术前深度单采自体红细胞和/或血小板储血技术应用中国专家共识

术前深度单采自体红细胞和/或血小板储血技术(简称:深度单采自体储血技术)是储存式自体输血的一种新型方式,近年来该技术在国内多家医院相继开展,但其实施过程与质量控制方面尚未形成共识或技术操作规范。为此,中国输血协会临床输血管理学专业委员会组织全国相关领域专家,对术前深度单采自体储血技术的技术原理、准入要求、适应证、禁忌证、操作要点、不良反应防治、采集血液质量评价及处置等方面广泛深入探讨后,共同制定本共识。旨在更好地进行患者自体血液管理,同时为医护人员更加安全、规范地实施术前深度单采自体储血技术工作提供依据。

富血小板血浆与间充质干细胞的联合应用在再生医学中的前景

富血小板血浆(PRP)与间充质干细胞(MSCs)的联合应用在再生医学中展现出巨大的潜力,为治疗各种疾病和组织再生提供了新的治疗策略和有力工具。该联合应用结合了PRP中丰富的生长因子和MSCs的多向分化潜能,产生协同作用,有助于加速组织再生和修复过程。在不同医学领域,如整形美容、骨科、心血管和不孕症治疗等,PRP与MSCs的联合应用展现出广泛的应用潜力。此外,个体化医疗也得以实现,根据患者的特定情况调整治疗方案,提高治疗效果。然而,联合应用也存在一些风险和限制。其中不受控制分化、出血和血栓等风险需要特别注意。此外,长期安全性、效果的持续性以及治疗方案的标准化仍然存在不确定性,需要更多的大规模研究来验证。综上所述,PRP与MSCs的联合应用为再生医学领域带来了新的希望和前景,但在应用时需要谨慎权衡其优势与风险,以确保治疗方案的安全性和有效性。

抗原激活系统血液免疫反应实验研究

目的:用系统免疫学研究体系探讨在系统血液免疫反应中不同抗原物质激活红细胞调控白细胞免疫反应的实验观察。方法:将卡介苗(1 mg/ml)、瘤苗(S180 5×106ml-1)或酵母菌(5×108ml-1)0.2 ml,以生理盐水(代替抗原物质)0.2 ml为各自对照组加入枸橼酸抗凝全血细胞或白细胞0.2 ml和血浆(或生理盐水0.3 ml)中,37℃水浴1小时,用免疫酶联法测定IL-8和IL-6,用流式细胞仪测定Fy6和CD35分子平均荧光强度。结果:各种抗原物质加入血细胞和血浆组其IL-8激活率为(2.71±0.37)显著高于血细胞和生理盐水组(-0.33±0.05)(P<0.01)。前组IL-6激活率(1.01±0.37)也高于后组,其IL-6激活值为(-0.25±1.06)。各种抗原加入全血细胞和血浆组的IL-8激活率为(2.71±0.37)显著高于各种抗原加入白细胞和血浆组IL-8激活率(0±0.20)(P<0.01)。在各种抗原加入血液组红细胞Fy6平均荧光强度表达水平(28.85和25.35)低于生理盐水加入血液组红细胞Fy6平均荧光强度表达水平(45.80),各种抗原加入全血细胞和血浆组粒细胞CD35平均荧光强度表达量(860.4±115.63)明显高于各种抗原加入白细胞血浆组粒细胞CD35平均荧光强度表达量(565.07±96.35)(P<0.01)。在无血浆组,红细胞对白细胞分泌的IL-8和IL-6有吸附作用。结论:在本实验体系中,各种抗原可激活红细胞调控系统血液免疫反应中的各种白细胞被活化所分泌的IL-8和IL-6含量。在体外抗原可快速激活系统血液免疫反应。红细胞调控各种白细胞释放IL-8和IL-6的机制是复杂的,如红细胞对IL-8和IL-6激活率与血浆和CD35分子量表达密切相关,红细胞IL-8和IL-6吸附率与Fy6和gp130表达密切相关。红细胞与血浆在系统血液免疫反应调控中扮演着重要的角色。

红细胞调控白细胞免疫功能新的自然实验研究体系

目的用血液免疫反应路线图实验体系评估红细胞在白细胞免疫活性中的作用。方法将0·3ml血浆加入0·2ml全血细胞悬液(全血细胞组)或0·2ml白细胞悬液(白细胞组)中,37℃温育1h,用免疫酶联法测定IL-8和IL-12水平,流式细胞仪测定白细胞膜CD4、CD8、CD35和CXCR4表达量。结果全血细胞组IL-8和IL-12水平(分别为5·96±4·26、9·84±2·23ρB·pg-1·ml-1)明显低于白细胞组(分别为15·09±9·86、13·59±3·69ρB·pg-1·ml-1,P<0·05),淋巴细胞CD4、CD35、CXCR4表达量(分别为37·79±12·00、154·66±70·00、34·40±20·45)明显高于白细胞组(分别为18·54±11·32、83·26±35·99、16·69±11·09,P<0.01),粒细胞CD35表达量(603·63±257·64)明显高于白细胞组(384·86±174·16,P<0.01)。成人全血细胞组淋巴细胞和粒细胞CD35和CXCR4表达量明显高于脐血全血细胞组(P<0·05或P<0·01)。结论红细胞是白细胞(包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、树突状细胞、粒细胞等)免疫功能的调控者和指导者,脐血红细胞免疫调节功能明显下降;本研究为红细胞免疫调控活性测定提供了新的近似自然的方法。

