乳酸乳球菌的质粒消除

质粒消除是鉴定质粒和获得无质粒菌株的重要方法,是乳酸菌进行遗传学改造所需的一项重要技术。试验采用高温和消除剂结合的方法,对乳酸乳球菌镉抗性菌株进行质粒消除,探讨温度、消除剂吖啶橙的用量和作用时间对乳酸乳球菌镉抗性质粒消除的影响。结果表明,39℃高温可以质粒消除,而37和41℃均无此效果;独自吖叮橙作用未获得质粒消除菌株;39℃高温-吖啶橙同时作用比高温-吖啶橙交替作用消除率高,而39℃高温-20μg·mL-1吖啶橙共同作用12d,消除率可达98%。根据消除结果,以疑似功能性质粒为模板,进行PCR扩增,获得预期片段,进一步证实了其功能。

乳酸乳球菌有氧呼吸能力的优化研究

为了提高乳酸乳球菌KLDS4.0316在血红素存在状态下的有氧呼吸能力,实现高密度培养,分析比较了阶段性和持续有氧呼吸的培养方法。结合不同碳源及浓度、血红素添加量和摇床转速等单因素实验结果,设计正交实验优化获得的最佳有氧呼吸培养条件为:培养物以1/1000接菌量接种于添加20g/L葡萄糖和2μg/mL血红素的M17培养基中,摇床转速250r/min,30℃培养。增菌培养终止时间为8h。研究发现,优化培养的KLDS4.0316菌株消耗更多的葡萄糖,这可能与显著增加的生物量有关。

自然拼读法和国际音标在英语教学中的应用比较

自然拼读法和国际音标教学各有优劣势。文章从自然拼读和国际音标应用的优劣势研究入手,分析了这两种教法在英语教学中对学生英语学习的不同促进作用,提出将二者交互用于不同教学阶段的具体策略。

高职公共英语语音教学现状及改进对策

英语语音教学在整个英语教学中起到举足轻重的作用。高职学生英语语音方面存在知识欠缺和技能不足情况。利用自然拼读法可以较好地解决这一问题。英语语音教学还必须坚持反复性和长期性。

高职公共英语教师职业倦怠成因分析及解决对策

职业倦怠现象在高职公共英语教师中比较普遍。造成这种状况的因素有学校管理方面的,也有学生方面的,还有教师个人方面的。为了预防高职公共英语教师出现职业倦怠现象,学校应该重视课程的育人功能并合理安排英语课程,英语教师自身应该制定长远职业规划,找到工作的内驱力,改进教学方法,全身心地投入到工作中。

高职公共英语教学改革之我见

高职英语教学必须改革目前的教学模式,坚持以培养学生实际应用语言能力为目标,改革课堂教学模式,加强听说技能训练,重视写作教学,改革考试方式和内容,以此来培养既有专业知识和技能,又会一定英语的高技能人才。

口腔黏膜促透剂研究进展

通过查阅资料并选取有代表性的文献进行综述,发现口腔黏膜吸收促进剂是一种能可逆地改变口腔黏膜角质层屏障作用以促进药物的透黏膜吸收,而不对口腔黏膜形成严重刺激和损害的化学物质。常用的促透剂有表面活性剂类、胆盐类、醇类、脂肪酸、萜烯类、环糊精、螯合剂、壳聚糖、Azone等类型,其能增加药物的口腔黏膜透过率,这对于口腔黏膜给药的应用具有重要指导意义。

乳酸菌胆酸盐耐受性及降胆固醇能力研究

研究了分离自内蒙古传统稀奶油的四株乳酸菌的胆酸盐耐受性和降胆固醇能力。结果表明,供试菌株对牛磺胆酸钠的耐受性与对照菌株相比差异显著(P<0.05),其中屎肠球菌KLDS6.0330的耐受性最强;粪肠球菌KLDS6.0335呈现胆酸盐促进其生长的现象。菌株间胆固醇去除能力不同,在恒定pH5.5条件下去除能力更强(P<0.05);其中KLDS6.0330在不恒定pH和恒定pH5.5条件下分别达到58.47%和61.92%。四株供试菌株均具有共沉淀作用、吸收作用和降解作用。其中,干酪乳杆菌KLDS1.0344以共沉淀作用为主,KLDS6.0330以吸收作用和降解作用最为显著。

