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医学生新时代医疗卫生职业精神培养——以江苏省血吸虫病防治研究所为例
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作者 柯雪丹 周雯迪 +1 位作者 王玠 卞荷娟 《教育教学论坛》 2024年第21期165-168,共4页
新时代医疗卫生职业精神的培养与弘扬,关系到医疗行业的高质量发展和健康中国的建设。医学生作为医务工作者的后备力量,从学生时期就接受思想政治教育和实践教育的有机结合教育。切实加强职业精神培养和提高职业道德素质,具有重要的现... 新时代医疗卫生职业精神的培养与弘扬,关系到医疗行业的高质量发展和健康中国的建设。医学生作为医务工作者的后备力量,从学生时期就接受思想政治教育和实践教育的有机结合教育。切实加强职业精神培养和提高职业道德素质,具有重要的现实意义。江苏省血吸虫病防治研究所发挥卫生事业科研院所特色,深化医学生的思想政治教育,开展实践教育,加强新时代医疗卫生职业精神培养,为医学院校落实立德树人根本任务提供借鉴思路。 展开更多
关键词 医学生 新时代医疗卫生职业精神 思想政治 实践教育
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血防所2002—2015对外援助国际培训项目回顾与设想 被引量:2
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作者 王玠 柯雪丹 +5 位作者 周雯迪 罗恩培 谢铮 颜维安 曹俊 羊海涛 《中国社会医学杂志》 2017年第3期226-228,共3页
近年来,江苏省对血吸虫病防治研究所对外援助国际培训项目数量与规模不断扩大,培训的国外学员不断增加,其在国家对外关系中的作用也日益明显。通过回顾办班情况,重点分析了援非培训项目在实施中存在的不足之处,包括招生工作、教学内容... 近年来,江苏省对血吸虫病防治研究所对外援助国际培训项目数量与规模不断扩大,培训的国外学员不断增加,其在国家对外关系中的作用也日益明显。通过回顾办班情况,重点分析了援非培训项目在实施中存在的不足之处,包括招生工作、教学内容、团队宣传、后期回访与效果评估、学历教育等方面的问题,为加强援外培训管理与提升援外培训效果,提出了未来项目管理的设想和建议。 展开更多
关键词 援非培训 办班回顾 项目管理
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日本血吸虫核糖核酸酶T2的表达及其功能分析
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作者 柯雪丹 余传信 +9 位作者 宋丽君 菊池三惠子 平山谦二 王玠 殷旭仁 金一 沈双 姚媛 高玒 高琪 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第12期1082-1088,1092,共8页
目的制备重组日本血吸虫核糖核酸酶T2蛋白(rSj RNase T2),并分析其生物学功能。方法根据编码RNase T2开放阅读的基因序列设计、合成一对5′端带有酶切位点的引物。采用PCR方法从质粒CP1412/PEU-GST中扩增编码RNase T2蛋白成熟肽的基因片... 目的制备重组日本血吸虫核糖核酸酶T2蛋白(rSj RNase T2),并分析其生物学功能。方法根据编码RNase T2开放阅读的基因序列设计、合成一对5′端带有酶切位点的引物。采用PCR方法从质粒CP1412/PEU-GST中扩增编码RNase T2蛋白成熟肽的基因片段,亚克隆到表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a。将重组表达质粒转化到E.coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用镍螯合亲和层析胶在变性条件下纯化rSj RNase T2蛋白。纯化蛋白通过尿素浓度梯度透析的方法进行复性,制备可溶性rSj RNase T2。以酵母RNA为底物进行消化,采用琼脂糖凝胶电泳的方法检测rSj RNase T2酶活性。用纯化的rSj RNase T2免疫小鼠,采用酶联免疫法(ELISA)检测小鼠血清特异抗体水平,观察其抗原性;采用检测Western blot抗rSj RNase T2抗体IgG与成虫可溶性虫抗原、成虫外分泌抗原、虫卵可溶性抗原和虫卵外分泌抗原的反应性,并观察Sj RNase T2在虫体中的分布。以rSj RNase T2刺激巨噬细胞RAW264.7,通过流式分析观察RAW264.7细胞表面标志物CD16/32、CD206表达水平的变化,采用RT-PCR检测RAW264.7细胞内诱导型一氧化氮合酶与精氨酸酶基因mRNA的表达水平,采用ELISA检测RAW264.7细胞培养上清液中IL-12及IL-10水平的变化,以观察Sj RNase T2的免疫调节功能。