红细胞CD35在抗原激活淋巴细胞免疫反应中的作用

目的探讨红细胞CD35在抗原激活淋巴细胞免疫反应中的作用。方法用淋巴细胞分离液分离健康成人ACD抗凝全血获得淋巴细胞悬液(1×106/ml)和红细胞悬液(1×108/ml),以灭活腹水癌细胞S180(1×106/ml)作为激活抗原,以自体血浆作为反应基质,考察红细胞对淋巴细胞的调控能力,流式细胞仪检测淋巴细胞表面CD25的表达阳性率。单抗封闭红细胞CD35或EDTA破坏补体,观察淋巴细胞CD25表达的变化。结果CD35单抗封闭后淋巴细胞CD25表达量(18·22%±4·27%)明显降低;EDTA破坏补体后,淋巴细胞CD25表达量(18·79%±3·90%)比ACD抗凝组(23·29%±4·40%)明显降低,与CD35阻断组基本相同,但仍高于Hanks′液对照组(13·19%±2·96%)。结论红细胞CD35和血浆补体对抗原激活淋巴细胞免疫反应起着重要的调控作用;血浆中还存在其他调控淋巴细胞活化的机制。促进红细胞表面CD35分子表达、保持血浆补体活性对提高淋巴细胞免疫活性有着重要意义。

甲氨蝶呤与长春新碱双载红细胞的体外抗肿瘤活性研究

目的研究甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)与长春新碱(vincristine,VCR)双载红细胞体外抗肿瘤效果。方法改良低渗预膨胀技术制备MTX+VCR双载红细胞、MTX单载红细胞和VCR单载红细胞。分别采用制备的载体红细胞、未载药红细胞、MTX+VCR工作液及RPMI1640培养液与K562细胞共培养。MTT法检测K562细胞增殖,PI染色流式细胞仪分析K562细胞周期,Annexin Ⅴ-FITC/PI染色流式细胞仪分析K562细胞凋亡情况。结果双载红细胞明显抑制K562细胞的增殖并促进其凋亡作用,且随共培养时间的延长而作用增强,效果优于MTX单载红细胞(P<0.05),与未载药红细胞相比差异显著(P<0.01);细胞周期结果显示,双载红细胞组G0/G1期K562细胞明显减少,G2/M期细胞逐渐增多,S期K562细胞在作用12h后明显增多,24h后略有减少,与未载药红细胞的作用相比差异显著,与MTX+VCR原药组的作用基本相同。结论与未载药红细胞和单载红细胞相比,MTX+VCR双载红细胞杀伤肿瘤细胞作用更强。

成人原发免疫性血小板减少症患者外周血Th9细胞的表达及其临床意义

目的观察Th9细胞及IL-9在成人原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)患者中的表达,探讨其在ITP发病过程中的作用。方法纳入新诊断的成人ITP患者25例及年龄性别匹配的健康对照患者25例,利用流式细胞术检测研究对象外周血Th9细胞比例,实时荧光定量PCR检测IL-9、TGF-β、PU.1和IRF4的相对表达量,ELISA法检测IL-9的表达情况,血细胞计数仪进行血小板(PLT)计数。结果与健康对照组相比,ITP患者外周血Th9细胞比例增高,且PLT≤30×109/L的患者Th9细胞比例高于PLT>30×109/L的患者(P<0.05)。ITP患者IL-9mRNA及蛋白水平均增高,且PLT≤30×109/L的患者IL-9mRNA及蛋白水平高于PLT>30×109/L的患者(P<0.05)。与健康对照组相比,ITP患者Th9细胞发育的主要调控因子TGF-β、PU.1和IRF4水平增高(P<0.05)。ITP患者Th9细胞比例和IL-9蛋白水平均与PLT负相关(r=-0.428 1,P=0.032 8;r=-0.537 5,P=0.005 6)。随访11例患者,发现经有效治疗后,Th9和IL-9与治疗前相比均呈下降趋势(P<0.05)。结论 Th9的异常活化可能参与了成人ITP疾病的发生与发展,这为进一步理解ITP的免疫学发病机制及选择免疫调节治疗潜在靶点提供了新的线索。

