猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的研制

本研究选用国内分离的猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_1a株作为疫苗用毒株。利用转瓶细胞培养技术 ,在Marc_145细胞上大量增殖了较高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒。该病毒经甲醛灭活后 ,用等量的油佐剂乳化制成安全性好、保护率高的猪繁殖与呼吸综合征油佐剂灭活疫苗。经实验室试验和区域性跟踪试验证明 ,该疫苗具有免疫保护期长 ,保护率高、安全稳定等优点。

检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA方法的建立

本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)。经三氯_三氟乙烷处理后 ,作为ELISA试验的标准抗原 ,并建立了检测PRRSV抗体ELISA方法。该方法与IFA、IPMA和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验 ,表明该方法具有敏感性高、特异性好的特点 ,是一种快速准确检测PRRSV抗体的方法。间接ELISA方法在敏感性上要优于IFA和IPMA。

猪繁殖-呼吸综合征活疫苗对仔猪的安全性试验

本试验用猪繁殖-呼吸综合征(PRRS)活疫苗和国内分离的PRRS强毒CH-1a株接种PRRS阴性的断奶仔猪,分别在接种后的3、7、14d各剖杀1头,取各脏器分别做冰冻切片和病理切片观察。用间接免疫荧光法检测各脏器PRRS病毒的分布。结果表明,PRRS活疫苗在免疫初期,抗原主要分布在脾脏、淋巴结,其次是肾脏和肺脏,少见于肝脏和心脏,第14d时在脾、淋巴结和肾脏有一定量的抗原,而肺脏相比则数量很少,肝脏和心脏未检到PRRS病毒抗原的存在,表明接种PRRS活疫苗随着时间的推移抗原分布呈下降趋势。而强毒抗原分布以脾脏最多,依次是肾脏、肺脏、淋巴结、肝脏、心脏,接种后第14d仍能在各脏器检到PRRS病毒抗原。病理组织学检测结果表明,活疫苗产生以下颌淋巴结、脾脏增生为特征的免疫应答,组织损伤轻微,对肺的病变较少,且仔猪生长良好。强毒则引起以大面积的肺泡隔增宽为特点的间质性肺炎和微循环障碍的病理变化,淋巴小结、脾脏滤泡发生崩解与周围界限不清,个别淋巴细胞核浓缩,组织损伤严重。本试验表明弱毒疫苗对仔猪是安全的。

应用重组N蛋白-ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的研究

利用昆虫杆状病毒表达系统表达的猪繁殖与呼吸综合征重组 N蛋白作为抗原 ,包被聚苯乙烯微量反应板 ,建立了猪繁殖与呼吸综合征重组 N蛋白 - EL ISA诊断方法。试验证明 ,该方法对其他 8种猪疫病阳性血清均无交叉反应 ,对标准阳性样品的检出率为 10 0 %。具有敏感性高。

应用杆状病毒系统高效表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因

将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_la株囊膜糖蛋白 (GP5 )基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHisB中 ,与杆状病毒线性DNA(Bac_N_BlueTMDNA)共转染昆虫细胞sf9,经过三轮蚀斑纯化后 ,获得重组杆状病毒rBac_GP5。用该重组病毒感染sf9细胞后 ,应用间接免疫荧光试验、SDS_PAGE和Westernblot检测表明 ,GP5基因在杆状病毒系统中获得了高效表达 ,表达产物因糖基化程度差异 ,表观分子量有 2 2、2 5和 30kDa三种总计约占细胞蛋白总量的 2 6 .4%。

猪生殖-呼吸道综合征国内分离毒株的病毒纯化及其结构蛋白分析

本研究主要对猪生殖呼吸道综合征（ Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ） 国内分离毒株（ Ｃ Ｈ Ｉａ） 进行了病毒纯化及其结构蛋白的分析。选用聚乙二醇（ Ｐ Ｅ Ｇ６０００） 沉淀和差速离心法粗提了经 Ｍａｒｃ１４５ 细胞系增殖的猪生殖呼吸道综合征病毒（ Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ） 。并采用非线性蔗糖密度梯度离心法纯化了 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ， 经免疫电镜观察纯化病毒， 发现有较多的胶体金颗粒吸附在直径为４２ ～７８ｎｍ 的病毒粒子周围。经 Ｄｏｔ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 测定纯化病毒的滴度可达１ １６００ 以上， 并利用 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 两种方法对国内分离毒株（ Ｃ Ｈ Ｉａ） 与欧洲型（ Ｌｅｌｙｓｔａｄ） 、美洲型（ Ｖ Ｒ２３３２） 等参考毒株的病毒结构蛋白组成和部分抗原特性进行了初步的研究。测得国内分离毒株主要结构蛋白的分子量为１４５ Ｋ Ｄ，１９２ Ｋ Ｄ 和２６３ Ｋ Ｄ， 并均能被 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 的高免血清识别， 这与国外的同类报道很相似。

猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离毒株GP3、GP5和N蛋白抗原性分析

本研究利用抗美洲型病毒株的GP3、GP5和N蛋白的11株单克隆抗体,对国内分离毒株的GP3、GP5和N蛋白的抗原表位进行鉴别,并同国外参考毒株VR_2332、NVSL(美洲型,B型)、Lelystad(欧洲型,A型)及商品化疫苗毒的抗原多样性进行了比较与分析。通过对免疫过氧化物酶单层试验改进,建立了免疫荧光单层试验(IFMA),并采用该方法对国内分离毒株的GP3、GP5和N蛋白的抗原特性进行了鉴定,研究结果发现国内分离毒株和北美洲型VR_2332株的抗原性比较相近,而与欧洲型LV株的GP3、GP5的抗原性差异较大。根据N蛋白的单克隆抗体(ISU15A_E)与国内分离毒株的反应谱,按照美国L.Yang等[3]分类方法,本试验中的国内分离毒株均属于I组。

猪繁殖与呼吸综合征重组核衣壳蛋白(N)-ELISA诊断方法的建立与应用

将猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离株ＣＨ－ｌａ的核衣壳蛋白基因定向克隆到ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ转移载体ＰＨ启动子下游，与苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒线性化ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞。获得能隐定表达核衣壳蛋白（Ｎ 蛋白）的重组杆状病毒。利用昆虫杆状病毒表达系统表达的猪繁殖与呼吸综合征病毒重组Ｎ蛋白作为抗原，包被聚苯乙烯微量反应板，建立了猪繁殖与呼吸综合征重组Ｎ蛋白－ＥＬＩＳＡ诊断方法。试验证明，该方法对其他８种猪疫病阳性血清均无交叉反应，对标准阳性样品的检出率为１００％，具有敏感性高、特异性强的特点。

合理选择抗菌药治疗猪细菌性呼吸道疾病的原则

目前猪细菌性呼吸道疾病已成为猪生产过程中的一大难题。抗菌药在预防和控制该类疾病中发挥重要作用 ,而充分掌握宿主 (猪 )、致病菌、抗菌药物三者的基本情况和相互关系是合理使用抗菌药治疗猪呼吸道病的前提。

猪繁殖与呼吸综合征及其在我国的现状与对策

一、猪繁殖与呼吸综合征的历史回顾 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respi-ratory syndrome, PRRS)是八十年代末期国际上出现的一种新的猪病,首先发现于欧美,随后传播至世界主要养猪国家。该病主要以引起怀孕后期母猪的早产、死胎或木乃伊;仔猪感染后成活率急剧下降;育成猪感染以呼吸道症状为主。1989年美国首先报导该病的发生。

用活载体疫苗诱导动物黏膜免疫的研究进展

动物传染病是危害动物健康，给畜牧业造成重大经济损失的主要原因，免疫预防是减少损失最经济最有效的手段之一。随着新技术的应用，活载体、亚单位、合成肽以及核酸疫苗等新型疫苗也相继问世。在新型疫苗中活载体疫苗由于其独特优势备受关注，在诱导黏膜免疫方面也最具优势。本文主要介绍黏膜免疫的基本特点及活载体疫苗诱导动物黏膜免疫的研究进展。

3Rs在免疫制品的生产与质量控制中的应用

在生物医学研究中对实验动物使用的关注促进了替代方法的发展。一种替代可被定义为（1）采用非动物方法来替代动物模型；（2）减少用于特定目的实验动物的数量；或（3）优化操作程序的任何方法或策略。替代、减少和优化的3Rs原则从上世纪70年代开始引入到生物医学研究中，目前已经成为欧洲乃至全球实验动物法规都共同遵守的原则。

肺腺癌中可变剪接调控因子KHSRP调控的差异剪接基因分析

背景与目的:可变剪接在细胞增殖、生长、凋亡及分化等复杂的蛋白质功能调控中发挥着至关重要的作用,能参与包括肿瘤在内的多种疾病的发生、发展过程,目前大多数可变剪接调控因子的功能及其作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨KH型剪接调控蛋白(KH-type splicing regulatory protein,KHSRP)在肺腺癌中的差异剪接靶基因及靶基因的表达与患者预后及免疫细胞功能的相关性。方法:通过高通量可变剪接测序,筛选KHSRP下游差异剪接靶基因。通过肿瘤免疫评估资源(Tumor IMmune Estimation Resource,TIMER)和阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析门户(the University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal,ULCAN)分析KHSRP下游差异剪接靶基因在肺腺癌中的表达。通过Kaplan数据库分析KHSRP下游差异剪接靶基因的表达与患者预后的相关性。通过TIMER免疫模块分析KHSRP下游差异剪接靶基因与免疫细胞功能的相关性。结果:NUMB、ADD3及LIMCH1为KHSRP的下游关键可变剪接靶基因。NUMB、ADD3及LIMCH1在肺腺癌肿瘤组织中均呈低表达,其低表达者预后不良。NUMB、ADD3及LIMCH1与免疫细胞功能呈正相关。结论:在肺腺癌中,NUMB、ADD3及LIMCH1为KHSRP的差异剪接靶基因,且NUMB、ADD3及LIMCH1低表达会导致预后不良,并且与免疫细胞功能呈正相关。

