CT灌注成像在蛛网膜下腔出血后脑微循环改变中的临床应用研究

目的用CT灌注成像(CTperfusion,CTP)来探讨蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后脑微循环的改变及其与临床表现、脑血管痉挛(cerebral vasospasm,CVS)的关系。方法收集85例SAH患者和35例正常人作为前瞻性研究对象。对每例研究对象进行CTP检查,并记录其CTP相关参数-脑血流量(cerebral blood flow,CBF)、脑血容量(cerebral blood volume,CBV)及平均通过时间(meantransittime,MTT)。将研究对象分为正常组和SAH组,CVS组和非CVS(non-cerebral vasospasm,nCVS)组,症状型CVS组(symptomatic cerebral vasospasm group,sCVS)和无症状型CVS(asymptomatic cerebral vasospasm group,asCVS)组,Hunt-HessⅠ～Ⅱ级组和Ⅲ～Ⅴ级组,比较各组之间CTP参数的差异。结果SAH组的CBF值低于正常组,MTT值较正常组延长(P<0.05)。CVS组、sCVS组和Hunt-HessⅢ～Ⅴ级组的CBF值分别较nCVS组、asCVS组和Hunt-HessⅠ～Ⅱ级组的CBF值下降,MTT值较后者有延长(P<0.05)。7例MTT值为6.31～12.72s的患者在病程中出现迟发型缺血性神经功能障碍(delayed ischemic neurological deficit,DIND),其中2例偏瘫,1例死亡。结论SAH后脑微循环血流动力学的改变和临床表现及CVS有一定的联系,并且能够通过CTP来检查、发现。

膜粘连蛋白Ⅱ通过保护血脑屏障促进小鼠颅脑创伤后早期神经功能的恢复

目的评估外源性重组膜粘连蛋白Ⅱ(annexin 2,A2)对创伤性颅脑损伤后血脑屏障以及早期神经功能预后的影响,探讨A2蛋白作为脑创伤治疗靶点的可能性。方法在成年雄性小鼠上建立控制性皮质损伤模型(controlled cortical impact,CCI),检测伤前与伤后不同时间点伤侧半球脑组织中内源性A2蛋白的表达。随后,小鼠CCI伤后通过尾静脉注射重组人源性A2蛋白,并检测血脑屏障通透性、大脑半球组织含水量、紧密连接蛋白表达量、海马区神经元数量、伤灶体积及早期行为学改变。结果从CCI后3 d起,A2蛋白表达明显增高,并在7 d时达到高峰(P<0.05),此后蛋白表达逐渐下降,21 d恢复到基值;伤前内皮细胞几乎不表达A2蛋白,伤后在伤侧部分内皮细胞表达A2蛋白。在伤后2 h给予重组A2蛋白能显著降低血脑屏障通透性从而降低脑组织中Evans蓝(Evans blue,EB)渗出量(P<0.05),增加ZO-1蛋白表达(P<0.05),减少伤后CA1和CA3区神经元丢失,CA1区和CA3区平均神经元存活数量分别为159.5和131,6,均显著高于对照组(P<0.05),并促进伤后7 d内运动功能康复(P<0.05)。能够减少致伤后脑组织含水量,但不具有统计学差异(P>0.05),两组间伤灶体积也无统计学差异(P>0.05)。结论在创伤性颅脑损伤早期,给予重组人A2蛋白能提高内皮细胞ZO-1合成,保护血脑屏障,减轻神经组织继发性损伤,促进伤后神经功能恢复。

