HIV-1 p15(Gag)基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的为了研究HIV-1p15(Gag)的生物学活性,制备HIV-1p15(Gag)蛋白及其特异性抗体。方法用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达HIV-1p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的蛋白。以纯化目的蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性。结果原核表达载体pET28a(+)-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约20000的p15(Gag)蛋白经western blot鉴定正确。纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论得到纯化的HIV-1p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。

HIV-1 Gag多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的抗体制备

旨在通过构建Gag的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV诊断及可能的疫苗制备提供试验基础。选定HIV-1 Gag基因中3个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这3个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western blotting测定融合蛋白的表达,并免疫动物制备相应抗体。结果显示,构建的HIV-1 Gag多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长576bp。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为27kD,以包涵体的形式存在。纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体IgG。ELISA和免疫荧光方法检测显示制备的多克隆抗体能具有特异性反应。成功构建和高表达了HIV-1 Gag多表位融合蛋白,纯化蛋白制备的抗体与HIV-1Gag有特异性结合。为进一步研究HIV-1奠定了试验基础。

HIV-1病毒Nef基因克隆、表达、纯化及其抗体的制备

目的:运用基因工程方法制备HIV-1 Nef重组蛋白及其抗体。方法:用PCR技术从HIV-1H×B2质粒中扩增HIV-1 Nef基因,将测序鉴定过的HIV-1 Nef基因克隆到原核表达载体pET28a(+)上,应用酶切鉴定、测序、SDS-PAGE及Western blot等方法鉴定基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。纯化的重组蛋白免疫兔3次后,ELISA法测定兔多克隆抗体滴度。用其制备的多克隆抗体通过免疫组织化学方法测定表达Nef基因的内皮细胞。结果:成功地构建了Nef基因的原核表达质粒,测序证明HIV-1Nef基因全长为621bp,编码206个氨基酸。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白为包涵体的形式。HIV-1 Nef蛋白N端融合6×His标签便于纯化及鉴定。获得的高纯度HIV-1 Nef融合蛋白,免疫动物后,可产生特异的高滴度抗体(ELISA滴度达1∶10000)。将转染Nef基因的内皮细胞,应用免疫组化的方法证明其抗体有高度的特异性。结论:构建了高表达HIV-1 Nef蛋白的原核表达系统,制备的Nef重组蛋白免疫动物,获得了特异、高效价的抗体,为研究Nef基因的生物学活性提供了实验材料和依据。

HIV-1 gp160多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的免疫原性分析

HIV感染引起的AIDS已经成为严重影响人类健康和社会发展的全球性疾病。酶联免疫吸附试验和免疫印迹检验组合则被认为是HIV检测的"金标准"。构建了gp160的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV抗体测定提供特异、价廉的抗原。选定HIV-1gp160基因中3个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这3个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western blot测定融合蛋白的抗原特异性。构建的HIV-1gp160多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长969bp。在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为37kDa,以包涵体的形式存在。应用Western blot测定10例正常人和12例HIV/AIDS病人血浆显示HIV-1gp160多表位融合蛋白具有良好的抗原特异性。成功构建了高表达HIV-1gp160多表位蛋白的原核表达系统,纯化的融合蛋白有较强的抗原特异性。

HMG单药及联合氯米芬对排卵障碍患者卵泡生长的干预研究

目的探讨不同方案人绝经期促性腺激素（human menopausal gonadotropin,HMG）对排卵障碍患者促排卵治疗后的卵泡生长规律。方法将符合入选标准的排卵障碍20例随机分为HMG组和氯米芬（clomiphene citrate,CC）加HMG组,每组各10例,另选择10例正常排卵妇女为对照组。HMG组自经期第5天始,予肌内注射HMG 75 U/d至卵泡成熟;CC＋HMG组于经期第5天始口服CC50 mg/d,第9天予肌内注射HMG75 U/d至卵泡成熟。3组分别于月经周期的第3~5、10~11、12~13、14~15天及卵泡成熟期行经阴道彩超检查,监测卵泡大小、数目等情况。结果两治疗组大多可以在经期第10~11天获得优势卵泡,优势卵泡随后以1.5 mm/d速度向成熟卵泡发育,3组卵泡大小及优势卵泡增长速度比较均无统计学差异（P〉0.05）。结论单用HMG或CC加HMG方案均可以改善排卵障碍,获得与正常卵泡相似的卵泡发育。

子宫破裂致孕产妇死亡1例诊治反思

妊娠期子宫破裂(Uterine rupture,UR)是与妊娠相关的子宫体或子宫下段的破裂,依据宫腔与腹腔是否相通可分为完全性及不完全性UR,其可发生于妊娠各期,尤其多见于妊娠晚期、分娩过程中。对母体而言,由于组织破裂、血管损伤大量失血,UR可引起孕产妇失血性休克、弥漫性血管内凝血(DIC)、周围脏器损伤,最终带来子宫切除生育能力丧失或死亡;对胎儿而言,UR引起胎儿窘迫,可能造成围产期死亡、缺血缺氧性脑病以及脑瘫、癫痫发作等远期并发症。UR是产科极为严重的并发症,一旦发生对母儿都会造成灾难性后果,是衡量一个地区产科质量的重要标准之一。

