大鼠亚急性酒精性肝损伤模型的建立

目的本研究参照国内学者一些造模方法,结合人体食用方式和饮酒习惯,通过对比饮用不同酒精剂量、不同饮用时间得出建立酒精性肝损伤的最易条件。方法选用SPF级雌性Wistar大鼠(初始体质量150~180 g)30只,随机分为模型组和对照组。模型组分别给予酒精含量为15%、30%的普通白酒,对照组给予蒸馏水,以15 mL/kg·BW经口灌胃方式给予,试验周期分为8周。实验结束时从大鼠眼眶静脉丛采血,测定血清中谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨基酸转移酶(AST)、乙醇脱氢酶(ADH);取肝脏,测定肝脏组织MDA、SOD、GSH、TG及肝脏组织病理学损伤。结果结果显示,MDA 30%酒精组与空白对照组比较有显著性差异(P<0.05);GSH 30%酒精组、15%酒精组与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01,P<0.01);SOD 30%酒精组、15%酒精组与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01,P<0.01);ADH 30%酒精组、15%酒精组与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01,P<0.05);30%酒精组大鼠血清ALT显著升高(P<0.01);各组血清AST无显著变化(P>0.05)。模型组大鼠血脂代谢紊乱、肝内脂肪蓄积,病理组织学检查可见弥漫性的肝细胞脂肪变性,细胞内可见大小不等的脂肪滴,从肝脏病变得分来看,15%酒精组、30%酒精组肝组织脂肪变性程度与空白对照组比较,有显著性差异(P<0.01,P<0.01)。结论大鼠经口灌胃给予30%的普通白酒8周,可致肝损伤,结果可重复,成功建立了大鼠亚急性酒精性肝损伤的动物模型。

三聚氰胺致大鼠肾损伤模型的研究

目的为三聚氰胺肾损伤的研究建立动物模型。方法刚断乳的清洁级Wistar大白鼠,在清洁级动物室喂饲含三聚氰胺(50mg/kg·bw/d)的饲料,4周后处死动物做血液生化检测、脏器系数计算,取肾组织进行石蜡包埋、制片、HE染色,进行病理组织学检查。24h尿量计算。结果大鼠经口喂饲含三聚氰胺(50mg/kg·bw/d)的饲料,可在大鼠肾内形成结晶体,并致肾脏特征性病理改变。结论大鼠经口喂饲含三聚氰胺(50mg/kg·bw/d)的饲料,可致严重肾损伤,结果可重复,成功建立三聚氰胺致肾损伤动物模型。

以支持细胞为饲养层小鼠精原干细胞体外培养的研究

探讨精原干细胞(SSCs)与Sertoli支持细胞共培养的增殖分化能力。方法:以7～8d龄小鼠为材料,Percoll密度梯度离心,SSCs接种于Sertoli饲养层上,37℃下共培养,在倒置相差显微镜下观察细胞的生长特点,并对培养细胞进行C-Kit受体检测。结果:①增殖细胞的生长特点及形态学特征与文献报道精原干细胞的特征相符合。②C-Kit受体显示细胞膜呈强阳性。这些均符合精原干细胞的生物学特征。结论:精原干细胞在未加入细胞因子的Sertoli饲养层中能较长时间生长并分裂增殖。

Wistar大鼠血液、生化指标及ICR小鼠免疫学指标正常参考值的研究

目的建立清洁级Wistar大鼠血液、生化正常参考值及ICR小鼠免疫学指标正常参考值。方法采用全自动生化分析仪及血细胞分析仪分别对8周龄雌、雄的大鼠的常用血液学指标及生化指标值进行检测;对ICR小鼠进行免疫学试验,以确定平均值及正常参考范围。结果雄性大鼠的血常规指标白细胞总数、谷草转氨酶均明显高于雌性大鼠;血清总蛋白、白蛋白及肌酐指标则是雌性大鼠高于雄性者;小鼠免疫学指标经分析,脾脏/体重比值、淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性均偏低。结论本文为Wistar大鼠血常规、血清生化指标和ICR小鼠免疫学指标的测定数据,将为从事生物医药研究的科研人员提供基础对照参考值,同时为标准化鉴定和质量控制提供依据。

小鼠精原干细胞冷冻保存技术的研究

[目的]探讨精原干细胞（SSCs）冷冻复苏后与Sertoli支持细胞共培养的增殖分化能力。[方法]以7-8 d龄小鼠为材料,Percoll密度梯度离心,并将分离后的SSCs液氮冷冻,复苏后接种至Sertoli饲养层上,37℃下共培养,在倒置相差显微镜下观察细胞的生长特点,并对培养细胞进行C-Kit受体检测。[结果]增殖细胞的生长特点及形态学特征与文献报道精原干细胞的特征相符合。C-Kit受体显示细胞膜呈强阳性。这些均符合精原干细胞的生物学特征。[结论]冷冻复苏后精原干细胞在未加入细胞因子的Sertoli饲养层中能较长时间生长并分裂增殖。

