大肠杆菌氧化适应反应及其oxyR基因调节作用的研究

本研究采用大肠杆菌ＰＱ６６及其ｏｘｙＲ基因缺失突变体ＯＧ４００作为生物指示体，观察到ＰＱ６６经低剂量Ｈ２Ｏ２预处理后，能诱导出对高剂量Ｈ２Ｏ２毒性作用的适应反应，且对其他过氧化物ＢＨＰ、ＣＨＰ诱导的ＳＯＳ反应也具有明显的抑制效应；但在ＯＧ４００中，并不存在这种由Ｈ２Ｏ２诱导的氧化适应反应。结果表明，这种氧化适应反应对过氧化物的毒性作用可能具有普遍的适应性，而ｏｘｙＲ基因可能参与了这种适应反应的调节作用。

oxyR基因对氧化物诱导SOS反应及SOD的影响

本研究采用大肠杆菌ＰＱ６６及其ｏｘｙＲ基因缺失突变体ｏＧ４００作为生物指示体，观察到过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）、异丁基过氧化氢（ＢＨＰ）、异丙基苯过氧化氢（ＣＨＰ）诱导ＯＧ４００、ＳＯＳ反应的敏感性明显高于ＰＱ６６，而甲醛（ＦＡ）及联二－Ｎ－甲基吡啶（ＭＶ）诱导的ＳＯＳ反应在两菌种间无差异，同时发现ＭＶ能诱导ＰＱ６６和ＯＧ４００超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的产生，且两菌种之间的诱导水平无差异，而Ｈ２Ｏ２不能诱导ＳＯＤ的产生。结果提示：ｏｘｙＲ基因的功能主要在于拮抗过氧化物引起的氧化损伤，对超氧化物诱导ＳＯＤ产生则无调节作用。

大肠杆菌oxyR基因抗氧化损伤作用的研究

本研究采用大肠杆菌PQ66及其oxyR基因缺失突变体OG400作为生物指示体，观察到过氧类氧化物如过氧体氢（H2O2)，异丁基过氧化氢(BHP)，异丙基苯过氧化氢(CHP)诱导OG400 SOS反应的敏感性明曼高于PQ66及PQ37(SOS显色法标准菌株)，而甲醛(FA)及超氧化物联二-N-甲基吡啶(MV)诱导的SOS反应水平在PQ66和OG3400间无显著差异；

大肠杆菌oxyR基因对氧化物诱导SOS反应及SOD水平的影响

本研究采用大肠杆菌PQ66厦其oxyR基因缺失突变体OG400作为生和物指示体。观察到H2O3，异丁基过氧化氧(BHP)，异丙基苯过氧化氢诱导OG400 SOS反应的敏感性明显高于PQ66．而甲醛（FA)及联二—N—甲基砒啶(MV)诱导的SOS反应在2菌种间无差异，同时发现MV能诱导PQ66和OG400超氧化物歧化酶(SOD)的产生，

大肠杆菌氧化适应反应及其oxyR基因调节作用的研究

本研究采用大肠杆菌PQ66及其oxyR基因缺失突变体OG400作为生物指示体，观察到PQ66经低剂量H2O2预处理后，能诱导出对高剂量H2O2毒性作用的适应反应，且对其他过氧化物(BHP、CHP)诱导的SOS反应也具有明显的抑制效应；但在OG400中，并不存在这种由H2O2诱导的氧化适应反应．结果说明：这种氧化适应反应对过氧化物的毒性作用可能具有普遍的适应性，而oxyR基因在其中则起着关键性的作用．

