LINC 01296/miR-1255 b-5 p促进非小细胞肺癌进展的研究

目的探究下调LINC 01296的表达对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)进展的影响,以及LINC 01296调控miR-1255 b-5 p在NSCLC发生发展中的分子机制。方法培养6种NSCLC细胞系;实时荧光定量聚合酶链反应法检测LINC 01296在NSCLC细胞系以及在48例患者样本中表达水平的高低;细胞计数试剂盒-8法检测稳转细胞株的细胞增殖情况;克隆形成实验检测细胞的生长以及增殖状况;划痕实验检测细胞的迁移情况;FITC-Annexin-V法检测细胞凋亡;动物实验,包括裸鼠尾静脉和皮下瘤注射,观察癌细胞的转移以及成瘤情况;双荧光素酶报告基因实验验证LINC 01296与miR-1255 b-5 p之间存在靶向结合关系。结果LINC 01296在NSCLC中高表达;LINC 01296基因敲低抑制NSCLC细胞生长、迁移;LINC 01296敲低抑制体内瘤体的生长和转移;LINC 01296与miR-1255 b-5 p的之间存在海绵吸附作用;LINC 01296与miR-1255 b-5 p的表达呈负相关。结论LINC 01296作为NSCLC的促癌分子,通过抑制miR-1255 b-5 p的表达水平,促进了NSCLC的发展。

tRNA来源的小RNA(tRF)的生物学功能及在癌症中的作用

来源于tRNA的RNA片段(tRNA-derived Fragments,tRFs)是一种非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA),长度约为14-35 nt。tRFs源自前体tRNA(Pre-tRNA)或成熟tRNA,有如下几种主要类型:tRF-1,tRF-2,tRF-3,tRF-5和i-tRF,其在生命进程中具有调节基因表达、抑制蛋白质翻译等作用机制,并且在肿瘤诊治中也可充当生物标志物、治疗靶点等。本文就tRFs的生物学功能及其在癌症中的研究进展进行系统的综述。

一种新型靶向Frizzled7抗体的筛选及其人源化设计

目的:获得一种新型靶向人Frizzled7(Fzd7)蛋白的人源化抗体。方法:首先用重组人Fzd7蛋白(rh Fzd7)免疫BALB/c小鼠,获得鼠源抗Fzd7抗体(SHH002),并用生物膜层干涉技术(biolayer interferometry,BLI)检测SHH002的亲和力;测序获得SHH002可变区序列(V区),通过与Human Germline序列库比对选择人源化设计模板,利用Discoverystudio软件对SHH002进行人源化设计,获得人源化抗Fzd7抗体SHH002-hu,并对SHH002-hu的纯度和亲和力进行验证,最后通过MTT实验初步验证其抗肿瘤活性。结果:杂交瘤筛选技术获得高亲和力(亲和力常数KD<1.0×10^-12mol·L^-1)鼠源抗Fzd7抗体SHH002;SHH002 V区序列比对Human Germline序列库,选择同源性最高的IGHV1/IGKV1作为人源化设计模板,保留对抗体结构稳定性起关键作用的鼠源氨基酸,将非关键的位点突变为人源氨基酸,获得人源化程度高达98%的人源化抗体SHH002-hu;分子排阻色谱(SEC-HPLC)检测其纯度>95%,BLI法验证其KD<1.0×10^-12mol·L^-1,MTT实验表明SHH002-hu可有效抑制三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞的体外增殖。结论:本实验获得了高度人源化且高亲和力的靶向Fzd7抗体SHH002-hu,为多种恶性肿瘤提供一种全新的靶向治疗候选方案。