中龙牌养肝茶对化学性肝损伤的保护作用

目的 通过实验,鉴定中华牌养肝茶的保肝作用。方法选用Wistar大鼠,以四氯化碳(CCl4)造成急性肝损伤模型,不同剂量的中华牌养肝茶通过灌胃进行保肝,然后进行大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)测定及大鼠肝脏病理检查。结果CCl41肝损伤对照组的ALT显著高于阴性对照组和各试验组;试验高剂量组大鼠肝细胞坏死较CCl4肝损伤对照组轻,差异显著。结论可以认为中龙牌养肝茶具有对化学性肝损伤有辅助保护作用。

姜公养生酒的调节血脂作用

姜公养生酒，成人推荐口服量是７５ｇ／日，试验分别设成人推荐口服量的５倍，１０倍，２０倍三个剂量，选用Ｗｉｓｔａｒ品系大鼠测定正常血脂后，在给予高脂饲料的同时连续灌胃给受试物２８天，于试验结束时取血测定各项血脂指标，结果高剂量组的总胆固醇（ＴＣ）与高脂对照比较下降＞１０％；故可以认为姜公养生酒具有调节血脂作用。

小鼠精原干细胞体外培养的研究

目的建立精原干细胞与Sertoli共培养细胞模型,探讨Sertoli支持精原干细胞扩增的可能机制。方法以7—8 d龄小鼠为材料,Percoll密度梯度离心,并将分离后的生精细胞接种至Sertoli饲养层上,37℃下共培养,在倒置相差显微镜下观察细胞的生长特点,并对培养15 d的细胞进行苏木精-伊红染色、C-Kit受体检测。结果①增殖细胞的生长特点及形态学特征与文献报道精原干细胞的特征相符合。②苏木精-伊红染色显示培养的生殖细胞大小均匀,核大而圆着色深。C-Kit受体显示细胞膜呈强阳性,背景基质细胞为阴性。这些均符合精原干细胞的生物学特征。结论精原干细胞在未加入细胞因子的Sertoli饲养层中能较长时间生长并分裂增殖。

三聚氰胺安全性毒理学评价

目的对三聚氰胺进行安全性毒理学评价。方法通过急性毒性试验、遗传毒性试验及喂养试验确定三聚氰胺在体内各器官分布、三聚氰胺毒作用剂量范围,是否有遗传毒性及毒作用靶器官。结果经口给予小鼠三聚氰胺,其雄性、雌性LD50均为5840mg/(kg.bw);Ames试验结果阴性;1/2、1/4、1/8LD50剂量系列遗传毒性小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠睾丸染色体畸变实验结果阴性;大鼠喂饲含有三聚氰胺的饲料(饲料中三聚氰胺含量分别为500、250、125mg/kg)28d后表现多尿、少动、体重下降,血清肌酐、尿素氮增高,肾脏外观明显改变,组织病理检查可见肾小管中存在大量晶体,肾小管上皮受损。肾脏内的晶体经液相色谱-质谱联用检测含有三聚氰胺和三聚氰酸。结论三聚氰胺雄性、雌性LD50为5840mg/(kg.bw),无遗传毒性,三聚氰胺雄性LOAEL为12.5mg/(kg.bw),雌性25mg/(kg.bw),毒作用靶器官为肾脏。

三聚氰胺急性毒性实验的研究

目的用半数致死量来评价三聚氰胺的急性毒性。方法分别选用的清洁级健康成年雌雄两种性别的昆明小鼠各20只,在清洁级动物室隔夜禁食16h后,按霍恩氏法采用21500、10000、4640、2150mg/kg.bw的剂量经口给予三聚氰胺后,观察在14天内动物所产生的毒性反应。结果经口给予小鼠三聚氰胺,其LD50为5840mg/kg.bw。结论根据LD50数值,依据WHO外源化学物急性毒性分级标准,判定三聚氰胺毒性分级为微毒物质。

