20只。采用线栓法阻断大脑中动脉血供90 min,拔出栓线造成局部脑区缺血/再灌注损伤。Res+I/R组缺血前1 h腹腔注射白藜芦醇(30 mg·kg-1)。缺血/再灌注后第5天,TUNEL法原位标记海马CA1区凋亡的神经元细胞,免疫组化法检测海马CA1区PI3K、p-Akt及Caspase-3的表达。结果 TUNEL染色结果显示,与I/R组相比较,白藜芦醇预处理明显减少脑缺血/再灌注损伤所引起的大鼠海马CA1区神经元凋亡(P<0.05);免疫组织化学结果显示,与I/R组相比,白藜芦醇预处理使海马CA1区PI3K、p-Akt表达明显增多(P<0.05),Caspase-3表达明显减少(P<0.05)。结论缺血前1 h白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡具有保护作用,其主要作用机制可能是通过激活PI3K-Akt信号通路进而抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的表达有关。

库容性Ca^(2+)内流参与ACh诱导的大鼠远端结肠平滑肌收缩

应用生物换能技术和Ca2+通道特异性阻断剂观察并记录大鼠离体远端结肠平滑肌收缩张力的变化,分析库容性 Ca2+内流(capacitative Ca2+ entry,CCE)是否与ACh诱导的离体远端结肠平滑肌收缩反应有关。结果表明,以无钙的Krebs 液灌流或应用EGTA螯合细胞外Ca2+后,高K+及ACh引起的远端结肠平滑肌收缩几乎完全消失。电压操纵性Ca2+通道阻断剂veiapamil也能减弱高K+及ACh引起的远端结肠平滑肌收缩,其减弱的程度分别为74％和41％。在无钙的Krebs液中, 5 μmol／L ACh可引起离体肠管瞬时性收缩,这是由肌质网(sarcoplasmic reticulum,SR)释放钙所致;然后加入10 μmol／L阿托品(atropine),并在此基础上恢复细胞外Ca2+(2．5 mmol／L),结肠平滑肌则出现持续性收缩,待收缩反应达峰值时,加入5μmol／L verapamil,收缩无明显变化,且该收缩反应对钙库操纵性通道(store-operated Ca2+ channel,SOCC)阻断剂La3+ 敏感,20,50和100 μmol／L的La3+使上述收缩张力分别降低15％,23％和36％,且呈浓度依赖性,但对Cd2+不敏感。研究结果提示,细胞外Ca2+内流对高K+及ACh介导的离体远端结肠平滑肌持续性收缩是必需的,由ACh诱导的远端结肠平滑肌收缩至少包括SR释放钙引起的短暂性收缩及受体操纵性Ca2+通道(receptor-operated Ca2+ channel,ROCC)、电压操纵性Ca2+通道(voltage-operated Ca2+ channel,VOCC)和CCE介导的胞外Ca2+内流等途径。这将从通道水平进一步分析消化管平滑肌收缩的机制和特征,亦将为预防和控制因胃肠动力紊乱所致的消化管疾病寻求有针对性的药物干预和治疗提供理论依据。

特异性神经元抗体对神经系统副肿瘤综合征筛检价值的研究

目的 探讨特异性神经元抗体 (尤其是抗 Hu抗体 )对国内人群神经系统副肿瘤综合征 (paraneoplasticsyndromesofnervoussystem ,PNSNS)筛检诊断的特异性和灵敏性。方法 采用免疫组织化学ABC法和Westernblot对 2 0例PNSNS和 12 0例非PNSNS患者的血清进行检测 ,并采用流行病学筛检公式计算出特异度和灵敏度。结果 PNSNS组和非PNSNS组ABC法阳性结果差异有统计学意义 (χ2 =33 4 5 ,P <0 0 1) ,特异性神经元抗体筛检诊断PNSNS的灵敏度为 95 % ,特异度为 72 5 % ;PNSNS组和非PNSNS组Westernblot法阳性率差异有统计学意义 (χ2 =117 12 ,P <0 0 1) ,抗 Hu抗体筛检诊断的PNSNS的灵敏度为 95 % ,特异度为 98 3%。结论 血清特异性神经元抗体 (尤其是抗 Hu抗体 )是国内人群中PNSNS患者较敏感和特异性的血清标志物 。