结果重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a构建成功,经IPTG诱导,能表达重组Sj RNase T2蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,经过复性能获得部分可溶性蛋白。rSj RNase T2具有酶活性,能够水解酵母RNA。ELISA检测rSj RNase T2免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1︰200 000,该抗血清能识别来源于血吸虫虫卵及虫卵外分泌抗原中的天然RNase T2。rSj RNase T2可诱导巨噬细胞向M2型方向转化,表达高水平的IL-10、精氨酸酶及CD206表面分子。结论 rSj RNase T2表达成功。该蛋白具有天然的酶学特性和抗原性,能调节巨噬细胞向M2型方向分化。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 核糖核酸酶T2 表达 功能分析 免疫调节
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检测华支睾吸虫特异性IgG4生物素-亲和素复合酶联免疫吸附法的建立及检测效能分析 被引量:4
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作者 王玠 宋丽君 +6 位作者 余传信 沈双 许永良 殷旭仁 柯雪丹 高玒 刘茜 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期156-161,共6页
目的探讨亲和素-生物素复合酶联免疫吸附法(ABC-ELISA)检测特异性Ig G4抗体用于诊断华支睾吸虫病的效果。方法建立检测华支睾吸虫特异性抗体Ig G4的ABC-ELISA法(Ig G4-ABC-ELISA),以此方法检测华支睾吸虫病、日本血吸虫病、卫氏并殖吸... 目的探讨亲和素-生物素复合酶联免疫吸附法(ABC-ELISA)检测特异性Ig G4抗体用于诊断华支睾吸虫病的效果。方法建立检测华支睾吸虫特异性抗体Ig G4的ABC-ELISA法(Ig G4-ABC-ELISA),以此方法检测华支睾吸虫病、日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病、弓形虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病和曼氏裂头蚴病患者血清样本。以Ig G4-ELISA和Ig GELISA法为对照,比较3种方法用于诊断华支睾吸虫病的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及诊断效率。结果成功建立了用于检测华支睾吸虫特异性抗体的Ig G4-ABC-ELISA法,用此方法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体Ig G4的敏感性为90.0%,特异性为98.2%,阳性预测值为93.8%,阴性预测值为97.0%,诊断效率为96.3%;Ig G4-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体敏感性为86.0%,特异性为98.2%,阳性预测值为93.5%,阴性预测值为95.9%,诊断效率为95.4%;Ig G-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体Ig G的敏感性为94.0%,特异性为88.1%,阳性预测值为70.1%,阴性预测值为98.0%,诊断效率为89.4%。Ig G4-ABC-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体的敏感性高于Ig G4-ELISA法(P<0.05),特异性高于Ig G-ELISA法(P<0.05)。结论 Ig G4-ABC-ELISA法检测华支睾吸虫特异性抗体IgG4具有高度敏感性与特异性,在华支睾吸虫病诊断中具有较好应用价值。 展开更多
关键词 华支睾吸虫 亲和素-生物素 酶联免疫吸附法 IGG4 IgG 诊断
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抗日本血吸虫14-3-3蛋白单克隆抗体5C6抗原识别表位的鉴定 被引量:4
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作者 钱春艳 宋丽君 +5 位作者 余传信 殷旭仁 王玠 张伟 金一 柯雪丹 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2012年第1期45-49,共5页