早孕合并门静脉血栓1例并文献分析

早孕合并门静脉血栓(PVT)发病率低,临床症状缺乏特异性,延误诊断治疗可能引起严重后果。本文报道1例经保守治疗成功分娩的病例,结合该病例对妊娠合并急性、慢性门静脉血栓的诊断治疗进行文献分析。

子宫内膜大细胞神经内分泌癌合并内膜样癌1例及文献分析

1.1临床资料患者,女,58岁,孕3产3,因“阴道不规则出血1年余”入院。患者1年来阴道不规则出血,淋漓不净,无腹痛,妇检超声提示子宫肌瘤(具体不详)。因“反复出血”复查瘤体较前明显增大入院。既往无特殊病史。妇检示宫颈常大光滑偏向左侧穹窿,宫体增大质硬。三合诊示宫颈段扪及不清,盆壁未触及异常包块结节。辅助检查:乳酸脱氢酶、妇科肿瘤标记物及宫颈液基薄层细胞检测均无明显异常。

苦参凝胶在宫颈环形电切术后的应用观察

目的:探讨苦参凝胶改善宫颈病变患者行宫颈环形电切术(LEEP)的治疗效果。方法:选择经宫颈细胞学及HPV-DNA-阴道镜下宫颈活检三阶梯方法确诊的宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ、Ⅲ级患者230例,分为观察组(LEEP术+苦参凝胶治疗)和对照组(LEEP术治疗),监测并比较两组术后阴道流血(排液)量及持续时间、创面愈合时间、宫颈管粘连、HPV转归等指标。结果:观察组术后阴道流血量较对照组明显减少(P<0.05),阴道排液时间、宫颈创面愈合时间均较对照组明显缩短(P<0.05),观察组宫颈粘连发生率(1.69%vs 7.14%)明显较低(P<0.05),HPV16、18转阴率(89.47%vs 70%)明显较高(P<0.05)。结论:LEEP术治疗后联合应用苦参凝胶,可明显减少LEEP术后阴道出血及减少排液的时间,缩短创面愈合时间,减少宫颈粘连,提高HPV16、18转阴且无副作用。

卡前列素氨丁三醇联合葡萄糖酸钙治疗对产后出血患者凝血功能的影响

目的 探究卡前列素氨丁三醇联合葡萄糖酸钙治疗对产后出血患者血小板计数(PLT)、PT、APTT水平的影响.方法 选取2019年2月~2020年3月产科收治的足月产妇140例,随机分为对照组及观察组,各70例,每组又根据分娩方式不同分为剖宫产及阴道分娩.对照组使用卡前列素氨丁三醇及缩宫素治疗,观察组在此基础上加用葡萄糖酸钙治疗,对比两组产妇产后2 h、产后24 h出血量;产前、产后24 h PLT、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)及用药前、用药2 h后心率及血压变化.结果 观察组阴道分娩及剖宫产小组产后2 h、24 h出血量,产后24 h PT及APTT水平均显著低于对照组,产后24 h PLT显著高于对照组(P<0.05);两组产妇用药前、用药2 h后心率、血压均无明显差异(P>0.05).结论 卡前列素氨丁三醇联合葡萄糖酸钙治疗可有效缓解产妇PLT变化,维持产妇PT、APTT稳定,减少出血量,且不影响血流动力学.

子宫奇异型平滑肌瘤诊治进展

子宫平滑肌肿瘤具有较多亚型,子宫奇异型平滑肌瘤是其中之一,具有良好的预后,可行保守性手术,保留患者的生育功能,而子宫平滑肌肉瘤是来源于平滑肌的恶性肿瘤。如何对二者进行诊断、鉴别,对于指导治疗、评估预后有着重要意义。为此,本文对相关文献进行综述。

HIV-1 p15（Gag）基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的：构建HIV-1p15（Gag）原核表达载体，诱导蛋白表达及制备多克隆抗体。方法：用PCR的方法扩增编码p15（Gag）基因序列，将其克隆到原核表达载体pET28a（＋）中，利用大肠杆菌表达系统表达HIV-1p15蛋白，分别用His抗体和HIV阳性血清做westernblot鉴定目的蛋白的免疫原性。纯化目的蛋白免疫家兔，制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验（ELISA），细胞免疫组织化学法检测抗体滴度及其特异性。结果：原核表达载体pET28a（＋）-p15（Gag）成功构建，可在大肠杆菌BL2。（DE3）中用IPTG诱导表达，得到相对分子质量约20KD的p15（Gag）蛋白，经westernblot鉴定正确。纯化蛋白免疫家兔，制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论：得到纯化的HIV-1p15蛋白，制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15（Gag），为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。