运用现代教育技术提高大学英语教学效率

高职大学英语教学目前存在一定问题。多媒体技术有助于培养学生自主学习能力和习惯,有助于学生听说能力培养,有助于学生了解西方文化并培养学生跨文化交际能力。同时,教师应该主要使用多媒体教室的要求。

氧气对干酪乳杆菌生长和活力的影响

以静置培养为对照,通过振荡培养制造有氧环境,对干酪乳杆菌的生长曲线、菌体活力进行分析。研究发现在有氧条件下菌体生长受到抑制,菌体密度小于静置发酵,在4℃保存时的活力迅速下降,另外,有氧生长菌体对热、胆汁等条件的耐受性较差,在50℃处理4h导致菌体迅速死亡,在含有胆汁的培养基中,菌体生长几乎停滞。通过透射电镜观察发现有氧条件下菌体细胞壁发生破裂,菌体细胞质成分溶出,导致菌体死亡。因此,氧气对干酪乳杆菌的生长具有抑制作用,造成细胞损伤,导致菌体活力降低。

CRISPRs在德氏乳杆菌中的检测与同源性分析

本研究检测了本实验室德氏乳杆菌中的CRISPRs结构,并对其重复序列和间区序列进行了同源性分析。结果显示,供试菌株L7和L9中均含有CRISPRs序列,分别为3 323 bp和3 015 bp,多重比对后的重复序列8～12位与21～17位碱基互补形成回文结构;重复序列大小(29 bp)与标准菌株基本相同,但其同源性与菌株亲缘关系具差异性,验证了CRISPRs结构的水平基因转移的特点。

高职行业英语课程思政建设探究——以“计算机行业英语”课程为例

文章以“计算机行业英语”课程为例,首先阐述了高职行业英语课程思政建设的必要性,然后论述了高职行业英语课程思政资源的挖掘,最后提出了高职行业英语课程思政建设的路径。

大豆主要成分系统分析实验综合设计的探索

在原有生物化学教学实验的基础之上,通过实验间的有机组合和巧妙衔接,以大豆主要成分的系统分析为例,设计了一个综合性的实验。在完成实验过程中不断探索新的思路,以求在实验用品、操作步骤、时间安排、人员分配等多个方面摸索综合实验设计的思路和注意事项。

莲子抗性淀粉与双歧杆菌的黏附作用

莲子抗性淀粉(lotus seed resistant starch,LRS)是一种可以促进双歧杆菌增殖的良好碳源,其可在被利用前与菌发生物理性黏附接触,这种黏附接触可能会促进双歧杆菌增殖进而使二者黏附体系在人体中发挥益生功效,然而目前对二者黏附能力的影响因素及黏附机理尚不清楚。因此该研究以微波法制备Ⅲ型莲子抗性淀粉(LRS3),并通过不同的酶、胆盐浓度、pH值条件、生长介质、温度的处理以及测定二者的疏水性和表面电荷,研究LRS3与双歧杆菌黏附的影响因素。结果表明LRS3与双歧杆菌黏附体系在通过胃肠道过程中损失较大,静电相互作用对其存在一定的影响,疏水相互作用对二者黏附体系的影响存在菌株差异性。推测该黏附作用机理可能涉及一类特异性的细胞表面蛋白。