目的采用噬菌体展示肽技术鉴定抗日本血吸虫14-3-3蛋白单克隆抗体5C6的抗原识别表位。方法将纯化的抗日本血吸虫14-3-3蛋白单克隆抗体5C6作为固相配基筛选噬菌体随机展示12肽库,按照吸附-洗脱-扩增的淘洗过程进行3轮生物淘洗,富集特异... 目的采用噬菌体展示肽技术鉴定抗日本血吸虫14-3-3蛋白单克隆抗体5C6的抗原识别表位。方法将纯化的抗日本血吸虫14-3-3蛋白单克隆抗体5C6作为固相配基筛选噬菌体随机展示12肽库,按照吸附-洗脱-扩增的淘洗过程进行3轮生物淘洗,富集特异性结合的噬菌体颗粒。随机挑取第3轮洗脱的独立噬菌体克隆,分别依次进行噬菌体扩增、基因组DNA抽提和DNA序列分析。选择外源性插入DNA序列完全相同或高度相似的同源性噬菌体,采用ELISA及免疫印迹分析对其免疫反应性作进一步鉴定,以确定单克隆抗体5C6的抗原识别表位。结果第3轮淘洗物中33个独立噬菌体克隆的DNA测序结果显示,其中25个噬菌体编码外源性插入肽的核酸序列均为5′-CCACCTAGTAGCAGACCGATTCT-CAGTCGAAGGAAA-3′,其对应的演绎氨基酸序列为PPSSRPILSRRK,该肽与日本血吸虫信号蛋白14-3-3及自然界其他已知蛋白的氨基酸序列均无同源性。免疫印迹试验证实此短肽可被自然感染的日本血吸虫病人血清所识别,而不与健康人血清反应。结论本研究成功鉴定了抗日本血吸虫14-3-3蛋白单克隆抗体5C6所识别的模拟抗原表位,并证明该表位为空间构像表位。 展开更多
关键词 日本血吸虫 信号传导蛋白14-3-3 单克隆抗体 噬菌体随机展示肽库 模拟表位 生物淘洗
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酿酒酵母表达Sj23HD-HSA融合蛋白与免疫反应性分析 被引量:5
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作者 张伟 余传信 +6 位作者 杨建良 冯炜 殷旭仁 宋丽君 王玠 钱春艳 柯雪丹 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期653-658,共6页
目的采用酵母表达技术制备日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)与人血清白蛋白(HSA)成熟肽的融合蛋白(Sj23HD-HSA),并分析其免疫反应性。方法应用重叠PCR方法构建编码Sj23HD-HSA融合蛋白的融合基因片段,通过TA克隆和... 目的采用酵母表达技术制备日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)与人血清白蛋白(HSA)成熟肽的融合蛋白(Sj23HD-HSA),并分析其免疫反应性。方法应用重叠PCR方法构建编码Sj23HD-HSA融合蛋白的融合基因片段,通过TA克隆和DNA测序确定构建的融合蛋白基因序列的正确性。将融合基因定向插入酵母表达质粒pWX530中构建分泌型重组表达载体Sj23HD-HSA/pWX530。重组质粒转化酿酒酵母感受态细胞,在亮氨酸营养缺陷型培养基上筛选含重组质粒的酵母转化子菌落。对转化子酵母进行发酵培养,通过SDSPAGE分析酵母培养液上清中的蛋白成分,离子交换层析纯化培养上清中的Sj23HD-HSA蛋白成分。经免疫印迹分别与血吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清反应,确定酵母表达的Sj23HD-HSA融合蛋白的免疫反应性。结果 DNA序列分析显示,编码外分泌型Sj23HD-HSA融合蛋白的融合基因构建成功。含有Sj23HD-HSA/pWX530重组表达质粒的酵母转化子可以在非诱导条件下表达外分泌型可溶性的Sj23HD-HSA融合蛋白,其分子量大小与预期大小(73kDa)相近。免疫印迹分析结果显示,Sj23HD-HSA融合蛋白可以特异性地被血吸虫病人血清所识别,但与华支睾吸虫病人血清、健康人血清不发生反应。结论 Sj23HD-HSA融合蛋白被成功制备,并具有良好的特异性和免疫反应性,是一种有潜在价值的血吸虫病免疫诊断抗原。 展开更多
关键词 日本血吸虫 Sj23HD-HSA融合蛋白 酵母表达 免疫反应性
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质谱技术鉴定日本血吸虫可溶性虫卵抗原具有早期诊断价值的蛋白分子 被引量:4
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作者 王玠 宋丽君 +7 位作者 何伟 殷旭仁 钱春艳 张伟 许永良 曹国群 柯雪丹 余传信 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2012年第2期132-136,共5页
目的采用二维电泳、免疫印迹法和质谱技术鉴定日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)成分中具有早期诊断价值的抗原分子。方法通过等电聚焦以及十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳对SEA进行二维电泳,将胶上蛋白质斑点转移到硝酸纤维素膜上,再分... 目的采用二维电泳、免疫印迹法和质谱技术鉴定日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)成分中具有早期诊断价值的抗原分子。方法通过等电聚焦以及十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳对SEA进行二维电泳,将胶上蛋白质斑点转移到硝酸纤维素膜上,再分别与日本血吸虫感染前、后不同时间点的小鼠血清反应,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG作为二抗,进行免疫印迹试验,寻找SEA中能与血吸虫感染早期血清反应的蛋白斑点。通过高效液相色谱串联质谱(LC MS/MS)分析鉴定其蛋白成分。结果对血吸虫感染1、2、6周以及未感染健康小鼠血清识别SEA的二维电泳免疫印迹图谱进行匹配分析发现,SEA中有2个蛋白斑点能被血吸虫感染后1、2、6周小鼠血清识别,另有3个蛋白斑点仅被血吸虫感染后6周小鼠血清识别。经LC MS/MS鉴定,2个被血吸虫感染早期血清识别的SEA蛋白分子分别为热休克蛋白(HSP70)和葡萄糖调节蛋白(Grp78/Bip)。结论 SEA中HSP70和Grp78/Bip可能具有血吸虫感染早期诊断价值。 展开更多
关键词 日本血吸虫 可溶性虫卵抗原 早期诊断分子 免疫印迹法 二维电泳 质谱
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应用免疫蛋白质组学方法鉴定弓形虫病诊断抗原分子的研究 被引量:3
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作者 沈双 肖迪 +10 位作者 宋丽君 余传信 张建中 殷旭仁 高玒 王玠 柯雪丹 许永良 杨静 唐凤 仝德胜 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第2期152-158,164,共8页
目的鉴定对弓形虫感染具有潜在诊断价值的弓形虫抗原分子。方法制备刚地弓形虫RH株速殖子全虫可溶性蛋白及弓形虫感染小鼠腹腔蛋白,经SDS-PAGE分离后采用半干电转移方法将其转移到硝酸纤维素膜上,再分别与22份弓形虫感染者血清进行Weste... 目的鉴定对弓形虫感染具有潜在诊断价值的弓形虫抗原分子。方法制备刚地弓形虫RH株速殖子全虫可溶性蛋白及弓形虫感染小鼠腹腔蛋白,经SDS-PAGE分离后采用半干电转移方法将其转移到硝酸纤维素膜上,再分别与22份弓形虫感染者血清进行Western blot,以22份健康人血清和其他寄生虫病患者血清作为对照,筛选能被弓形虫感染者血清特异性识别的蛋白组分;两种蛋白样本经二维电泳分离后采用Western blot筛选能被弓形虫感染者混合血清识别,但不能被健康人血清及其他寄生虫病患者血清识别的特异性斑点。切取SDS-PAGE胶上相应的特异性蛋白质斑点进行MALDI-TOF分析,鉴定蛋白斑点的基因。结果一维电泳及Western blot结果显示,弓形虫感染小鼠腹腔蛋白中的90、37、30、28和18ku组分分别可被部分弓形虫感染者血清识别,其中为28ku蛋白能被22份弓形虫感染病人血清中的15份所识别;速殖子全虫可溶性虫体蛋白中的90、70、67、56、48、39、37、30、28和18ku组分可被部分弓形虫感染者血清识别,其中28ku蛋白可被22份弓形虫感染者血清中的21份识别,22份健康人血清中有2份与28ku蛋白呈弱阳性反应,与其他寄生虫病患者血清无交叉反应。二维电泳Western blot阳性斑点的飞行质谱分析显示,弓形虫感染小鼠腹腔蛋白中的28ku组分为磷酸丙糖异构酶,弓形虫速殖子全虫可溶性蛋白中的28ku组分为GRA2和GRA7。结论弓形虫抗原与宿主抗体反应具有高度异质性,GRA2、GRA7及磷酸丙糖异构酶等分子的弓形虫感染者血清识别率高,此三种蛋白可作为建立具有高敏感性的弓形虫病特异性免疫诊断方法的抗原分子。 展开更多
关键词 弓形虫RH株 全虫抗原 排泄分泌抗原 WESTERN BLOT 飞行质谱 诊断
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血吸虫感染小鼠及家兔抗Sj23ku膜蛋白大亲水肽段(Sj23HD)IgG应答模式及其免疫诊断价值 被引量:3
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作者 张伟 王玠 +10 位作者 余传信 宋丽君 殷旭仁 钱春艳 沈双 金一 柯雪丹 姚媛 高玒 许永良 杨静 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第2期109-114,共6页