卵巢重度水肿的诊断学特征分析

目的探讨卵巢重度水肿的诊断学特征。方法回顾性分析2017年1月至2022年1月枣阳市第一人民医院妇科收治的经病理确诊的4例卵巢重度水肿患者的临床资料,并进行文献复习。结果4例患者年龄16~28岁,均有不同程度下腹盆腔痛;妇科超声提示附件区或盆腔低回声包块;3例患者妇科肿瘤标记物检查正常;2例行生殖激素检测,1例诊断为多囊卵巢综合征;4例患者行腹腔镜/剖腹探查术,术中见包块为卵巢增大、肿胀伴扭转,颜色呈瓷白色、淡红色、暗红色不等,卵巢质地坚韧有弹性,切面可见水肿液或血性液体渗出,术中快速冰冻病理检查提示良性病变,术后常规病理检查见不同发育阶段卵泡,水肿区血管、淋巴管显露。结论卵巢重度水肿患者年轻,绝大部分与卵巢扭转相关,结合病史、术前检查,快速冰冻病理检查指导手术方式意义重大。

HIV-1 NCp15基因的克隆、蛋白表达及鸡卵黄抗体的制备

目的:为研究HIV-1 NCp15的生物学活性,制备HIV-1 NCp15蛋白及其鸡卵黄抗体。方法:用PCR的方法扩增编码NCp15基因序列,将其克隆到原核表达载体PGEX4T1中表达HIV-1 NCp15蛋白,用HIV阳性血清做Western blot鉴定目的蛋白。以纯化的NCp15蛋白抗原免疫产蛋鸡,制备卵黄抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),Western blot检测抗体滴度及特异性。结果:成功构建原核表达载体PGEX4T1-NCp15,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约45ka的NCp15融合蛋白,经Western blot鉴定正确。纯化蛋白免疫产蛋鸡,制备的鸡卵黄抗体IgY具有较强免疫特异性。结论:得到纯化的HIV-1NCp15蛋白,制备的IgY能够检测HIV-1病毒蛋白NCp15,为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。

抗HIV-1 p15(gag)IgY抗体的制备及活性检测

目的:制备具有高效价强特异性的抗HIV-1 p15(gag)鸡卵黄抗体(IgY),纯化并分析其免疫学活性。方法:用纯化的HIV-1 p15(gag)蛋白抗原免疫蛋鸡,用水稀释法对IgY抗体进行粗提取并结合乙醇沉淀和氯化钠盐析法纯化抗体,再通过SDS-PAGE、Western blot、酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗体的纯度、特异性及效价。结果:表达纯化的HIV-1 p15(gag)-GST融合蛋白分子量为45kDa,用于抗体检测的抗原。用纯化的His-P15蛋白作为免疫原免疫蛋鸡后,获得的卵黄抗体重链、轻链分子量分别为65kDa和25kDa。8倍体积水稀释卵黄,pH值5.1,20%冰乙醇及0.028mol/L盐溶液分离纯化,纯度可达96℅,每毫升卵黄液可得到的卵黄抗体为9.8mg。终浓度为18%～25%的冰乙醇纯化的抗体浓度高且稳定,同时具有较强的特异性和较高的效价。结论:用HIV-1p15(gag)蛋白免疫蛋鸡,可以获得高效价的特异性抗体IgY,为IgY抗体在HIV-1p15蛋白的研究奠定了实验基础。

HIV-1 gp160多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的免疫原性分析

目的：HIV感染引起的AIDS已经成为严重影响人类健康和社会发展的全球性疾病。酶联免疫吸附试验和免疫印迹检验组合则被认为是HIV检测的“金标准”。因此本实验构建gp160的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV抗体测定提供特异、价廉的抗原。方法：选定HIV-1 gp160基因中三个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这三个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western Blot测定融合蛋白的抗原特异性。结果：构建的HIV-1 gp160多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长969bp。在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达的重组蛋白分子量为37kDa,以包涵体的形式存在。结论：应用western blot测定10例正常人和12例HIV/AIDS病人血浆显示HIV-1 gp160多表位融合蛋白具有良好的抗原特异性。成功构建了高表达HIV-1 gp160多表位蛋白的原核表达系统,纯化的融合蛋白有较强的抗原特异性。

HIV-1 Tat真核表达载体的构建及在内皮细胞的表达

目的:构建HIV-1 Tat真核表达质粒,为研究Tat在HIV-1致病机制中的作用奠定实验基础。方法:以pCV1(tat and rev)质粒为模板,用PCR方法扩增HIV-1 Tat基因,克隆至p cDNA3.1(+)表达载体,酶切及测序鉴定重组体。重组质粒转染ECV304细胞,用RT-PCR、转染HIV-1 LTR荧光报告基因的方法检测tat基因的表达及活性。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建pcDNA3.1(+)-Tat重组质粒。重组体转染ECV304细胞,建立稳定表达细胞株,应用RT-PCR可检测到Tat基因mRNA的表达;荧光仪检测Tat蛋白可明显促进荧光素酶在ECV304细胞内的表达。结论:成功构建HIV-1Tat真核表达载体,并建立了HIV-1 Tat内皮细胞稳定表达细胞株。