颅内动脉瘤夹闭术后颅内压波形参数的临床价值

目的分析颅内压波形参数与患者术后早期临床表现的相关性,探讨颅内动脉瘤夹闭术后颅内压波形参数的临床价值。方法收集2016年11月至2017年7月重庆医科大学附属第一医院神经外科重症监护室颅内动脉瘤夹闭术后使用颅内压(intracranial pressure,ICP)监测的55例患者的临床资料。根据患者ICP植入术后24 h内的ICP数据,使用领域平均振幅算法计算2个ICP波形参数:平均ICP值(mean intracranial pressure,MICP)和平均ICP振幅值(mean intracranial pressure wave amplitude,MWA)。分析MICP、MWA与患者术前病情及术后早期临床表现的关系。结果 (1)患者术前病情较轻者,其术后MICP、MWA越低。(2)根据术后格拉斯哥评分(glasgow coma score,GCS)将患者分为3组(GCS 3~8分,GCS 9~12分,GCS 13~15分),各组间MICP和MWA差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)术后GCS评分与MICP(r=-0.619,P<0.05)、MWA(r=-0.782,P<0.05)呈负相关,且MWA与GCS评分相关性更强。结论 ICP波形参数MICP、MWA能有效地反映颅内动脉瘤夹闭术后早期患者的神经功能障碍。

aSAH后早期凝血功能变化与迟发性脑缺血的相关性研究

目的:探讨动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aneurysmalsubarachnoid hemorrhage,aSAH)后早期凝血功能各参数变化与迟发性脑缺血(delayed cerebral ischemia,DCI)的相关性,为临床上早期预测及干预迟发性脑缺血提供依据。方法:回顾性分析77例aSAH患者发病24 h内的凝血象和血栓弹力图(thromboelastography,TEG)参数,同期收集22例未破裂动脉瘤(unruptured intracranial aneurysm,UIA)患者作为对照。根据是否发生DCI将aSAH患者分为DCI组(n=38)和No-DCI组(n=39),比较2组间一般资料、凝血象和TEG参数的差异,多因素logistic回归分析确定危险因素。结果:与No-DCI组比较,DCI组患者D-D、FDP、Fib、α角、MA值明显升高(P=0.000、0.000、0.000、0.043、0.042),R和K值明显降低(P=0.002、0.036);多因素分析显示D-D(OR=9.739,95%CI=1.896~50.042,P=0.006)、K值(OR=0.026,P=0.028,95%CI=0.01~0.681)为DCI的独立危险因素。结论:aSAH患者早期D-D、FDP、Fib、α角、MA值明显升高,R、K值下降,与DCI的发生存在相关性,其中D-D与K值为aSAH后发生DCI独立危险因素。因此,早期监测凝血功能有助于预测DCI的发生,并指导相应处理。

甲胎蛋白单克隆抗体制备及微粒操控检测方法建立

目的制备甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)单克隆抗体并鉴定其生物学特性,以该抗体初步建立基于微粒操控技术的AFP抗原快速检测方法。方法以重组表达的AFP蛋白为免疫原,腹腔免疫8周龄雌性Balb/c小鼠。取4次免疫后小鼠的脾细胞,以PEG1500为诱导剂与骨髓瘤细胞进行融合,筛选分泌AFP抗体的单克隆杂交瘤细胞株,将该细胞株注射Balb/c小鼠并制备AFP单抗。将制备的AFP单抗固定于微电极芯片表面,通过交流动电效应加速AFP抗原富集到微电极芯片并与AFP单抗发生特异性的免疫结合反应,芯片连接阻抗仪即可监测免疫反应情况,初步建立基于交流动电效应与阻抗免疫传感相结合的AFP抗原检测方法,并对该方法进行评价。结果共筛得7株能稳定分泌抗AFP单抗的杂交瘤细胞株,诱导的小鼠腹水型抗体效价达到1∶2048000以上。建立了基于微粒操控技术的AFP抗原快速检测方法。检测芯片的最佳清洗方式是:异丙醇超声清洗10 min→无水乙醇超声清洗10 min→超纯水超声清洗10 min;AFP抗体的最佳包被条件是10μg/ml、37℃、1 h。微粒操控技术检测AFP抗原加标血清的下限达1 ng/ml,肝癌血清样品的检出阳性率达95%,特异性(检出阴性率)达96.7%。结论制备了特异性、高效价的AFP单克隆抗体,以此AFP抗体建立的微粒操控技术具有良好的特异性、重复性及较高的灵敏度,无复杂的数据处理及反复清洗步骤,以较低的成本实现血清肝癌标志物AFP在1 min内快速完成现场检测,具有较高的临床应用价值,为肝癌的早期诊断提供了一种新的检测技术。