目的探讨日本血吸虫中国大陆株23ku膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)的抗体反应模式及重组Sj23HD-HSA用于血吸虫诊断和疗效考核的价值。方法建立血吸虫尾蚴感染小鼠及家兔模式动物。采集尾蚴感染前、感染后及治愈后不同时间点小鼠及家兔血... 目的探讨日本血吸虫中国大陆株23ku膜蛋白分子大亲水肽段(Sj23HD)的抗体反应模式及重组Sj23HD-HSA用于血吸虫诊断和疗效考核的价值。方法建立血吸虫尾蚴感染小鼠及家兔模式动物。采集尾蚴感染前、感染后及治愈后不同时间点小鼠及家兔血清,以酵母表达的纯重组Sj23HD蛋白为抗原,通过间接ELISA方法检测抗Sj23HD IgG应答水平的动态变化,观察Sj23HD在小鼠及家兔体内的抗体反应应答模式及其疗效考核潜能;以Sj23HD-HSA融合蛋白为抗原,以ELISA检测132份血吸虫、30份华支睾吸虫、10份并殖吸虫感染者以及80份健康人血清,观察该重组抗原用于血吸虫病诊断的价值,以抗可溶性虫卵抗原的抗体应答反应作为对照。结果血吸虫感染小鼠及家兔体内抗Sj23HD蛋白的抗体反应呈短寿应答模式,抗Sj23HD IgG反应随着感染时间的延长呈增强趋势,治愈后的初期继续增强,至治疗后2~4周达到最高水平,随后逐渐下降,至治疗后16周,部分小鼠、家兔的抗体水平可达到阴性阈值,但下降幅度存在个体差异;抗SEA抗体水平在治疗后呈轻度下降趋势。未治疗小鼠和家兔血清中抗Sj23HD、SEA的抗体水平均无明显下降。重组Sj23HD-HSA和SEA ELISA检测132份血吸虫病病人血清,特异抗体阳性率分别为88.64%和97.73%;检测10份并殖吸虫病病人血清,交叉反应率为50%和90%;检测30份华支睾吸虫病病人血清,交叉反应率为0和16.7%;80份健康人血清检测均为阴性。结论血吸虫感染小鼠、家兔血清中抗Sj23HD蛋白的抗体反应为抗原依赖的短寿抗体反应,检测参与这一特异性短寿抗体反应的抗体具有血吸虫病诊断与疗效考核潜能。与SEA相比,重组Sj23HD蛋白作为抗原用于血吸虫病实验诊断具有较好的特异性,但对于来自并殖吸虫流行区的患者仍需注意鉴别诊断。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 23ku膜蛋白大亲水肽段 短寿抗体反应 免疫诊断 疗效考核
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日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达及特性分析 被引量:1
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作者 宋丽君 余传信 +5 位作者 谢曙英 殷旭仁 钱春艳 王玠 张伟 柯雪丹 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期412-418,共7页
目的制备具有生物活性的重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)硒蛋白。方法采用PCR法,在SjTGR基因开放阅读框的末端融合大肠埃希菌(E.coli)硒蛋白转译的硒代半胱氨酸插入序列以构建一个嵌合基因,将此嵌合基因亚克隆到表达载体... 目的制备具有生物活性的重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)硒蛋白。方法采用PCR法,在SjTGR基因开放阅读框的末端融合大肠埃希菌(E.coli)硒蛋白转译的硒代半胱氨酸插入序列以构建一个嵌合基因,将此嵌合基因亚克隆到表达载体pET-41a中形成重组表达质粒SjTGR-pET-41a。将重组表达质粒SjTGR-pET-41a和质粒pSUABC共转化到E.coliBL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达SjTGR蛋白。用阿糖胞苷-2',5'-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析从表达产物中纯化重组SjTGR蛋白。以重组SjTGR免疫小鼠制备TGR多克隆血清,免疫印迹试验分析日本血吸虫体内是否存在天然TGR。采用生物化学方法分析重组SjTGR硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白的酶活性。结果含有E.coli硒代半胱氨酸插入序列的SjTGR嵌合基因构建成功。含SjTGR基因的重组质粒SjTGR-pET-41a的转化子细菌在静止生长期经IPTG诱导,24℃培养24h可表达出可溶性SjTGR蛋白,质粒pSUABC表达产物可促进硒代半胱氨酸整合,增加硒蛋白的产量。免疫印迹试验结果显示,纯化重组SjTGR多克隆抗体可以识别血吸虫成虫体内天然的TGR。生化分析结果显示,SjTGR是一种具有硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白活性的多功能酶。结论具有生物活性的SjTGR已被成功表达,为进一步研究其功能与应用价值奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶 表达 纯化 酶活性
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日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶免疫功能的研究
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作者 宋丽君 余传信 +10 位作者 殷旭仁 沈双 高玒 张伟 金一 姚媛 刘茜 王玠 柯雪丹 许永良 杨静 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期367-371,共5页
