黄花败酱茎秆二氯甲烷萃取相对人白血病细胞K562增殖及分化的影响

目的:探讨黄花败酱茎秆乙醇提取物的二氯甲烷萃取相(DPSS)对K562细胞增殖抑制和诱导分化作用及其相关作用机制。方法:不同浓度DPSS(0、25、50、100和200μg/ml)分别作用于细胞24、48和72 h后,采用MTT法检测K562细胞增殖情况;应用流式细胞术检测不同浓度DPSS对K562细胞凋亡、周期阻滞的影响;应用瑞氏-吉姆萨染色观察DPSS作用后K562细胞形态学的变化并应用流式细胞术验证分化相关抗原CD33、CD11b的表达。结果:与对照组比较,加药组各浓度DPSS均对K562细胞的增殖有明显抑制作用,并且存在时间剂量依赖性(r=-0.96);细胞周期分析结果表明,随着DPSS浓度升高,G2/M期细胞增多(r=0.88),细胞被阻滞在G_(2)/M期;流式细胞术结果显示,当200μg/ml DPSS作用48 hK562细胞凋亡率最高;瑞氏-吉姆萨染色结果显示,DPSS作用后K562细胞出现胞体增大,包浆量增多,核浆比减小,核染色质粗糙等分化表现;细胞分化抗原检测发现,DPSS作用后CD33、CD11b呈阳性表达。结论:DPSS可以通过周期阻滞诱导K562细胞凋亡、抑制其增殖,并且能够诱导K562细胞向单核细胞分化,具有潜在抗白血病细胞的作用。

5539例孕妇孕中期唐氏筛查结果分析

目的:分析兰州大学第一医院2009年到2012年5 539例孕妇孕中期唐氏筛查结果,试图找出高危孕妇的可能危险因素。方法:采用时间分辨法检测孕妇外周血中游离β绒毛膜促性腺激素和甲胎蛋白的浓度,配合孕妇的年龄、孕周、体质量等,应用专用软件计算出该孕妇的唐氏风险率。结果:筛查出唐氏高风险的孕妇238例,占4.30%;≥35岁组的筛出率最高,为17.69%。结论:扩大唐氏筛查的筛查范围,再配合产前诊断是减少唐氏儿出生的最有效手段。

Ⅱ-型拟除虫菊酯对雄性小鼠中枢神经系统氧化应激的影响

[目的]探索II-型拟除虫菊酯类农药对小鼠脑的氧化损伤作用及其毒理作用机制。[方法]将50只雄性昆明系小鼠随机分为5组(每组10只),即溴氰菊酯(DM)1.8mg/kg组、3.6mg/kg组;氯氰菊酯(CP)4mg/kg组、8mg/kg组及色拉油对照组;连续1个月经口灌胃染毒后,检测DM、CP对小鼠脑中丙二醛(MDA)、羟自由基(-OH)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(CSH-PX)活性的影响。[结果]DM1.8mg/kg组和CP4mg/kg组小鼠脑内丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(CSH-PX)的含量与对照组比较差异有统计学意义;DM3.6mg/kg组和CP8mg/kg组小鼠脑内检测的四种指标与对照组相比均有统计学意义。[结论]II-型拟除虫菊酯类农药可引起小鼠脑内MDA、-OH、T-AOC、CSH-PX活性的改变,导致机体抗氧化能力下降,使之对外来化学物氧化损伤作用的敏感性增高。

网织血小板在急性白血病中的检测和临床意义

目的探讨网织血小板(RP)流式细胞仪检测方法及RP检测的临床意义。方法以体检健康者30例作为对照,动态监测30例急性白血病(AL)患者外周血血小板(PLT)水平、RP百分比(RP%)并计算RP绝对值(RPC)。结果 AL患者RP%和RPC低于健康者(P<0.05)。经治疗达到临床缓解的AL患者RP%及RPC恢复正常。结论 RP%及RPC能反映骨髓PLT生成情况,且比PLT计数更加灵敏,可作为AL治疗过程中的监控指标。

Ⅱ型拟除虫菊酯对雄性小鼠脑内单胺类递质含量的影响

为了解Ⅱ型拟除虫菊酯类农药对雄性小鼠内脏器官的影响及对小鼠黑质纹状体多巴胺(DA)系统的毒性作用和可能的机制,将50只雄性昆明种小鼠随机分为5组(每组10只),分别为溴氰菊酯(DM)1.8mg/kg组、3.6mg/kg组;氯氰菊酯(CP)4mg/kg组、8mg/kg组及色拉油对照组;连续1个月经口灌胃染毒后,测定脏器系数并采用高效液相色谱(HPLC)荧光检测法分别检测雄性小鼠全脑中多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)的含量。结果显示,染毒各组小鼠肝、脾脏器系数均高于对照组,脑的脏器系数有所降低。脑内DA、NE、5-HT的含量都有不同程度的下降,DA在DM高剂量组与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.01);NE在DM高、低剂量组及CP高剂量组与对照组的比较中差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);5-HT在各级两组之间的含量差异并无统计学意义。提示DM和CP可以影响实验雄性小鼠的内脏器官,也可以降低脑内单胺类递质的含量。

XRCC1基因在白血病中表达的研究

目的通过比较白血病患者与健康人群人类X射线交叉互补修复基因1(XRCC1)基因多态性和超甲基化水平,探讨XRCC1与白血病的相关性。方法利用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)和甲基化特异聚合酶联反应(MSP)的方法检测150例白血病患者(病例组)和150例健康体检者(对照组)XRCC1基因多态性和启动子区超甲基化水平。结果在各型白血病中XRCC1基因rs1799782、rs25487、rs25489位点基因型有不同程度的变化。病例组各亚组的XRCC1基因超甲基化阳性率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论多态性位点基因型分布及等位基因频率和白血病易感有一定的相关性,但XRCC1基因在白血病中可能不存在超甲基化现象。

临床多种检测方法联合诊断Klinefelter综合征

目的观察罕见嵌合型Klinefelter综合征患者外周血染色体核型和Y染色体上DAZ基因发生微缺失的情况。方法用染色体核型分析技术检测中期分裂相,用荧光原位杂交技术检测间期细胞和Y染色体上DAZ基因的缺失情况。结结果染色体核型分析技术检测各核型的比例为:48,XXYY占92%、47,XXY占5%、47,XYY占3%。荧光原位杂交技术检测各核型的比例为:48,XXYY占82%、47,XXY占14%、47,XYY占1%、46,XY占3%;检测DAZ基因没有缺失。结论联合检测方法的建立提高了检出率,弥补了由于检测方法的单一检测不到的复杂核型。

脊髓性肌萎缩症遗传学及治疗研究进展

脊髓性肌萎缩症(SMA)是由于脊髓前角运动神经元退化引起的神经肌肉性疾病,新生儿患病率约为1/6 000~1/10 000,全球不同人群的基因携带频率为1/40~1/50,是造成婴幼儿死亡最常见的常染色体隐性遗传病之一。SMA这一称谓主要指由SMN1基因突变所致的SMN1依赖性SMA。由于基因检测的无创性和特异性,使其逐渐发展成为诊断SMA的金标准。SMA尚无特异的治疗方法,除了常规的神经营养、肌肉锻炼等方法外,当前研究的热点,组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂类药物为迄今为止唯一完成Ⅲ期临床试验的药物。此外,小分子SMN增强剂、诱导多能干细胞(i PSC)技术、反义寡核苷酸纠正SMN2的剪接错误等治疗方法,目前尚处于体外实验阶段。文章就SMA近年的遗传学及治疗研究进展作一综述。

多参数流式细胞术在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用及价值

目的探讨流式细胞术(FCM)在非霍奇金淋巴瘤诊断中的价值。方法收集34例淋巴增殖性疾病的患者淋巴结穿刺液及淋巴结组织,对穿刺液进行多参数流式细胞免疫表型分析,对淋巴结组织进行病理学常规和免疫组化检查。结果 34例患者中,成熟B细胞淋巴瘤23例,19例慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤CD19和CD5共同表达率为100.0%。2种方法诊断非霍奇金淋巴瘤的符合率为80.6%,通过FCM免疫表型分析和病理检查,诊断恶性淋巴瘤准确率可达96.8%。结论流式细胞术对淋巴肿瘤细胞的免疫表型分析具有较高准确率,能为临床诊断非霍奇金淋巴瘤提供客观依据,具有较高的应用价值。

Ⅱ-型拟除虫菊酯处理小鼠睾丸某些氧化和抗氧化指标的变化

目的探讨Ⅱ-型拟除虫菊酯对雄性昆明种小鼠生殖系统损伤的影响。方法将50只体重18～22g的雄性昆明种小鼠随机分为5组(每组10只),即溴氰菊酯(DM)3.6、1.8mg/kg组,氯氰菊酯(CP)8.0、4.0mg/kg组,色拉油对照组;连续1个月经口灌胃染毒后处死,制备睾丸组织匀浆,采用分光光度法检测睾丸组织中谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、羟自由基(HO.)水平的变化。结果DM3.6mg/kg组、CP8.0mg/kg组CSH-Px活力均低于对照组(P<0.05);CP4.0、8.0mg/kg组、DM3.6mg/kg组MDA含量均高于对照组(P<0.01),DM1.8mg/kg组MDA含量高于对照组(P<0.05);DM3.6mg/kg组、CP8.0mg/kg组T-AOC均低于对照组(P<0.05)、HO.水平高于对照组(P<0.01)。结论Ⅱ-型拟除虫菊酯类农药可引起小鼠睾丸内某些氧化和抗氧化指标的改变。

锰对雄性小鼠中脑单胺类神经递质含量影响

目的探讨锰对雄性小鼠中脑单胺类神经递质含量的影响。方法将90只雄性昆明系小鼠随机分为3组(30,15 mg/kg,盐水对照组),每日腹腔注射染毒,连续染6 d停染1 d。分别于染毒20,40,60 d以后,颈椎脱臼处死。迅速剥出小鼠的全脑用锡箔包好后,置于液氮中保存。然后将组织制成匀浆并冷冻离心,取上清液移入离心管中。用高效液相色谱仪的紫外检测器测定其中单胺类神经递质的含量,并同时计算小鼠脏器系数。结果3种单胺类神经递质多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、五羟色胺(5-HT)的含量均低于盐水对照组,呈不断下降趋势。其中多巴胺的含量在40,60 d时下降明显,差异有统计学意义,P<0.05。同时发现,2个染毒组的雄性小鼠肝脏、脾脏、脑组织、以及睾丸的脏器系数与盐水对照组比较,均有不同程度变化,肝脏、脾脏的脏器系数增高,而脑组织、睾丸的脏器系数却降低。结论金属锰的长期接触可能会影响雄性小鼠中脑单胺类神经递质含量,并且对某些脏器有一定的毒性作用。

氯化锰对雄性小鼠生殖系统的损伤作用

[目的]探讨氯化锰对雄性小鼠生殖系统的损伤作用。[方法]将60只雄性昆明系小鼠随机分为3组:高剂量、低剂量染锰组和对照组各20只,每日固定时间腹腔注射染毒,连续染6d停染1d。于染毒d60颈椎脱臼处死。每只小鼠先剥出睾丸组织以及附睾组织称重测定脏器系数变化,后分别用睾丸组织、附睾组织进行脂质过氧化损伤相关指标以及精子运动参数的测定。[结果]随着染毒剂量的加大动物体重逐渐减轻,且睾丸脏器系数的降低高剂量染毒组与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);T-AOC在高剂量组与对照组相比差异有统计学意义(P﹤0.05),MDA含量在高、低剂量组与对照组相比差异均有统计学意义(P﹤0.05)。高剂量染毒组VCL、VSL与对照组相比有明显降低,且差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]氯化锰引起雄性小鼠的睾丸组织脂质过氧化,影响精子运动能力。

II型拟除虫菊酯对小鼠精子运动参数的影响

50只体重为18～22 g的雄性昆明种小鼠随机分为5组（每组10只）,即溴氰菊酯（DM）1.8、3.6 mg/kg组,氯氰菊酯（CP）4.0、8.0 mg/kg组及色拉油对照组,连续1个月经口灌胃染毒后处死,测定主要脏器的脏器系数,检测小鼠精子运动参数、精子畸形发生率。结果显示：（1）DM两个剂量组小鼠脾脏的脏器系数与对照组比较明显增高（P〈0.05）;CP 8.0 mg/kg组小鼠脑的脏器系数与对照组比较却明显降低（P〈0.05）。（2）DM 3.6 mg/kg组平均直线运动速度（velocity of rectilinear motion,VSL）、平均路径速度（velocity of average pathway,VAP）、侧摆幅度（amplitude of oscillation,ALH）、运动的直线性（linearity of mo-tion,LIN）、运动的摆动性（wobble of motion,WOB）与对照组相比明显降低（P〈0.05）;CP 8.0 mg/kg组平均曲线运动速度（ve-locity of curve motion,VCL）、VSL、VAP与对照组相比明显降低（P〈0.05）;其余各剂量组精子运动参数与对照组相比,均无统计学意义。（3）各剂量组精子畸形率的增加与对照组相比无统计学意义。提示本实验条件下,Ⅱ型拟除虫菊酯对雄性小鼠脾脏、脑脏器系数和小鼠精子活力及运动方式有一定的影响。

开放性临床医学实验室的管理浅谈

兰州大学第一医院中心实验室是开展临床特殊检测、实验教学、院内外师生科研的重要平台。随着实验室工作与职能的不断拓展,需要不断地发展和创新传统的实验室管理模式。以本实验室管理经验为例,从如何贴近临床保证检测质量、提高实验室运行效率、增强自身科研水平和服务能力等三个方面进行分析,就如何规范开放性实验室管理,更好地协调医疗、教学、科研服务工作进行探讨,进一步加强实验室建设与管理,使得实验项目更好服务临床、实验数据更具准确性,为临床师生提供更加便捷、高效、规范、可信的实验平台,为临床决策和科研项目推进提供可靠依据,同时让学生从中可掌握科学研究的基本方法和思维。

Survivin基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义

目的:探讨Survivin基因在急性白血病(acute leukemia,AL)患者骨髓中的表达及其临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR方法检测77例AL患者和20例正常人骨髓中Survivin及casepase-3基因的表达。结果:Survivin基因在初治的AL患者中的表达较正常对照组明显升高(P<0.01),治疗缓解后Survivin表达降低,复发的患者其表达再次升高。初治组casepase-3 mRNA表达水平较对照组明显降低(P<0.01),治疗缓解后表达升高,复发的患者其表达降低,初治和复发的患者两种基因表达均无明显差异(P>0.05)。Survivin基因表达水平与白血病患者的性别、年龄、发热、出血、淋巴结肿大等临床特征及初诊白细胞数、血红蛋白、血小板计数等实验室数据无关(P>0.05)。而与白血病分型、CD34抗原表达及骨髓中原始细胞比例有关(P<0.05)。此外,Survivin基因表达与原始细胞比例呈正相关(r=0.785,P<0.001),而与casepase-3基因表达呈负相关(r=-0.638,P<0.001)。结论:Survivin基因异常表达可能在白血病发病中起着重要作用,并且与AL复发及预后密切相关。Survivin可能通过抑制casepase-3的表达而抑制细胞凋亡,其过表达与白血病性造血及恶性增殖有关,是白血病患者预后不良的一个生物学标志。

3457例孕妇孕中期产前筛查和产前诊断结果分析

目的探讨导致筛查高风险的危险因素,对比分析产前筛查和产前诊断结果。方法对2020年9月1日—2021年8月30日兰州大学第一医院中心实验室3457例孕妇孕中期三联唐氏筛查、无创基因产前筛查(NIPT)、羊水穿刺核型分析及液相基因芯片检测(BOBS)结果进行综合评估,将检测结果分别导入SPSS软件进行数据分析。结果2020年9月1日—2021年8月30日接受孕中期三联唐氏筛查的孕妇共1859例,其中107例21-三体综合征高风险,占筛查人数的5.80%;8例18-三体综合征高风险,占筛查人数的0.27%;15例神经管畸形(NTD)高风险,占筛查人数的0.80%。接受NIPT筛查的孕妇共1175例,其中7例21-三体综合征高风险,占筛查人数的0.60%;1例18-三体综合征高风险,占筛查人数的0.09%;2例13-三体综合征高风险,占筛查人数的0.17%。接受三联唐氏筛查的孕妇中25~29岁的人数最多,占唐氏筛查总人数的51.53%,其次为30~34岁占36.09%,≤24岁占10.60%,≥35岁的人数最少,仅占唐氏筛查总人数的1.78%。接受NIPT筛查的孕妇中30~34岁的人数最多,占筛查总人数的40.43%,其次为25~29岁占28.17%,≥35岁占26.38%,≤24岁的人数最少,仅占NIPT筛查总人数的5.02%。21-三体综合征筛出高风险孕妇的平均年龄高于无风险孕妇,差异有统计学意义(P<0.05)。21-三体综合征筛出高风险孕妇的孕周与无风险孕妇比较,差异无统计学意义(P>0.05)。辅助生殖孕妇NTD筛查高风险率明显高于自然受孕孕妇,差异有统计学意义(P<0.05)。接受羊水穿刺产前诊断的孕妇主要来自唐氏筛查高风险人群,占产前诊断人数的55.08%,而且21-三体综合征高风险占44.92%,为唐氏筛查高风险中的大多数,其次是来自年龄高风险的人群,占产前诊断人数的22.93%,无创高风险的比例较少,仅为4.74%。以BOBS检测和核型分析为金标准,计算唐氏筛查和NIPT的阳性预测值。唐氏筛查检测21-三体综合征的阳性预测值为1.10%,NIPT检测21-三体综合征的阳性预测值为66.67%。结论控制生育年龄可大幅度降低唐氏筛查高风险人数。三联唐氏筛查对21-三体综合征的筛出率明显高于二联唐氏筛查,可降低漏筛的可能性。选择无创产前筛查可大幅度的降低羊水穿刺的数量。

人类白细胞抗原-DRB1等位基因多态性与中国人急性淋巴细胞白血病相关性的Meta分析

目的系统评价研究人类白细胞抗原-DRB1(human leukocyte antigen,HLA-DRB1)等位基因与急性淋巴细胞白血病(ALL)发病相关性的病例对照研究。方法检索以下数据库:PubMed、EMBASE、Web of Science、中国生物医学文献数据库(CBM)、中文科技期刊全文数据库(VIP)、中国期刊全文数据库(CNKI)及万方数据库,并辅以文献追溯的方法,收集国内外发表的相关病例对照研究,检索时间均从建库至2012年11月。两位研究者按纳入排除标准筛选文献并评价纳入研究质量,应用RevMan5.1软件进行Meta分析。结果共纳入7个病例对照研究,包含ALL病例676例。Meta分析结果显示:HLA-DRB1*01、03～16与中国人群ALL的发生无显著联系,但亚组分析显示HLA-DRB1*03、HLA-DRB1*13和HLA-DRB1*14可能为中国儿童ALL的拮抗基因,OR分别为0.07(95%CI=0.01～0.56,P<0.05)、0.08(95%CI=0.01～0.65,P<0.05)、0.09(95%CI=0.01～0.77,P<0.05)。结论现有研究表明,HLA-DRB1*01、03～16与中国人群ALL的发生无显著联系,但某些等位基因可能与抑制儿童ALL的发生有关。但由于纳入研究质量中等、样本量较小,需要进行更多设计严谨的高质量研究来进一步证实。

兰州地区育龄期女性5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶与纤溶酶原激活物抑制剂-1基因多态性研究

目的 探讨兰州市育龄期女性5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)与纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)基因多态性的频率特征,指导围孕期妇女个性化用药。方法 通过荧光PCR技术,对兰州市1 836名育龄期女性进行MTHFR和PAI-1基因的遗传检测,分析MTHFR与PAI-1基因的多态性分布情况以及MTHFR两位点间连锁不平衡水平(LD),并和历年报道的各地区数据进行比较分析。结果 MTHFR 677基因CC、CT、TT基因型频率分别为26.6%、48.5%、24.9%,C、T等位基因频率分别为50.9%、49.1%。MTHFR 1298基因AA、AC、CC基因型频率分别为70.5%、26.5%、3.1%,A、C等位基因频率分别为83.7%、16.3%。PAI-1基因5G5G、5G4G、4G4G基因型频率分别为19.9%、47.9%、32.2%,5G、4G等位基因频率分别为43.9%、56.2%。单倍型分析共存在7种组合,频率最高的为CT/AA(33.1%),其次分别为TT/AA(24.7%)、CT/AC(15.4%)、CC/AA(12.6%)、CC/AC(10.9%)、CC/CC(3.1%)、TT/AC(0.2%),无TT/CC、CT/CC组合。两位点间存在完全连锁不平衡(D’=1,r~2=0.182)。MTHFR C677T/MTHFR A1298C的基因型与等位基因频率与郑州、西安、珠海等地比较差异均有统计学意义(均P<0.05),正常人群与反复流产人群PAI-1基因的纯合突变型4G4G基因型频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 兰州市育龄期女性MTHFR基因多态性频率分布具有地域特异性,PAI-1基因4G4G基因型是兰州地区育龄期女性反复流产的危险因素。