三聚氰胺肾毒性研究

目的探讨三聚氰胺致大鼠肾毒性的致病机制及病变特点。方法将清洁级Wistar大鼠20只随机分为三聚氰胺染毒组[饲料中三聚氰胺含量为250mg/kg,染毒剂量为25mg(/kg·d)]和对照组(饲料中不加三聚氰胺),染毒4周后取血清测定生化指标;肾脏切片,于解剖镜下观察形态学变化;肾脏称重,计算肾/体比值;并进行肾脏组织病理学检查;采用液相色谱-质谱联用技术测定肾脏三聚氰胺和三聚氰酸含量;以X射线衍射法确定肾脏结晶体化学结构。结果大鼠喂饲含有三聚氰胺的饲料4周后出现多尿,少动,体重下降,血清肌酐、尿素氮、甘油三酯增高,肾脏外观明显改变,解剖镜下观察肾脏切片可见弥漫性分布的点片状晶体阴影。组织病理检查可见肾小管中存在大量晶体,肾小管上皮受损。X射线衍射法确认肾脏中含有三聚氰胺和三聚氰酸的结合。肾脏内的晶体经液相色谱-质谱联用检测含有三聚氰胺和三聚氰酸。结论三聚氰胺经消化道进入体内能部分水解生成三聚氰酸,两者在肾脏结合生成三聚氰胺-三聚氰酸结合晶体。晶体阻塞肾小管并造成肾小管上皮细胞损伤可导致肾小管重吸收功能障碍,最终导致肾功能衰竭。

三聚氰胺形成肾结晶体机制与肾损伤关系的研究

目的探讨三聚氰胺致大鼠肾损伤机制。方法将清洁级Wistar大鼠随机分为三聚氰胺染毒组和对照组,经口染毒后分别于染毒不同时间取肾脏大体观察、组织病理学、血清生化学检查;采用液相色谱-质谱联机、X射线衍射(XRD)法对肾脏中形成的结晶体进行定性定量分析;体外结晶体反应放热测定,分析结晶体与肾小管损伤的关系。结果 大鼠染毒一定时间后,血清肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)增高;肾脏外观异常改变;肾脏厚切片解剖镜下观察可见弥漫性分布的泥沙样阴影;组织病理检查肾小管中可见大量晶体、肾小管上皮继发性损伤;液相色谱-质谱分析证实肾脏中含有三聚氰胺147.3μg/g,三聚氰酸122.6μg/g;XRD法确认肾脏中的结晶体为三聚氰胺和三聚氰酸的结合晶体。体外晶体结晶过程生成75 kJ/mol的热量。结论在本试验条件下,经口给大鼠染毒三聚氰胺后可在肾小管中产生结晶体;由于肾小管中的大量结晶体的挤压造成肾组织严重缺血缺氧;结晶体堵塞肾小管致重吸收功能障碍;三聚氰胺-三聚氰酸结晶过程生成热致小管上皮变性。3者共同作用可能是导致肾损伤的原因。

三聚氰胺及三聚氰酸致实验大鼠肾损伤的回顾性研究

目的确认实验用大白鼠肾损伤的致病因子为三聚氰胺、三聚氰酸,探讨三聚氰胺、三聚氰酸的肾毒性。方法清洁级Wistar大白鼠,在清洁级动物室喂饲含致病因子的饲料,30天后处死动物做血液生化检测、脏器系数计算,取肾组织常规制片,进行病理组织学检查。取包埋于石蜡块中的肾组织用液相色谱-质谱联用法分析肾组织中是否含有三聚氰胺、三聚氰酸。结果大鼠喂饲含致病因子的饲料后,大鼠肾内形成结晶体,并引起严重肾功能损伤,甚至衰竭;每克肾组织中含有三聚氰胺15微克、三聚氰酸60微克。结论肾脏为三聚氰胺、三聚氰酸毒作用的主要靶器官,大鼠经口喂饲一定量三聚氰胺、三聚氰酸,可致严重肾损伤。

刺五加、刺玫果提取物提高小鼠缺氧耐受力研究

目的初步探讨刺五加、刺玫果提取物提高缺氧耐受力作用。方法通过经口灌胃方式给予小鼠不同剂量刺五加、刺玫果提取物,30天后,进行小鼠亚硝酸钠中毒存活实验、常压耐缺氧实验、急性脑缺血性缺氧实验,观察小鼠的存活时间。结果刺五加、刺玫果提取物使小鼠的亚硝酸钠中毒存活时间和常压耐缺氧存活时间显著长于对照组。结论刺五加、刺玫果提取物能够提高小鼠的缺氧耐受力功能。

某复合营养物(GGT粉)的毒性研究

葛根作为中药历史悠久,最早见于汉代的《神农本草经》,后在《本草纲目》等重要医药古籍中均有记载。葛根黄酮是中药葛根的主要功效成分,具有解热生津、发表解肌和升阳透疹等功效,广泛应用于心脑血管系统、肝和神经系统等疾病的临床治疗中[1-2]。甜菜碱又名三甲基甘氨酸,可从甜菜制糖后的糖蜜中提取,是人体内唯一可代替叶酸或S-腺苷蛋氨酸的甲基供体,具有保护肝肾、降低患心血管疾病风险等作用[3-6]。