大鼠CLP与LPS两种败血症心室动力学及血管张力变化的比较研究

目的:探讨两种败血症模型对大鼠心室动力学及血管张力变化影响的异同。方法:采用盲肠结扎穿孔(CLP)手术20 h致腹膜炎诱导和腹腔注射脂多糖(LPS)6 h诱导败血症模型;在体颈动脉插管和心室内导管术,测定颈动脉血压和左心室动力学指标;用离体血管灌流方法,测定大鼠胸主动脉环的张力。结果:①CLP组大鼠的死亡率为65.2%,LPS组大鼠均存活;②CLP组和LPS组大鼠的血压均显著降低,且CLP组降幅更大(P<0.01);③CLP组和LPS组大鼠的左心室动力学指标心率(HR)、左室发展压(LVDP)和左心室内压最大上升/下降速率(±dP/dtmax)均明显下降(P<0.01),在HR与LVDP两项指标上,CLP组降低程度比LPS组更为明显(P<0.01);④两种模型的内皮完整和去内皮主动脉环对KC l和苯肾上腺素(PE)的收缩反应性均下降(P<0.01),且LPS败血症下降更显著(P<0.01)。结论:两种败血症模型对大鼠心室动力学及血管张力均产生不良后果;CLP败血症在心室动力学方面恶化更加显著;LPS败血症在血管张力方面恶化更加显著。

大鼠急性宫颈扩张模型的建立

目的:探讨浅麻醉下建立大鼠急性宫颈扩张(UCD)模型的可行性。方法:10只成年雌性SD大鼠在水合氯醛腹腔注射麻醉后,右颈动脉置管持续监测血压和心率。通过下腹部正中切口,以二细金属钩分别穿过双侧宫颈。一侧固定,一侧悬挂不同质量法码(25、50、75及100g)实施UCD刺激。每次刺激持续10s,间隔10min。以每次扩张时与扩张前腹直肌肌电(EMG)曲线下面积(AUC)百分比作为刺激引起的内脏运动反应(VMR)。结果:与扩张前基础值(100%±15%)相比,UCD引起刺激程度依赖的腹直肌EMG活动增加(P<0.05),分别为25g:(182±52)%,50g:(249±58)%,75g:(462±113)%,100g:(486±110)%;UCD不影响血压和心率变化(P>0.05)。结论:大鼠UCD模型操作简单可行,可引起明确稳定的VMR。

骨髓间充质干细胞对大鼠胰岛移植的影响

目的评价骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,MSCs)对胰岛血管重建和改善胰岛功能的作用。方法随机将SD大鼠分成2组:联合移植组,胰岛和MSCs联合移植入受体糖尿病大鼠的肾包膜下;对照组,仅作单纯胰岛移植。采用细胞密度梯度分离(Percoll)法从同种供体SD大鼠骨髓中分离得到MSCs,并进行原代培养。进一步将MSCs和分离纯化的胰岛联合植入受体糖尿病大鼠的肾包膜下。胰岛的微血管密度(MVD)通过Lectin From Bandeiraea Simplicifolia(BS-1)的荧光染色来评估,胰岛功能通过测定血糖水平来评估。结果分离培养的原代MSCs在培养的第10天后细胞开始加快增殖,细胞排列成漩涡状。于术后14天,取出胰岛移植物,作荧光BS-1染色。荧光BS-1定位于血管内皮上。联合移植组的胰岛内MVD平均为20±1.9,明显大于对照组的14±1.8(p<0.05)。联合移植组受体糖尿病大鼠的血糖缓解时间为10.5±4.1天,对照组为8.5±2.5天,两组之间无显著差异(p>0.05)。结论大鼠MSCs在胰岛移植早期有助于增加移植胰岛内的血管密度,可作为改善胰岛移植效果的新策略。

参附注射液联合前列腺素E_1治疗肺源性心脏病心力衰竭50例疗效观察

目的探讨参附注射液联合前列腺素E1(PGE1)治疗肺源性心脏病心力衰竭的疗效。方法95例肺心病患者随机分为治疗组50例和对照组45例,治疗组在常规治疗的基础上加用参附注射液(24mg静脉滴注,每日2次)和PGE1(10μg静脉注射,每日1次),15d为1疗程;对照组仅用常规治疗。治疗前后观察症状体征、心功能、血气和血液流变学变化。结果治疗后,治疗组总有效率(88%),临床症状体征、心功能、动脉血气及血液流变学等各项指标较治疗前有明显改善(P<0.05),与对照组相比均有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论参附注射液注射液联合PGE1治疗肺源性心脏病心力衰竭有良好的疗效。