目的研究日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(Thioredoxin Glutathione Reductase of Schistosoma japonicum,SjTGR)的免疫原性及抗日本血吸虫感染的免疫保护性作用。方法 75只小鼠随机分为5组:空白组、PBS组、CpG2免疫组、TGR免疫组和... 目的研究日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(Thioredoxin Glutathione Reductase of Schistosoma japonicum,SjTGR)的免疫原性及抗日本血吸虫感染的免疫保护性作用。方法 75只小鼠随机分为5组:空白组、PBS组、CpG2免疫组、TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组,免疫3次。首次免疫前及第3次免疫后2周经尾静脉采血,采用酶联免疫法分别检测血清中抗SjTGR蛋白IgG、IgG1和IgG2a的抗体水平。第3次免疫后2周,每只小鼠经腹部感染日本血吸虫尾蚴40±2条,42 d后剖杀,收集成虫和虫卵,计算减虫率和减卵率;制备各组小鼠单个脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测脾细胞表面标志物CD44high、CD4+CD44high或CD8+CD44high水平;用SjTGR刺激免疫小鼠脾细胞72 h,采用酶联免疫法检测脾细胞的IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的水平。结果第3次免疫后2周TGR与CpG2+TGR免疫组小鼠血清抗SjTGR抗体的IgG滴度均达1:200 000以上,IgG2a与IgG1的比值(IgG2a/IgG1)随时间的延长缓慢增高。TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组细胞上清中的IFN-γ和IL-2水平与空白组、PBS组、CpG2免疫组相比明显增高(P<0.05)。TGR免疫组与TGR+CpG2免疫组小鼠脾细胞的CD44high、CD8+CD44high及CD4+CD44high与空白组和PBS组相比细胞比值增加(P<0.05)。TGR免疫组和CpG2+TGR免疫组的减虫率分别为9.4%,10.5%,减卵率分别为9.2%和32.8%。结论 SjTGR具有较强的免疫原性,可诱导小鼠免疫反应向Th1型极化,但不足以产生抗日本血吸虫感染的保护效应。CpG2 ODN可能是一种有效的Th1型免疫佐剂。 展开更多
关键词 日本血吸虫 硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶 免疫原性 免疫保护
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日本血吸虫中国大陆株过氧化物氧化还原酶1的表达及生物学功能研究
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作者 金一 柯雪丹 +8 位作者 余传信 宋丽君 王玠 殷旭仁 沈双 陶永辉 张英 许永良 杨静 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第6期514-519,526,共7页
目的制备重组日本血吸虫过氧化物氧化还原酶1(rSj Prx1)蛋白,研究其生物学功能。方法采用RT-PCR方法,从日本血吸虫成虫cDNA中扩增编码Sj Prx1蛋白的基因片段,并亚克隆入表达载体pET28a(+),构建重组表达质粒Sj Prx1-pET28a,转化E.coli BL... 目的制备重组日本血吸虫过氧化物氧化还原酶1(rSj Prx1)蛋白,研究其生物学功能。方法采用RT-PCR方法,从日本血吸虫成虫cDNA中扩增编码Sj Prx1蛋白的基因片段,并亚克隆入表达载体pET28a(+),构建重组表达质粒Sj Prx1-pET28a,转化E.coli BL21,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达rSj Prx1蛋白,通过镍柱亲和层析纯化rSj Prx1蛋白。采用生物化学方法分析rSj Prx1对底物H2O2进行还原的酶活性。用纯化的rSj Prx1蛋白免疫小鼠,酶联免疫法检测小鼠血清抗体水平,观察其免疫原性。通过Western blot观察rSj Prx1蛋白对血吸虫感染血清的免疫反应性。以纯化rSj Prx-1蛋白刺激巨噬细胞RAW264.7,通过流式分析观察RAW264.7细胞表面标志物CD16/32、CD206表达水平的变化,通过RT-PCR检测RAW264.7细胞内诱导型一氧化氮合酶与精氨酸酶表达水平的变化,采用细胞因子检测试剂盒分析巨噬细胞培养上清液中IL-12及IL-10水平的变化,以评价rSj Prx1蛋白的免疫调节功能。