GGT酒对酒精致大鼠肝脏氧化损伤的拮抗作用

目的通过分别灌胃给予大鼠GGT酒和乙醇4周、8周,对比两者不同暴露时长对大鼠肝脏抗氧化作用的影响。方法雄性Wistar大鼠80只随机分为共10组:45%(体积分数)酒精组、45%(体积分数)酒精1倍GGT组(即同市售含量)、45%(体积分数)酒精5倍GGT组、45%(体积分数)酒精10倍GGT组和空白对照组,每个剂量均设4周、8周两个试验周期。于每个周期结束时取肝脏测定MDA、GSH、SOD、GSH-Px。结果实验第4周,与酒精对照组比较,各剂量组MDA含量均无统计学意义(P>0.05);1和5倍GGT剂量组GSH含量、GSH-Px活力升高且有统计学意义(P<0.01);各GGT剂量组SOD活力均升高且有统计学意义(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。第8周,与酒精对照组比较,各GGT剂量组MDA含量均降低,GSH含量均升高且有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.01),GSH-Px升高无统计学意义(P>0.05);1和5倍GGT剂量组SOD活力升高且有统计学意义(P<0.05,P<0.05)。结论 GGT酒能减轻同等酒精浓度下对肝脏的氧化损伤。

三聚氰胺单独及与三聚氰酸联合染毒致大鼠的肾毒性

目的探讨三聚氰胺单独及与三聚氰酸联合染毒致大鼠的肾毒性。方法将初断乳清洁级雄性Wistar大鼠36只按体重随机分为3组,分别为三聚氰胺(25mg/kg)+三聚氰酸(25mg/kg)染毒组、三聚氰胺(25mg/kg)染毒组和对照组,每组12只。采用饲料掺入法进行染毒,连续染毒4周。染毒后,处死动物,取血清测定肌酐、尿素氮、甘油三酯,取肾脏称重并计算脏器系数,观察肾脏的形态学和组织病理学变化。采用X射线衍射仪对肾脏中的晶体进行定性,采用液相色谱-质谱联用法测定三聚氰胺和三聚氰酸的含量。结果两染毒组大鼠均出现食欲减低,多尿,少动,体重下降(P<0.01),肾脏系数升高(P<0.01)。与对照组比较,三聚氰胺染毒组以及三聚氰胺+三聚氰酸染毒组血清中尿素氮、肌酐和甘油三酯含量均升高,差异有统计学意义(P<0.01)。肉眼观察可见,三聚氰胺+三聚氰酸染毒组和三聚氰胺染毒组肾脏肿胀明显,体积增大,呈土黄色沙石样外观;组织病理学检查可见,肾小管中存在大量晶体,肾小管上皮受损。X射线衍射法确认肾脏中含有三聚氰胺-三聚氰酸晶体。三聚氰胺+三聚氰酸染毒组和三聚氰胺染毒组肾组织中三聚氰胺、三聚氰酸含量间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论单独给予一定量的三聚氰胺及同时给予三聚氰酸均可在大鼠肾脏形成晶体,造成不同程度的肾小管继发性损伤,并最终导致肾功能衰竭,三聚氰胺+三聚氰酸染毒组肾功能和组织病理学改变更为严重。

三聚氰胺致大鼠肾损伤及恢复期的变化

目的探讨三聚氰胺致大鼠肾损伤后停止染毒,肾损伤的自然恢复情况。方法将40只健康清洁级Wistar雄性大鼠随机分为三聚氰胺染毒组(25 mg/kg)和对照组,每组20只。采用饲料掺入法进行染毒,连续染毒4周。分别于染毒4周末和恢复2、6、12周末,测定血清测定尿素氮、肌酐含量,并观察肾组织的病理学改变。结果与对照组比较,染毒4周及恢复2、6周时染毒组大鼠血清尿素氮、肌酐水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01);而恢复12周时染毒组大鼠血清尿素氮、肌酐水平无显著改变。肉眼观察可见,染毒组大鼠肾脏体积增大,外观呈特征性土黄色沙石样;肾组织少见毛细血管网,弥漫性分布的点片状结晶体阴影;肾小管、肾盂中存在大量结晶体,肾小管上皮坏死脱落。恢复12周后,肾脏呈暗红色,表面凸凹不平;肾组织再生修复。结论三聚氰胺染毒可对大鼠肾组织造成损伤;停止染毒后不给予任何药物干预,损伤的肾组织能够自然修复再生,肾功能基本恢复正常。