银杏叶总黄酮对糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用

目的探讨银杏叶总黄酮(FG)对糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法利用链脲佐菌素(STZ)制备实验性糖尿病大鼠心肌损伤模型,并采用分光光度法和电镜测微技术分别观察了不同剂量的FG对糖尿病大鼠心肌组织丙二醛(MDA)、肌酸激酶(CK)、一氧化氮(NO)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)的活性的影响以及心肌超微结构的改变。结果100、200mg/(kg·d)的FG可明显抑制心肌MDA含量升高及CK含量的降低;50、100、200mg/(kg·d)的FG可提高心肌SOD活力,也可显著抑制心肌NO含量的降低及NOS活性的下降,其中200mg/(kg·d)的FG还可提高心肌LDH活力。电镜下观察:糖尿病大鼠心肌损伤主要表现为心肌纤维水肿或断裂,肌小节失去正常结构,部分横纹消失,线粒体肿胀;200mg/(kg·d)的FG可明显逆转心肌损伤。结论FG对糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用,可能与抑制心肌组织氧化应激、抗自由基损伤、防止NO的降低及减轻心肌组织损伤等过程有关。

杏仁核中一氧化氮对睡眠-觉醒的影响

目的研究杏仁核中一氧化氮（ＮＯ）对大鼠睡眠觉醒的影响，并分析其作用机制。方法多导睡眠描记和杏仁核微量注射。结果一氧化氮合酶抑制剂Ｌ硝基精氨酸（ＬＮＮＡ）可增加慢波睡眠（ＳＷＳ）和减少觉醒（Ｗ），而一氧化氮（ＮＯ）供体硝普钠（ＳＮＰ）可增加Ｗ、减少ＳＷＳ，并可对抗ＬＮＮＡ的促睡眠效应；ＮＯ前体Ｌ精氨酸（ＬＡｒｇ）对睡眠觉醒无直接影响，但可对抗ＬＮＮＡ的促睡眠效应。环磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）具有明显的增加Ｗ和减少ＳＷＳ效应，而鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝（ＭＢ）增加睡眠、减少觉醒，并可阻断ＳＮＰ的促睡眠效应。结论杏仁核参与睡眠觉醒调节，杏仁核中ＮＯ具有促进Ｗ、抑制ＳＷＳ效应，这一作用是通过激活鸟苷酸环化酶使ｃＧＭＰ增多实现的。

杏仁核微量注射cGMP和亚甲蓝对大鼠睡眠和觉醒的影响

目的观察杏仁核内微量注射鸟磷酸腺苷（ｃＧＭＰ）和亚甲蓝（ＭＢ）对大鼠睡眠和觉醒的影响。方法多导睡眠描记（ＰＳＧ）。结果ｃＧＭＰ可使觉醒增多，慢波睡眠和总睡眠时间减少，浅慢波睡眠潜伏期延长；鸟苷酸环化酶抑制剂ＭＢ除对睡眠潜伏期无显著影响外，其余作用与ｃＧＭＰ相反。结论内外源性ｃＧＭＰ在杏仁核中均具有显著的促进觉醒和抑制睡眠效应，杏仁核参与了睡眠—觉醒周期的调节。

杏仁核微量注射谷氨酸和海人酸对大鼠睡眠—觉醒的影响

目的研究杏仁核在睡眠—觉醒调节中的作用。方法多导睡眠描记术（ＰＳＧ）和杏仁核微量注射。结果Ｌ－谷氨酸引起觉醒（Ｗ）增多、慢波睡眠（ＳＷＳ）和总睡眠时间（ＴＳＴ）减少；注射海人酸后第１天引起失眠，第３天后Ｗ减少，ＳＷＳ和ＴＳＴ增多，而快波睡眠无显著变化。结论兴奋杏仁核神经元胞体可引起睡眠抑制，而损毁杏仁核神经元胞体则引起ＳＷＳ增多。

银杏叶提取物对结肠运动的影响机制

目的 探讨银杏叶提取物 (EGb)对豚鼠离体结肠运动的影响及其机制。方法 制备豚鼠离体结肠肠段标本 ,通过灌流给药的方法观察不同浓度EGb、银杏黄酮等对离体结肠收缩活动的影响。结果 EGb (0 5～ 5 0 0mg/L)可对结肠自主活动产生抑制和兴奋两种不同的影响 ,其中以抑制作用为主。EGb也可部分拮抗由ACh、5 HT引起的结肠运动的增强效应 ;并协同血管活性肠肽 (VIP)、无钙Kreb液灌流引起的抑制作用 ;对γ 氨基丁酸、肾上腺素引起的结肠运动抑制效应无显著影响 ;用M受体阻断剂阿托品预处理可部分阻断EGb对结肠自主活动的影响。银杏黄酮 (0 0 1～ 0 1mg/L)可使豚鼠离体结肠运动抑制 ,且表现一定的剂量依赖性。结论 EGb对豚鼠结肠运动的影响可能是通过影响 5 HT、ACh、VIP等肠神经系统递质的释放 ,经M受体介导以及对平滑肌的直接作用等多种途径实现的。银杏黄酮可能是EGb发挥抑制作用的有效部位。