急性内脏痛大鼠脊髓背角神经元ERK1／ERK2磷酸化水平的变化

目的探讨脊髓背角神经元细胞外信号调节激酶（ERK）是否参与急性内脏痛的形成。方法第一部分成年雌性SD大鼠30只，随机分为5组（n=6），假手术组（S组）不行宫颈扩张，UCD25组、UCD50组、UCD75组和UCD100组分别采用25、50、75、100g的强度进行宫颈扩张10s，10min后处死大鼠，采用免疫组化方法测定颈段（C5-8）、胸段（T5-8）、胸腰段（T12-L2）及腰骶段（L6～S1）脊髓背角神经元磷酸化ERK1／ERK2（p-ERK1／ERK2）表达水平。第二部分成年雌性SD大鼠20只，宫颈扩张（强度为75g）10s，于宫颈扩张后10、30、60及120min时分别处死5只大鼠，测定胸腰段（T12-L2）p—ERK1／ERK2表达水平。结果与S组比较，其它各组胸腰段p-ERK1／ERK2表达上调，其中UCD75组和UCD100组最明显（P〈0．05），其他脊髓段p-ERK1／ERK2表达差异无统计学意义（P〉0．05）。宫颈扩张后60min时胸腰段p-ERK1／ERK2表达达高峰（P〈0．05）。结论胸腰段脊髓背角神经元ERK参与了宫颈扩张诱发大鼠急性内脏痛的形成。

顺铂诱导氧化应激引起耳蜗血管纹周细胞线粒体途径的细胞凋亡

目的探讨顺铂是否通过诱导氧化应激水平升高引起耳蜗血管纹毛细血管周细胞线粒体途径的细胞凋亡。方法将20只6~8周的雄性C57BL/6J小鼠分为对照组和顺铂组;同时原代培养小鼠耳蜗血管纹周细胞并鉴定,分为对照组、顺铂组和N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)+顺铂组。听性脑干反应(ABR)检测小鼠听力变化,苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠耳蜗血管纹形态学变化,总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性检测试剂盒(WST-1法)和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法分别检测SOD活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,DCFH-DA荧光探针检测周细胞上活性氧的含量,Hoechst 33342和流式细胞术检测周细胞的凋亡率,免疫荧光技术检测耳蜗血管纹上周细胞的凋亡相关蛋白分布表达,免疫组化和蛋白免疫印迹法(WB)检测凋亡相关蛋白、线粒体相关蛋白的表达,Mito SOXTM-red和JC-1检测周细胞线粒体功能,伊文思蓝染色观察血迷路屏障(blood labyrinth barrier,BLB)的通透性。采用SPSS 18.0软件进行统计分析。结果与对照组相比,顺铂组可升高小鼠听力阈值和Ⅰ波潜伏期(t值为4.72和12.25,P值均<0.05),升高耳蜗和周细胞内氧化应激水平(t=38.34,P<0.01),使耳蜗血管纹结构紊乱皱缩,BLB通透性增加[伊文思蓝渗漏(1.08±0.42)AU比(0.55±0.23)AU,t=4.64,P<0.05],差异均有统计学意义。顺铂组小鼠耳蜗血管纹细胞凋亡蛋白c-Caspase-3和Bax的表达增加(t值为5.01和6.33,P值均<0.01),且顺铂可使原代培养的周细胞凋亡并上调c-Caspase-3、Bax的表达(P值均<0.05),NAC+顺铂组可逆转顺铂诱导的周细胞凋亡(P<0.05)。顺铂使周细胞线粒体功能损伤,诱导线粒体向胞浆释放凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)和细胞色素C(cytochrome-c,Cyt-c),NAC+顺铂组可逆转顺铂诱导的线粒体损伤(P值均<0.05)。结论顺铂可升高耳蜗内氧化应激水平引起C57BL/6J小鼠耳蜗血管纹周细胞线粒体途径凋亡,从而提高BLB的通透性,造成听力损失。