二磷酸组织胺诱发奶牛蹄叶炎病变的病理学研究

本文给临床健康 ,无蹄病成年奶牛 8头皮下注射二磷酸组织胺 (150 μg/kg活重 ) ,与对照组 5头同期比较。给药前和屠宰前测量两组奶牛蹄前壁长度 ;屠宰后 33天 ,对两组奶牛蹄真皮及表皮组织的组织学结构及病理学变化进行了观察 ,结果显示 :实验组奶牛蹄角质的生长速度明显快于对照组 ,屠宰时测量 ,两组奶牛蹄前壁的长度差异显著 (P <0 0 5)。组织病理学研究表明 :正常蹄表皮组织的角化程度适中 ,没有完全角化的小叶远端有隔 ,隔由生角质物质及棘细胞、颗粒细胞构成 ,不论真皮小叶还是角小叶均无次级小叶。真皮内虽偶有细胞浸润 ,但未见血管增生及血栓形成。实验组奶牛角小叶内的隔大部分消失 ,表现过度角化。真皮小叶和角小叶有不同程度的分离 ,小叶长度增加而宽度变窄。真皮组织最明显的一致性病变是血管的变化 :毛细血管和小静脉明显扩张 ,血管内的血栓再通常可见到 ,真皮小叶基部及网状层有许多新生毛细血管 ,某些血管内有陈旧性血栓 ,小动脉数量增多 ,管壁增厚十分明显 ,表现典型的动脉硬化。真皮小叶基部和毛细血管网周围有单核细胞浸润 ,真皮内遍布新生结缔组织和肉芽组织。这些病理学变化与慢性蹄叶炎的特征相一致。本试验对奶牛蹄叶炎的发病机理进行了探索 。

超声引导下左心室内注射人肺癌细胞建立骨转移小鼠模型

目的通过超声引导建立心内注射人肺癌细胞骨转移小鼠模型。方法在超声引导下,将人肺癌A549和NCI-H1299细胞分别注入NOD/SCID和BALB/c-nu/nu小鼠左心室,结合小动物活体成像、X线和小动物Micro-CT等多种小动物影像学方法观察模型建立和骨转移发生情况。采用HE染色法进行肿瘤组织的病理学观察。结果在超声引导下进行心内注射肺癌细胞时动物全部存活。小动物活体成像显示小鼠的中轴骨和四肢骨位置均有发光区域。X线及小动物Micro-CT对小鼠全身骨骼进行三维重构,显示小鼠胫骨平台和肩关节等部位均出现明显的骨质和骨膜缺损及破坏,骨正常组织形态消失,呈溶骨性改变,其影像学表现符合肿瘤性骨破坏的改变。大体解剖可见小鼠的中轴骨和四肢骨关节被肿瘤组织包裹,出现不同程度的骨转移灶。结论超声引导下心内注射肺癌骨转移模型能够有效提高建模成功率,较真实地模拟临床肺癌患者骨转移的生物学特性,能够为肺癌转移机制研究、抗转移治疗和个体化治疗等研究提供实验工具。

哈兽研所研制成功PRRS弱毒疫苗

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)又称蓝耳病,是近年来最引人瞩目的新的猪病。该病可侵害猪的免疫系统而继发多种其他疾病,经济损失巨大,尤其种猪场更为严重。为此,哈尔滨兽医研究所郭宝清副研究员等选用PRRS优良的弱毒疫苗种毒研制出弱毒疫苗。用先进的细胞培养技术。

哈兽研所研制成PRRS灭活苗

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是近年来威胁我国养猪业发展的重要传染病之一,已经给养猪业造成巨大的经济损失。哈尔滨兽医研究所郭宝清副研究员等选用我所分离的国内流行毒株(CH-La)研制成功了PRRS灭活苗。因为改进了病毒的增殖技术,突破了病毒滴度低这一难关。

兰石集团生产安全事故原因浅析

兰石集团是我国西部一家集大型石油钻采、炼油化工设备及通用机械设备为一体的机械制造企业。其石油钻采、炼油化工设备产品在制造行业中具有代表性。机械行业由于人机系统柔性缺乏而导致在产品制造过程的各个环节易造成人身、设备事故的发生,而且随着企业生产规模的扩大,事故所带来的危害和损失也在不断加大。通过对兰石集团公司2001年1月至2011年12月11年间所发生的事故资料的收集整理和统计分析,用事故统计方法、事故致因理论就生产安全事故的原因作一浅析。

梨林支行宣传“快贷通”业务显成效

河南省济源农商行梨林支行积极采取措施，加大宣传力度，大力拓展新业务，把总行最近推出的新业务“快贷通”放在前台柜员处，通过柜台向顾客发放，面对面进行宣传。