白藜芦醇对BGC-823细胞人程序化死亡分子5表达及凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇对胃癌BGC-823细胞中凋亡相关基因人程序化死亡分子5(PDCD5)表达的影响,并观察白藜芦醇诱导BGC-823细胞凋亡的效应。方法:分别用25、50、100和200μmol/L的白藜芦醇处理BGC-823细胞24、48和72h后,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测PDCD5表达的变化;运用流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡情况。另设空白对照组和溶剂对照组。结果:同一时间点,6组PDCD5蛋白及mRNA的表达差异均有统计学意义(F蛋白=211.881、242.438和184.866,P均<0.001;FmRNA=207.366、148.411和158.661,P均<0.001);同一浓度,24、48和72h时点各组比较,PDCD5蛋白及mRNA的表达差异均无统计学意义(F蛋白=0.950、1.870、2.218和2.232,P均>0.05;FmRNA=1.267、2.376、1.221和2.292,P均>0.05)。各组BGC-823细胞凋亡指数比较,差异有统计学意义(F=230.069,P<0.001)。结论:凋亡相关基因PDCD5可能在白藜芦醇诱导胃癌BGC-823细胞凋亡过程中发挥重要作用。

真核起始因子4E反义寡核苷酸对人食管癌EC-1细胞中真核起始因子4E表达的影响

目的:探讨真核起始因子4E(eIF4E)反义寡核酸(ASODN)对人食管癌EC-1细胞中eIF4E表达的影响。方法:将针对eIF4E不同基因位点的2条反义寡核苷酸(ASODN1、2)和1条无义寡核苷酸(N-ODN)转染EC-1细胞(设5、10、15μmol/L3个转染浓度),分别培养24、48、72h,并设空脂质体转染作为空白对照,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测转染后细胞中eIF4E蛋白和mRNA表达的变化。结果:ASODN1、2转染EC-1细胞培养24、48、72h后,各组中eIF4E蛋白和mRNA的表达均降低,2者分别与空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);ASODN1、2组每个时间段内随浓度增加ASODN抑制效应增强,差异具有统计学意义(F=9.423、10.284、10.496、7.621、8.420和9.089,P<0.05),组间相同时间点、相同浓度的抑制效应比较差异无统计学意义(P>0.05);NODN组和空白对照组对eIF4E的表达均无抑制效应。结论:特异性的ASODN能有效抑制人食管癌EC-1细胞中eIF4E的表达。

siRNA对人食管癌EC9706细胞真核起始因子4E表达的影响

目的探讨siRNA对人食管癌EC9706细胞中eIF4E表达的影响。方法针对GeneBank中eIF4E基因的不同靶点,设计并合成两条特异siRNA及一条无义siRNA寡核苷酸模板,利用体外转录法合成siRNA,在脂质体介导下以150ng/μl、200ng/μl和250ng/μl三种浓度转染EC9706细胞,分别培养24h、48h、72h,同时设正常对照组。采用免疫细胞化学及原位杂交技术检测转染前后EC9706细胞中eIF4E蛋白和mRNA的表达;应用流式细胞技术检测转染前后EC9706细胞周期的变化情况。结果转染siRNA后细胞形态发生明显改变。不同浓度的两条特异siRNA转染细胞后,eIF4E蛋白及mRNA表达量均较正常对照组降低,并且具有显著的剂量依赖性(P<0.05),但两转染组之间相比,差异无统计学意义(P>0.05);无义siRNA未表现出对eIF4E基因表达的抑制效应(P>0.05);两条特异siRNA转染组与无义siRNA转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。三种不同浓度siRNA转染细胞72h后与无义转染组及正常对照组相比,G0/G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例相对减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论特异性siRNA能有效抑制人食管癌EC9706细胞中eIF4E基因的表达,抑制细胞增殖。

八聚体结合转录因子4通过调节上皮-间质转化促进食管鳞状细胞癌进展和放疗抵抗

目的探讨八聚体结合转录因子4(Oct4)与食管鳞状细胞癌进展和放疗抵抗的具体作用和分子机制。方法利用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)数据库,分析Oct4基因在不同类型肿瘤组织和对应癌旁正常组织中的表达差异。2013年1月至2022年5月在河南省胸科医院接受手术联合放疗治疗的196例食管鳞状细胞癌患者,收集其临床资料及手术切除组织标本,采用免疫组化法检测癌及癌旁组织中Oct4蛋白的表达。通过慢病毒包装系统构建上调和下调Oct4的食管鳞状细胞癌细胞系,采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性,免疫荧光实验检测DNA损伤水平,Western blot检测Oct4、人磷酸化组蛋白(γ-H2AX)、E-cadherin、N-cadherin、vimentin、锌指E盒结合同源盒1(ZEB1)的表达。结果GEPIA数据库资料分析显示,食管癌组织中Oct4 mRNA的表达水平高于其癌旁组织(P<0.05)。196例食管鳞状细胞癌患者的肿瘤组织中Oct4蛋白表达水平为78.35±1.42,高于癌旁组织(16.27±0.49,P<0.001)。Oct4高表达组患者的生存时间明显短于Oct4低表达组(中位生存时间分别为25.40和47.00个月;HR=1.68,P=0.022)。与对照组比较,Oct4上调组KYSE510细胞增殖能力增强(培养72 h,吸光度分别为1.73±0.19和1.35±0.10,P=0.007),迁移能力增强[培养24 h,细胞迁移率分别为(41.67±1.20)%和(23.67±1.86)%,P=0.001],放疗敏感性降低(辐射增敏比分别为0.69±0.06和1.00±0.02,P=0.010),放疗后γ-H2AX表达水平降低,ZEB1、vimentin和N-cadherin表达升高,E-cadherin表达下降;Oct4下调1组和Oct4下调2组KYSE150细胞增殖能力减弱(培养72 h,吸光度分别为2.51±0.17、2.38±0.16和3.33±0.07,均P<0.01),迁移能力下降[培养24 h,细胞迁移率分别为(13.33±0.88)%、(13.00±1.00)%和(40.33±2.03)%,均P<0.001],放疗敏感性增强(辐射增敏比分别为1.34±0.11、1.24±0.07和1.00±0.02,均P<0.05),放疗后γ-H2AX表达水平升高,ZEB1、vimentin和N-cadherin表达下降,E-cadherin表达升高。与对照组比较,ZEB1下调组KYSE510细胞增殖能力减弱(培养72 h,吸光度分别为1.33±0.15和1.81±0.16,P=0.002),放疗敏感性增强(辐射增敏比分别为1.37±0.11和1.00±0.01,P=0.037),放疗后γ-H2AX表达水平升高。结论Oct4参与调节食管鳞状细胞癌细胞上皮-间质转化,进而促进食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和放疗抵抗。