特异性神经元抗体对小细胞肺癌早期诊断价值的初步研究

目的 探讨特异性神经元抗体 (SNA)对小细胞肺癌(SCLC)早期诊断的价值。方法 采用亲合免疫细胞组织化学ABC法对 90例高度怀疑为SCLC的患者血清进行检测 ,再用细胞学及病理学检查结果对上述病例进行分类 ,并分析二者间相互关系及其临床意义。结果 在 90例可疑患者中 ,34例患者血清与正常人大脑冰冻切片中所有神经元细胞核形成均匀染色 ,血清SNA阳性 ;5 6例患者血清与神经元细胞核无染色 ,血清SNA阴性。 72例患者为SCLC ,且全部为局限期 ,其中 31例 (43% )患者血清SNA阳性 ;18例患者为非SCLC ,其中 3例 (17% )患者血清SNA阳性 ;SCLC组SNA阳性率同非SCLC组阳性率差异有统计学意义 (χ2 =4 2 7,P <0 0 5 )。正常对照组血清无染色 ,全部为阴性。

铃蟾肽介导的豚鼠肠系膜下神经节非胆碱能迟慢兴奋性突触后电位

应用细胞内记录技术,对铃蟾肽(bombesin,BOM)在豚鼠离体肠系膜下神经节(inferior mesenteric ganglion,IMG)非胆碱能兴奋性突触传递中的作用进行了研究。重复电刺激突触前结肠神经,有74.3％(52/70)IMG细胞可诱发迟慢兴奋性突触后电位(ls-EPSP)。在可引出ls-EPSP的细胞中,22％(4/18)细胞同时对BOM和SP敏感。用BOM持续灌流IMG,可明显抑制对BOM敏感细胞的ls-EPSP,对BOM不敏感细胞的ls-EPSP则无影响,且BOM受体与SP受体间无交叉脱敏。BOM受体阻断剂tyT^4[D-phe^(12)]bombesin能明显可逆性地抑制BOM敏感细胞的ls-EPSP和去极化,但对BOM不敏感细胞则无影响。研究结果提示,BOM可能是介导豚鼠IMG细胞ls-EPSP的一种递质。

大鼠结肠平滑肌细胞的钙库操纵性通道

目的:探讨大鼠结肠平滑肌细胞是否存在钙库操纵性通道(SOC)。方法:荧光探针Fura-2/AM标记细胞内游离Ca2+后,用荧光分光光度计检测毒胡萝卜素(thapsigargin)和咖啡因(caffeine)耗竭胞内钙库后激活的SOC通道对酶解分离的大鼠结肠平滑肌细胞[Ca2+]i的影响。结果:在无Ca2+缓冲液中,thapsigargin(1μmol/L)以及caf-feine(10 mmol/L)分别使[Ca2+]i由静息时(68.32±3.43)nmol/L升高至(240.85±12.65)nmol/L(、481.25±34.77)nmol/L,继之,向细胞外液中引入两种浓度的Ca2+(1.5 mmol/L和3.0 mmol/L),导致[Ca2+]i进一步升高,分别为(457.55±19.80)nmol/L、(1005.93±54.62)nmol/L;(643.88±34.65)nmol/L、(920.16±43.25)nmol/L。且上述升高效应对维拉帕米(verapamil,5μmol/L)以及KCl引起的细胞膜去极化不敏感,但可被La3+(1 mmol/L)抑制。结论:在酶解分离的大鼠结肠平滑肌细胞上,存在胞内钙库耗竭激活的SOC通道,为支持在电兴奋性细胞上存在库容性Ca2+内流提供了实验和理论依据。

PBL教学法在生理学实验教学中的应用探讨

以问题为中心的学习(problem-based learning,PBL)是一种以学生为中心的教学方法,有利于学生学习能力、创新能力和实践能力的培养,在医学教育改革中越来越多地被使用。将PBL教学法应用到生理学实验课教学中,可以克服传统教学方式的一些缺点,既增加了学生的学习兴趣,提高了学习效率,又培养了学生多方面的能力,取得了理想的效果。同时探讨PBL教学法应用于生理学实验课的意义和需解决的问题。