乳酸乳球菌镉抗性菌株的鉴定及质粒消除的研究

为构建乳酸菌食品级载体/受体系统,从分离自内蒙古传统乳制品103株乳源性乳酸菌中筛选出7株高浓度镉抗性菌株。特异性16SrDNA PCR扩增产物的序列测定结果表明,其中两株为乳酸乳球菌。PCR扩增镉抗性基因部分序列证实了这两株乳酸乳球菌含有镉抗性基因,为镉抗性阳性菌株。通过物理和化学方法消除乳酸乳球菌内源质粒,确定了镉抗性质粒,并获得一系列衍生菌株,包括无质粒菌株。为进一步研究各种质粒的功能及基因表达提供了理想的宿主,也为乳酸菌食品级载体/受体系统的构建奠定了基础。

从自然选择到人工选择 科学利用微生物

人类从未停止探索如何把丰富的微生物资源为己所用，早在远古时代，采集的果实或谷物如果有剩余，在储存过程中就会发生变质、腐烂，甚至产生酒精而变成了酒，人们发现了这些“变质”食物的美味，便有意识重复这样的过程，这一过程在科学上被称为“发酵”，

高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法测定枸杞多糖的单糖及糖醛酸组成

目的:建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定枸杞粗多糖及其不同组分单糖和糖醛酸的种类及含量。方法:枸杞子经水提醇沉,Hiprep DEAEFF16/10柱分离,再由HPAEC-PAD法测定枸杞粗多糖及其不同组分中单糖及糖醛酸的组成。结果:测得各单糖及糖醛酸在2.5~50mg/L线性关系良好(r≥0.9990),最低检出限为0.010~0.028mg/L,日内精密度RSD为0.98%~2.20%,日间精密度RSD为1.38%~2.46%,加标回收率为94.60%~112.62%。枸杞粗多糖及其不同组分均由阿拉伯糖、氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、果糖、核糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸组成。结论:本研究所建立的方法简便、准确、分离效果好、灵敏度高,可用于枸杞粗多糖及其不同组分单糖及糖醛酸组成和测定的分析研究。

高效Rubisco羧化活性筛选体系的设计与构建

【背景】广泛存在于植物、藻类及其他自养微生物中的核酮糖-1,5-二磷酸羧化/加氧酶(Rubisco)是卡尔文循环中固定CO2的关键酶及限速酶,在生物质合成和全球碳循环中扮演着重要角色。鉴于Rubisco的重要性以及极低的固碳羧化活性,对Rubisco的筛选进化研究具有重要意义。【目的】构建一种适用于筛选高效Rubisco羧化活性的筛选体系。【方法】分析现有筛选体系对Rubisco羧化活性筛选压力缺失的原因,设计构建适用于高效Rubisco羧化活性的筛选体系,以BWLac产乳酸菌株为宿主,在含有5%CO2的N2环境下厌氧培养,比较不同羧化活性Rubisco对细胞生长的影响,通过HPLC及LCMS检测总乳酸及固定CO2生成乳酸的产量评估筛选体系。【结果】通过终端代谢产物乳酸产生下拉力,以及甘油代谢产生的剩余还原力需要平衡消耗掉的设计靶点,增强Prk和Rubisco的固碳支路代谢通量,加强RuBP对细胞的毒性抑制作用,使细胞生长与Rubisco活性有效偶联,构建高通量筛选办法。在新构建的筛选体系中,Rubisco失活突变体BWLac/197不能生长,Rubisco和Prk双失活突变体BWLac/197-2021生长未受影响,菌落大小约1.58 cm。粗酶液羧化活性相差2倍以上的RBC1和7002,其细胞生长在筛选条件下受不同程度抑制,菌落大小分别有1.06 cm和0.65 cm。通过检测乳酸产量及甘油消耗量对筛选体系验证评估,RBC1消耗甘油1.39 g/L,产乳酸2.82 g/L,其中来自于NaH13CO3的标记乳酸含量为18.05μmol/L,比7002的相应检测结果高1.3-1.6倍,检测结果与筛选体系设计原理相符,即乳酸产量越高,甘油消耗越多,Rubisco羧化活性越高,细胞生长得越好。【结论】成功设计构建了高效Rubisco羧化活性筛选体系,为进化或探索更高羧化活性Rubisco提供有效的高通量筛选办法。