结果通过RT-PCR获得编码Sj Prx1蛋白的基因片段,并成功构建了重组表达质粒Sj Prx1-pET28a。含重组质粒Sj Prx1-pET28a的转化子细菌经IPTG诱导表达可溶性Sj Prx1蛋白。纯化的rSj Prx1蛋白具有氧化还原活性,可还原底物H2O2。rSj Prx1蛋白免疫小鼠可产生高效价的血清抗体,该蛋白能被日本血吸虫感染者血清、病兔及病鼠血清识别,而免疫血清同样可能识别来源于血吸虫成虫及虫卵的天然Sj Prx1蛋白。制备的rSj Prx1可诱导巨噬细胞高水平表达与M2型转化相关的IL-10、精氨酸及CD206。结论制备的rSj Prx1蛋白具有天然的酶学特性、抗原性和Th2型免疫调节功能,为进一步发展新的血吸虫病治疗药物和免疫调节方法奠定了基础。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 过氧化物氧化还原酶-1 基因克隆 表达 酶学活性 免疫原性 免疫调节
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重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶动力学分析
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作者 宋丽君 李家璜 +6 位作者 余传信 华子春 殷旭仁 钱春艳 王瑜 张伟 柯雪丹 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第8期594-599,共6页
目的对重组的日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)进行酶动力学特征分析。方法用阿糖胞苷-2’,5’-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析纯化重组SjTGR蛋白。利用紫外分光光度计(UV-2550,SHIMADZU),在25℃条件下分别以5-联硫代-双-2-硝... 目的对重组的日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)进行酶动力学特征分析。方法用阿糖胞苷-2’,5’-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析纯化重组SjTGR蛋白。利用紫外分光光度计(UV-2550,SHIMADZU),在25℃条件下分别以5-联硫代-双-2-硝基苯甲酸(DTNB)、胰岛素、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、β-羟乙基二硫化物(HED)为底物,测定SjTGR的硫氧还蛋白还原酶(TrxR)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷氧还蛋白(Grx)活性及其米氏常数。以金诺芬为抑制剂,测定其对SjTGR活性的抑制作用及抑制常数。结果 SjTGR是一种具有TrxR,GR,Grx活性的多功能酶,酶活性分别为8.11、2.19和12.10μmol·min-1mg-1。不同的酶底物得到的Km值分别为(21.42±0.44)μmol·L-1(NADPH)、(3.24±0.40)μmol·L-1(Trx)(、145.05±6.31)μmol·L-1(DTNB)(、49.55±6.31)μmol·L-1(GSSG)、(2 792±231)μmol·L-1(HED)(、1 698±54)μmol·L-1(GSH)。金诺芬对SjTGR活性有明显的抑制作用,5 nmol·L-1重组SjTGR的TrxR、GR、Grx半数抑制浓度(IC50)值分别为6.89、0.47和8.12 nmol·L-1,TrxR、GR的抑制常数(Ki)分别为为0.762和0.034 nmol·L-1。金诺芬对SjTGR的TrxR活性抑制作用为竞争抑制,而对SjTGR的GR活性的抑制作用为非竞争抑制作用。结论 SjTGR具有TrxR、GR、Grx三种酶活性,能被金诺芬所抑制,是开发抗日本血吸虫新药的分子靶标。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶 酶动力学 金诺芬 抑制剂
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弓形虫磷酸丙糖异构酶原核表达及免疫保护的初步研究 被引量:4
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作者 沈双 殷旭仁 +4 位作者 宋丽君 王玠 柯雪丹 周伟 余传信 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期780-783,共4页
