基于特征肽段的鹿茸及其混伪品种的专属性鉴别研究

目的:基于特征肽段建立鹿茸及其混伪品种的专属性鉴别方法。方法:针对鹿茸的主要成分蛋白质,采用胰蛋白酶对正品鹿茸(梅花鹿、马鹿)及伪品鹿茸(驯鹿)进行酶解,利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS)进行测定,结合数据分析软件,以主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对3种鹿茸样品的液质数据进行分析,找出驯鹿的专属性特征肽。利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-QQQ/MS)进一步验证驯鹿特征肽段的专属性,同时基于特征肽段建立正品鹿茸的特征图谱。结果:确定了伪品鹿茸的2个特征肽段并建立了正品鹿茸的特征图谱。结论:伪品鹿茸的2个特征肽段可用于正品鹿茸中混有伪品鹿茸的专属性鉴别,建立的正品鹿茸的特征图谱方法重复性好、操作简便,可用于鹿茸及其混伪品种的鉴别。

不同规格鹿茸饮片的多指标质量等级评价

目的:综合多指标含量测定对不同商品规格的鹿茸饮片进行质量等级评价。方法:测定不同规格鹿茸饮片中总灰分、浸出物,并采用凯氏定氮法测定总氮含量,采用柱前衍生化高效液相色谱法对鹿茸饮片中15种氨基酸含量进行测定。结果:4种不同规格鹿茸饮片中蜡片总灰分最低,骨片最高;浸出物、总氮含量及15种氨基酸含量均蜡片中最高,骨片中最低,粉片与血片中含量接近,无明显差异。结论:通过总灰分、浸出物、总氮及氨基酸含量评价不同规格鹿茸饮片的质量,为鹿茸饮片的质量等级评价提供参考。

牛黄及代用品化学成分、质量控制方法的研究进展

天然牛黄是我国一味名贵的传统中药材,在临床上使用广泛,由于其价格高昂,资源紧缺,牛黄的代用品人工牛黄、培植牛黄以及体外培育牛黄等也在临床上有广泛的应用。为了解牛黄及其代用品在化学成分上的差异性,以及各类牛黄药材是否具有专属性的检测方法。笔者对牛黄及代用品的化学成分、质量控制方法进行了综述。人工牛黄中主要含有猪去氧胆酸和少量游离胆红素,和其他3种牛黄类药材的化学成分差异较大,天然牛黄、体外培育牛黄、培植牛黄的化学成分相似,但不同类型的胆红素含量比例存在差异。目前,尚未发现天然牛黄的专属性成分来用以区分与体外培育牛黄、培植牛黄。

超高效液相色谱-三重四极杆质谱法用于阿胶、龟甲胶、鹿角胶中猪皮源成分的检测

目的:建立超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-QQQ/MS法)测定阿胶、龟甲胶和鹿角胶中猪皮源成分。方法:采用胰蛋白酶进行酶解处理,色谱柱为ZORBAX SB-C18(2.1 mm×150 mm,5μm);以0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~25 min,95%A→80%A;25~40 min,80%A→50%A),流速为0.3 mL·min^-1;电喷雾离子源(ESI),正离子模式下扫描,采用多重反应监测模式(MRM),对特征肽目标离子m/z 774.5(双电荷)→977.8和m/z 774.5(双电荷)→1034.6进行检测。结果:阿胶中新阿胶掺入量为1%~12%、龟甲胶中新阿胶掺入量为2%~11%、鹿角胶中新阿胶掺入量为3%~12%的范围内,掺入量与色谱峰面积成正比,线性方程分别为Y=4471X-29.00(r^2=0.9971),Y=4468X-63.33(r^2=0.9963),Y=4262X-74.48(r^2=0.9980)。检测下限浓度为0.1 g·mL^-1。5批阿胶、5批龟甲胶、5批鹿角胶中,有1批阿胶、1批龟甲胶、2批鹿角胶可疑样品中检出新阿胶。结论:所建立方法操作简便,专属性强,灵敏度高,重复性良好,可用于阿胶、龟甲胶和鹿角胶中掺伪成分猪皮源的检测。

柱前衍生化-HPLC法同时测定不同商品规格鹿茸片中15种氨基酸的含量

目的:建立RP-HPLC法同时测定不同规格鹿茸片中15种氨基酸的含量,根据氨基酸的含量对鹿茸片进行质量评价和等级区分。方法:样品以异硫氰酸苯酯进行柱前衍生化;采用C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),以0.1mol·L-1醋酸钠(醋酸调pH至6.5)-乙腈(93∶7)为流动相A,乙腈-水(4∶1)为流动相B,梯度洗脱,柱温为43℃,检测波长为254 nm。结果:15种氨基酸线性方程相关系数均大于0.999 4,平均回收率均在96.9%~103.2%,RSD均小于3.0%;50批样品中,蜡片中氨基酸含量最高,含量为44.56%~54.09%;骨片氨基酸含量最低,含量为29.53%~33.95%;粉片氨基酸含量为40.00%~45.33%,血片氨基酸含量为32.88%~39.96%。结果表明等级高的鹿茸片中氨基酸含量高于等级低的鹿茸片中氨基酸含量。结论:该方法可用于鹿茸饮片氨基酸的含量测定及为不同规格鹿茸饮片的质量等级评价提供数据支持和理论依据。