神经外科重症监护病房住院医师规范化培训教育的思考

重症神经外科是神经外科住院医师规范化培训的难点和重点之一。通过对重庆医科大学附属第一医院神经外科重症监护病房的住院医师进行以急救技能培训、理论与实践相辅相成的多模态病例分析、神经影像学及电生理知识的拓展、手术操作及围手术期管理的专科知识培训、定期病例讨论等方式构成的系统性、规范化的培训,他们的临床思维更加地成熟,对神经外科重症监护病人管理方法的掌握时间明显地缩短,参与临床实践的主动性也较前明显地增加,对神经外科患者围手术期管理的方法有了更深刻的认识,有效地提升了神经外科重症监护室的带教成效。

长链非编码RNA-核富集转录本1对创伤性脑损伤小鼠的神经保护作用及其可能机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录本1(NEAT1)的表达对创伤性脑损伤(TBI)后神经功能和神经元凋亡的影响及其可能机制。方法将90只C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假手术组、空白对照组、空载病毒1组和2组及NEAT1上调组和NEAT1下调组,每组15只。构建小鼠控制性皮层撞击(CCI)模型模拟TBI状态,并通过侧脑室内注射腺病毒载体对NEAT1水平进行干预。采用神经功能缺失评分(NSS)及Morris水迷宫试验评估空白对照组、NEAT1上调组和NEAT1下调组小鼠伤后1周内及14~21d时神经功能变化。Western blot检测空白对照组小鼠皮层含死亡结构域的p53诱导蛋白1(Pidd 1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-2、caspase-9和caspase-3在伤后6 h、1,3,7 d的表达。TUNEL法检测空白对照组、NEAT1上调组和NEAT1下调组伤后第3天小鼠神经元凋亡情况及免疫荧光半定量分析Pidd1的表达及定位。Western blot检测假手术组、空白对照组、空载病毒组、NEAT1上调组及NEAT1下调组小鼠伤后第3天Pidd1、caspase-2、细胞色素c(Cyt c)和caspase-3蛋白表达量。结果与空白对照组[(4.9±1.0)分]比较,NEAT1上调组伤后第1天NSS[(3.5±0.7)分]显著降低(P<0.01),NEAT1下调组[(5.0±1.5)分]显著升高(P<0.01)。Morris水迷宫试验显示,与空白对照组[(20.1±5.6)s]比较,伤后第19天NEAT1上调组寻找平台时间[(10.9±2.8)s]缩短(P<0.05),NEAT1下调组寻找平台时间[(30.7±6.2)s]延长(P<0.01)。Western blot提示,空白对照组Pidd1、caspase-2、caspase-9和caspase-3在伤后第3天表达明显升高(P<0.01)。通过TUNEL得到伤后第3天NEAT1上调组神经元凋亡率[(18.0±2.7)%]明显下降,而NEAT1下调组[(63.0±8.6)%]明显升高(P<0.01)。伤后第3天免疫荧光提示,与空白对照组比较,NEAT1上调组神经元胞质中Pidd1蛋白表达[(22.7±2.2)%]减少(P<0.01),而NEAT1下调组[(72.7±7.0)%]显著增加(P<0.01)。伤后第3天Western blot显示,与空白对照组比较,NEAT1上调组Pidd1(0.5±0.0)、capsase-2(0.3±0.0)、Cyt c(0.5±0.0)及caspase-3(0.4±0.0)的表达明显减少(P<0.01);而NEAT1下调组结果则完全相反。结论TBI后NEAT1通过调控Pidd1-caspase-2-Cyt c,减少caspase-3活化,抑制神经元凋亡,这可能是TBI后NEAT1保护神经功能的机制之一。