目的克隆刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶(Triosephosphate isomerase,TPI)基因,原核表达和纯化蛋白,研究其对弓形虫感染小鼠的免疫保护作用。方法抽提弓形虫速殖子总RNA,利用PCR技术扩增刚地弓形虫TPI基因,构建重组原核表达载体TPI/p ET-28a(... 目的克隆刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶(Triosephosphate isomerase,TPI)基因,原核表达和纯化蛋白,研究其对弓形虫感染小鼠的免疫保护作用。方法抽提弓形虫速殖子总RNA,利用PCR技术扩增刚地弓形虫TPI基因,构建重组原核表达载体TPI/p ET-28a(+),转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达,镍亲和层析法纯化目的蛋白。将与佐剂乳化后的TPI蛋白对小鼠颈背部多点皮内免疫,间隔2周,连续免疫4次,最后一次为加强免疫,同时设置佐剂对照组与正常对照组。尾静脉采血检测小鼠血清抗体效价。以400个弓形虫速殖子/只接种小鼠腹腔,观察记录各组小鼠的生存率。结果成功扩增到弓形虫TPI基因,构建原核表达载体TPI/p ET-28a(+),获得纯化的TPI蛋白,TPI免疫4次后的小鼠血清抗体效价可达1:100 000以上,且生存期显著高于佐剂对照组与正常对照组。结论弓形虫TPI蛋白对弓形虫感染小鼠具有一定的免疫保护作用,为研究弓形虫疫苗奠定了理论基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 磷酸丙糖异构酶 原核表达 免疫保护
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2005-2016年血吸虫病研究项目国家自然科学基金资助情况分析 被引量:1
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作者 周雯迪 施亮 +1 位作者 柯雪丹 王玠 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期592-597,共6页
目的通过研究2005-2016年国家自然科学基金对血吸虫病研究项目的资助情况,分析血吸虫病领域的主要研究方向和动态。方法通过国家自然科学基金ISIS系统,筛选2005-2016年血吸虫病学研究领域的资助课题,统计分析资助数量、金额、类别、机... 目的通过研究2005-2016年国家自然科学基金对血吸虫病研究项目的资助情况,分析血吸虫病领域的主要研究方向和动态。方法通过国家自然科学基金ISIS系统,筛选2005-2016年血吸虫病学研究领域的资助课题,统计分析资助数量、金额、类别、机构、学科的分布情况,并借助网络图谱,展现研究主题进展。结果 2005-2016年血吸虫病研究共获得国家自然科学基金资助项目198项,共计7 605万元。获资助的项目以面上项目和青年项目为,获资助机构以科研院所和医学类高校为主,主要资助方向为医学病原微生物与感染、兽医学和医学免疫学。结论国家自然科学基金对血吸虫病的资助有下降趋势,但获项目的研究深度与广度日益渐深,因此需鼓励创新性研究,推动学科交叉,以促进血吸虫病学的发展。 展开更多
关键词 血吸虫病 国家自然科学基金 研究现状
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江苏省血吸虫病防治研究所2005--2014年科研课题回顾分析 被引量:1
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作者 王阶 周雯迪 +6 位作者 柯雪丹 罗恩培 毛元春 曹园园 颜维安 羊海涛 梁幼生 《中华医学科研管理杂志》 2017年第3期194-197,共4页
目的通过对江苏省血吸虫病防治研究所2005—2014年获批科研课题情况进行回顾与分析,为提升科研能力,加快人才培养和十三五科研业务发展规划的制定提供依据。方法将江苏省血防所2005—2014年的课题立项年度计划和人事部门提供的人员名... 目的通过对江苏省血吸虫病防治研究所2005—2014年获批科研课题情况进行回顾与分析,为提升科研能力,加快人才培养和十三五科研业务发展规划的制定提供依据。方法将江苏省血防所2005—2014年的课题立项年度计划和人事部门提供的人员名册表录入MicrosoftExcel2010软件,用统计软件Stata12.0进行数据的统计分析,通过比较每年获批课题数来分析获批课题趋势。结果2005--2014年,江苏省血防所共获得课题100项,其中国家级课题29项,占29.0Voo;省部级课题31项,占31.0%;国际合作课题12项,占12.0%;其他市厅级课题28项,占28.0Vo。课题研究性质为基础研究58项,应用研究42项,获批课题负责人年龄中35岁以下人员人数上升明显,课题负责人逐渐转变为以中级职称人员为主。结论该所获批的课题研究类型以基础研究为主,课题中标总体呈上升趋势,青年人才正迅速成长,但仍需进一步提升国家重大项目和国际合作项目的承担能力,不断拓展研究领域,加强对其他寄生虫病的研究力度。 展开更多
关键词 科研管理 获批课题 寄生虫病
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