天然麝香抗炎蛋白质的研究Ⅰ.Mu-a-1的分离纯化及其部分性质的鉴定

天然麝香粉(Musk)经乙醚,乙醇脱脂后,再经4℃水冷渗,水提液低温旋转浓缩,冻干,得到的冻干粉先后经过Sephadex G-25,Sephadex G-50,和Sephadex G-100等柱层析,得到抗炎有效部分Mu-a,将此部分再通过DEAE-Sephadex A-25和Sephadex G-150等柱层析,得到一抗炎有效蛋白质,命名为Mu-a-1。经聚丙烯酰胺凝胶电泳及超薄等电聚焦电泳,以高碘酸-schiff试剂及Coomassie R250染色和分子筛层析,均显示一条区带和一均匀吸收峰。以蒽酮试剂法测定Mu-a-1含糖量在40％左右。经氨基酸自动分析仪测定Mu-a-1是由16种氨基酸组成,其中Glu,Asp等酸性氨基酸居多,等电点(PI=3-4),为酸性糖蛋白。最小蛋白质碎片含374个氨基酸残基。用凝胶过滤法估测其分子量在20万左右。药理实验表明Mu-a-1对巴豆油引起小鼠耳部炎症具有明显的抗炎作用,平均7.5mg/kg剂量下,对炎症抑制率为72.3％,P<0.001。

露峰房抗炎蛋白中多肽成分的分离、纯化及性质研究

目的：从药用露峰房（Ｎｉｄｕｓｖｅｓｐａｅ）筛选出的具有较好的抗炎、免疫活性蛋白粗品———ＮＶ３中分离纯化，得到一多肽类化合物，命名为ＮＶＰＰ１，并检测其理化性质。方法：以离子交换层析、排阻层析、ＨＰＬＣ等进行分离纯化，并以高效凝胶排阻色谱（ＨＰＳＥＣ）、高效毛细管等电聚焦电泳（ＩＥＦＨＰＣＥ）、亲水性分子排阻液相ＰｒｏｔｅｉｎＰａｋＴＭ６０柱、氨基酸分析、ＤＮＳＣｌ法的Ｎ末端测定检测其理化性质。结果：高效凝胶排阻色谱（ＨＰＳＥＣ）及高效毛细管等电聚焦电泳（ＩＥＦＨＰＣＥ）检测其皆为单峰。亲水性分子排阻液相ＰｒｏｔｅｉｎＰａｋＴＭ６０柱测得其分子量为７．０７９ｋＤ。ＩＥＦＨＰＣＥ确定其ＰＩ值为４．０８。紫外吸收最高峰为２７４ｎｍ。氨基酸分析表明其含有近５６个氨基酸残基，其中谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸较多，还有天冬氨酸等，是一酸性多肽。末端测定表明其Ｎ末端封闭。结论：酸性多肽ＮＶＰＰ１是从药用露蜂房抗炎蛋白粗品中首次分离得到的成分。

中药露蜂房水溶性蛋白NV-PP-4的分离纯化及部分理化性质鉴定

目的 :从中药露蜂房抗炎活性有效部分纯化得到一酸性蛋白NV PP 4 ,并鉴定了其部分理化性质。方法 :用SephadexG 50、DEAE SephadexA50、羟基磷灰石等柱层析及HPLC等方法纯化 ,并以HPLC、毛细管等电聚焦电泳 ,氨基酸自动分析等手段 ,鉴定其理化性质。结果 :NV PP 4经不同的HPLC柱和不同的流动相匀表明为一对称单一峰、毛细管等电聚焦电泳呈单一染色带。亲水型分子排阻HPLC测定其分子量为 8 71 1KD ,毛细管等电聚焦电泳测定其等电点为 1 79,氨基酸分析表明NV PP 4含有 87个氨基酸残基 ,其中Gly、Asp、Pro、Glu等含量较多。结论 :NV PP 4是从中药露蜂房中首次分离得到的酸性蛋白质成分。

赤芝孢子粉化学成分研究

赤芝孢子粉是灵芝属真菌赤芝(Ganodorma luciclum)成熟后的孢子体,用其制成的灵芝肌生注射液早已成为正式商品,被用于治疗多种疑难病症,据报道从赤芝孢子粉中已得到的生物碱类成分有:胆碱,甜菜碱[候翠英,等.植物学报,198830(1):66]。我们在对赤芝孢子粉醇提物水溶部分的化学成分研究中,首次分离得到又一生物碱类成分——硫组氨酸甲基内铵盐(奥列赫夫A.生物碱化学.1960.582),并做了它的各种光谱分析,通过X-射线衍射第一次确定了它的绝对构型,为灵芝化学成分的研究补充了新的资料和数据。

蜈蚣碱性蛋白SSmp-d的分离纯化及其部分理化性质的鉴定

少棘巨蜈蚣（ＳｃｏｌｏｐｅｎｄｒａｓｕｂｓｐｉｎｉｐｅｓｍｕｔｉｌａｎｓＬ．Ｋｏｃｈ）经９５％乙醇脱脂后，再经４℃水冷渗，水提液低温旋转浓缩，冻干，得到的冻干粉先后经过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱，等电聚焦制备电泳，再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０柱，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱，最后经ＨＰＬＣ制备得到一个纯的碱性蛋白，命名为ＳＳｍｐ－ｄ．该蛋白经ＨＰＬＣ、超薄等电聚焦电泳检验是均一的．采用ＨＰＬＣ和Ｐｒｏｔｅｉｎ－ＰａｋＴＭ１２５柱测定其分子量为２４．６４ｋＤ．ＩＥＦ－ＨＰＣＥ显示其等电点为９．２７．氨基酸分析表明ＳＳｍｐ－ｄ含较多的Ａｒｇ、Ｌｙｓ等碱性氨基酸，另外还含有较多的Ａｌａ、Ｌｅｕ．使用蛋白质自动序列分析仪测定了ＳＳｍｐ－ｄＮ端的１１个氨基酸，序列为ＮＨ３＋－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ．