基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨小青龙汤对寒饮内蕴型慢性肾小球肾炎大鼠的作用机制

目的探讨小青龙汤基于Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路对慢性肾小球肾炎(CGN)大鼠的治疗效果及作用机制。方法50只健康Wistar雄性大鼠,随机选8只作为正常组(Normal),对剩余42只大鼠施加低温环境、冰水游泳、冷食冷饮5周,阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)诱导CGN产生。模型制备成功后,随机分为模型组,小青龙汤低剂量组、小青龙汤中剂量组、小青龙汤高剂量组。小青龙汤灌胃15 d后,收集24 h尿液,麻醉后,腹主动脉取血,取两侧肾脏。进行24 h尿蛋白、尿素氮(BUN)、血清白蛋白(ALB)、血清肌酐(Scr)含量测定;酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)含量;苏木素-伊红(HE)染色进行肾脏病理组织观察;免疫组化(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织TLR4、MyD88、NF-κB p65的蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠24 h尿蛋白含量明显升高(P<0.01);血清中BUN、Scr、TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8含量明显升高(P<0.01),ALB含量明显降低(P<0.01);模型组大鼠肾组织有炎性细胞浸润,肾小球结构紊乱,肾小球系膜细胞严重增生,肿胀,部分膜细胞脱落,明显病变;与正常组比较,模型组大鼠肾组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.01)。与模型组比较,小青龙汤高剂量组大鼠24 h尿蛋白含量明显降低(P<0.01);小青龙汤中、高剂量组大鼠血清BUN、Scr含量显著降低(P<0.01),小青龙汤低、中、高剂量组ALB含量明显升高(P<0.05,P<0.01);小青龙汤中、高剂量组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8含量显著降低(P<0.01);小青龙汤中、高剂量组较模型组肾小球系膜细胞增生明显减轻,炎性细胞减少,肾组织结构趋于正常;小青龙汤中、高剂量组大鼠肾组织中的TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.01);小青龙汤低、中、高剂量组大鼠肾组织中的TLR4、MyD88 mRNA表达显著降低(P<0.01),小青龙汤高剂量组大鼠肾组织中的NF-κB p65 mRNA明显降低(P<0.05)。结论寒饮内蕴型CGN大鼠模型的造模方法具有可行性;小青龙汤治疗CGN大鼠可能是通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的表达,并使该通路所介导的TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8炎症因子减少,进而降低CGN大鼠肾脏炎症反应,减少尿蛋白的产生,改善肾功能。

基于网络药理学和分子对接技术探讨小青龙汤治疗慢性支气管炎的分子靶点和作用机制

目的:探讨小青龙汤治疗慢性支气管炎(chronic bronchitis,CB)的分子靶点和作用机制。方法:通过HERB和SwissADME数据库获得小青龙汤的活性成分,通过GeneCards、OMIM、TTD和Uniport数据库获得慢性支气管炎疾病靶点;利用STRING数据库和Cytoscape 3.8.2软件构建蛋白相互作用网络图,筛选核心靶点;使用Metascape数据库对靶点进行基因本体富集分析(Geneontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析并进行可视化,最后将选出的有效成分和核心靶点利用AutoDock Tools 1.5.7软件进行分子对接验证。结果:筛选得到小青龙汤活性成分987个,相关靶点1411个;CB疾病靶点1267个,小青龙汤治疗CB的靶点261个;核心靶点53个,主要作用于肿瘤坏死因子(TNF)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、白细胞介素-6(IL-6)等靶点,涉及核因子κB(NF-κB)、中性粒细胞胞外陷阱形成、坏死性凋亡等信号通路;分子对接结果显示,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、GAPDH与3-甲氧基草棉黄素、11-甲氧基胡蔓藤碱乙有较好的结合能力。结论:小青龙汤治疗CB的机制可能是通过11-甲氧基胡蔓藤碱乙、3-甲氧基草棉黄素、7-去甲基软木花椒素等有效成分与AKT1、GAPDH、IL-6、TNF等关键靶点有效结合,并且通过调控NF-κB、中性粒细胞胞外陷阱形成、坏死性凋亡等信号通路,发挥调节细胞凋亡、免疫功能和炎症反应等作用。

从中医“寒湿疫”角度探讨新型冠状病毒肺炎的诊治思路

依据中医外感热病的理论,综合分析新型冠状病毒肺炎发病的气候、地域、病因病机特点及临床表现,认为新型冠状病毒肺炎符合中医学的“寒湿疫”。本文从中医学“寒湿疫”的角度系统论述了新型冠状病毒肺炎的证候特点、病机特点和传变规律,并以中医理论为指导拟定出“寒湿疫”分期治疗原则,强调初期重视疏散寒湿、芳化湿秽;中期宣透郁热、清化痰热、宣畅湿热、通下湿滞,是阻断疫毒深入的关键。

治疗青春期痛经四例经验案举隅

柴瑞霭主任医师根据妇科生理特点,以肝为先天之本,重视调理气血,疏肝气,扶脾气,补肾气,调摄冲任,临床多收理想疗效。笔者根据中医“审证求因,审因论治”的原则,今择与“寒”有关的4个证型,各选1例病案,进行了总结,从辨证论治、病因病机、治疗原则、选方用药等几个方面加以论述,整理如下,从中可以体会柴老辨证与用药的风格。

小青龙汤通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制LPS诱导慢性肾小球肾炎的机制研究

目的探究小青龙汤通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的慢性肾小球肾炎的机制。方法24只健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、小青龙汤组。对照组切片在DMEM基础培养基中培养80min,LPS模型组将10μg/mL浓度的LPS加入基础培养基中,切片在基础培养基中培养30min,转入含有LPS的基础培养基中培养50min。小青龙汤组:将含药血清溶解于基础培养基中,继续培养LPS模型组。造模成功后,取出切片进行指标检测。观察肾组织形态学变化;用ELISA检测肾组织中IL-1β、IL-4、TNF-α等含量;RT-qPCR和Western blot检测肾组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠肾组织中可见明显的炎性细胞浸润,偶见肾小球体积增大,增生的肾小球内细胞数量增多,肾小管的管腔扩张且内有明显的透明管型,肾组织中IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-8的含量显著升高,IL-4显著下降(P<0.01);Western blot检测结果显示,与对照组比较,模型组大鼠肾组织TLR4、MyD88和P-NF-κB-p65蛋白表达升高,NF-κBp65蛋白表达降低(P<0.01);RT-qPCR显示,与对照组比较,模型组大鼠肾组织中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA表达水平有不同程度增高(P<0.01)。结论小青龙汤通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路改善LPS诱导的慢性肾小球肾炎大鼠肾组织的炎症损伤。