白细胞介素-24基因联合三氧化二砷促进肾癌Ketr-3细胞凋亡

目的观察白细胞介素-24基因(IL-24)联合三氧化二砷(As_(2)O_(3))对肾癌Ketr-3细胞的杀伤作用。方法细胞传代后分为4组:PBS组(磷酸盐缓冲液)、As_(2)O_(3)组(As_(2)O_(3)5 mg/L)、IL-24组(pCDNA3.1-IL-243μg)、联用组:(pCDNA3.1-IL-24=3μg+As_(2)O_(3)=5 mg/L),处理细胞48 h后进行检测。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测4组细胞IL-24蛋白分泌表达的变化;单细胞凝胶电泳实验观察4组细胞的DNA断裂情况;微核实验观察4组细胞染色体断裂情况;流式细胞术检测4组细胞的凋亡情况。结果ELISA结果显示:与PBS组比较,IL-24组和联用组IL-24表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);单细胞凝胶电泳、微核实验显示:与As_(2)O_(3)组相比,联用组DNA与染色体损伤增加,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术显示:与PBS组相比,As_(2)O_(3)组、IL-24组、联用组的细胞凋亡率显著增强(P<0.05),其中联用组凋亡率增强更为明显(P<0.05),差异均有统计学意义。结论IL-24联合As_(2)O_(3)有协同作用,可进一步增强对肾癌Ketr-3细胞的杀伤作用。

敲减缺氧诱导因子-2α联合索拉非尼对肾癌细胞促凋亡作用的研究

目的探讨敲减缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)与索拉非尼联用的促肾癌凋亡作用。方法OS-RC-2细胞和786-O细胞在常氧或缺氧下,采用蛋白质印迹技术(Western blot)检测HIF-1α、HIF-2α蛋白表达;在缺氧下,将两种细胞分为对照组、索拉非尼组、Control shRNA组、索拉非尼+HIF-1αshRNA组、索拉非尼+HIF-2αshRNA组,用Western blot检测HIF-1α、HIF-2α、Caspase3蛋白表达,用流式细胞仪及TUNEL方法检测细胞凋亡率。结果HIF-1α和HIF-2α蛋白缺氧时均比常氧状态下升高。缺氧时,与对照组相比,索拉非尼可抑制两种细胞HIF-1α蛋白表达,促进HIF-2α蛋白表达。流式细胞凋亡率:与对照组比较,索拉非尼可促使两种细胞凋亡增加(P<0.05);与Control shRNA组比较,索拉非尼+HIF-2αshRNA组细胞凋亡增加,差异有统计学意义(P<0.05)。TUNEL凋亡率:与对照组比较,索拉非尼可促使两种细胞凋亡增加(P<0.05);与Control shRNA组比较,索拉非尼+HIF-2αshRNA组细胞凋亡增加,差异有统计学意义(P<0.05)。Pro-Caspase3表达下调,Cleaved Caspase3蛋白表达上调。结论缺氧环境下,敲减HIF-2α后与索拉非尼联用可通过Caspase3蛋白对肾癌细胞有协同抗凋亡作用。

过表达IGFBP3基因抑制肾癌细胞增殖及侵袭促进凋亡

目的研究过表达胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)基因对肾癌细胞增殖、迁移能力及凋亡情况的影响。方法分别将肾癌细胞系ACHN和786-O分为Control组(转染pSectag-A空白质粒)及IGFBP3组(转染pSectag-IGFBP3质粒)。用Western blot法检测上述2种细胞上清液中IGFBP3蛋白的表达情况。转染48h后,采用MTT法、流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况。采用划痕实验检测细胞的迁移情况。采用Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果转染pSectag-IGFBP3质粒可显著提高ACHN及786-O细胞中IGFBP3的蛋白表达水平。过表达IGFBP3基因后,与Control组相比,IGFBP3组细胞的增殖能力减弱,凋亡率显著增加,差异有统计学意义(均P<0.05);IGFBP3组细胞的迁移和侵袭能力明显减弱,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论过表达IGFBP3可以抑制肾癌细胞的增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡。

多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1抑制剂对三氧化二砷在肾癌细胞损伤中的增敏作用

目的探讨多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1(PARP-1)抑制剂AG14361对三氧化二砷(As2O3)杀伤肾癌细胞的增敏作用及机制.方法应用噻唑蓝(MTT)法、克隆形成实验、单细胞凝胶电泳、微核试验、流式细胞术检测As2O3联合AG14361对肾癌细胞的细胞毒作用、遗传毒性作用、凋亡作用.结果克隆形成率[联用组比As2O3组:OS-RC-2,(43.23±3.12)%比(62.35±2.69)%;786-O,(36.23±3.12)%比(58.31±2.42)%;HK-2,(56.32±3.46)%比(68.92±3.12)%],差异有统计学意义(P<0.05);单细胞凝胶电泳、微核试验显示,联用组与As2O3组比较,DNA与染色体损伤增加,差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞术显示:联用组与As2O3组比较,显著增强肾癌细胞的凋亡率[(OS-RC-2,(59.90±86.75)%比(17.00±3.61)%;786-O,(41.47±4.11)%比(15.17±1.99)%;HK-2,(30.43±4.92)%比(13.17±3.26)%].结论AG14361对As2O3诱导的肾癌细胞的杀伤作用具有增敏作用,拟通过抑制单、双链DNA损伤修复,继而引起染色体损伤.