异体输血对结直肠癌患者预后影响的meta分析

目的评估异体输血（allogeneic blood transfusion,ABT）对行手术治疗的结直肠癌（colorectal cancer,CRC）患者远期预后的影响。方法计算机检索PubMed、EMbase、The Cochrane Library以及中国生物医学文献数据库中ABT与CRC患者预后的相关研究,并辅以文献追溯法查找相关文献。检索时限均从建库至2014年3月。由2名评价者按纳入与排除标准独立选择文献、提取资料并评价质量后,采用Stata 12.0软件进行meta分析。结果最终纳入8个研究,共5 479例患者。Meta分析结果显示：与未输血组相比,输血组总生存风险和疾病特异性生存风险分别增加了21%（HR=1.21,95%CI：1.09-1.33,P〈0.001）和47%（HR=1.47,95%CI：1.17-1.84,P=0.001）,差异有统计学意义;而输血组无病生存风险、局部复发风险和远处转移风险与未输血组的差异无统计学意义。结论 ABT可以增加CRC手术患者的总生存风险与疾病特异性生存风险,因此积极采取围手术期血液保护策略以降低ABT率具有重要的临床意义。

血小板保存前添加饱和氢气的作用研究

目的探索氢气在22℃保存血小板中的作用。方法将12份浓缩血小板(40 mL/份)和10份单采血小板(40 mL/份)每份平分为2等份(20 mL/份),随机取1半作为浓缩血小板实验组(n=12)和单采血小板实验组(n=10):加入氢气至饱和;另1半相应作为2个对照组。室温保存5 d后,检测2组血小板计数(Plt)、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、pH值、葡萄糖、乳酸和CD62p表达水平。结果单采或者浓缩血小板22℃保存5 d后,输注氢气组与对照组比较pH:单采血小板7.17±0.26 vs 7.03±0.35(P<0.05),浓缩血小板7.07±0.15vs 6.85±0.34(P<0.05);CD62p:单采血小板17.39±2.88 vs 21.49±4.2(P<0.01),浓缩血小板17.84±2.54 vs21.73±4.14(P<0.01)。结论氢气作为1种选择性抗氧化剂,可减少22℃保存血小板活化,降低血小板保存损伤,提高保存血小板的质量。

甲氨蝶呤与长春新碱双载红细胞的制备及其生物学特性

目的制备甲氨蝶呤(MTX)与长春新碱(VCR)双载红细胞,探讨红细胞作为双药载体的可行性。方法改良低渗预膨胀法制备MTX+VCR双载红细胞,高效液相色谱法(HPLC)分析MTX、VCR含量,自动细胞分析仪测定红细胞生理指标,考察双载红细胞的载药参数、释放情况。以渗透脆性检测、新鲜血天然免疫功能快速测定等方法,分析其贮存稳定、渗透脆性和载体红细胞天然免疫黏附功能的变化。结果联合载药情况下,不同浓度的MTX包载效果差异显著(P<0·05)。任意增加一药的浓度可增加此药的包载量而不影响另一药的包载量。1hMTX、VCR释放率分别为13·86%±0·48%和8·16%±0·26%,药物释放缓慢。双载红细胞形态和天然免疫黏附功能无明显改变,渗透脆性减低,体积略有增大,可稳定贮存5天。结论制备MTX+VCR双载红细胞基本可行,红细胞能够作为双药甚至多药的联合载体。

肿瘤患者红细胞调控球蛋白变化新的自然实验体系研究

目的采用血液免疫反应路线图实验体系探讨肿瘤患者红细胞对白细胞分泌球蛋白能力的调控作用。方法将癌细胞悬液(5×106/ml)0·2ml或生理盐水0·2ml加至枸橼酸抗凝全血细胞悬液(包括红细胞和所有白细胞)0·2ml或白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml中,37℃水浴1h,用OlympusAU100生化测定仪检测球蛋白含量。分组:①全血细胞实验组:癌细胞0·2ml加入全血细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;②全血细胞对照组:生理盐水0·2ml加入全血细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;③白细胞实验组:癌细胞悬液0·2ml加入白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;④白细胞对照组:生理盐水0·2ml加入白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml。结果肿瘤患者全血细胞自然实验组球蛋白激活率(0·31±0·09)明显低于正常人全血细胞自然实验组球蛋白激活率(0·39±0·14)。肿瘤患者全血细胞自然对照组红细胞对球蛋白吸附率(0·09±0·08)也明显低于正常人全血细胞自然对照组红细胞对球蛋白的吸附率(0·29±0·14)。结论血液免疫反应路线图自然实验体系用于测定红细胞对球蛋白的调控作用,方法简便,实用,肿瘤患者红细胞对球蛋白含量的调控能力明显下降。

血小板、红细胞对T细胞亚群的调控作用

目的:在体外实验中,探讨血小板和红细胞对T细胞亚群的调控作用。方法:流式细胞术测定血小板CD59、红细胞CD59、T细胞CD3+CD4+、CD3+CD8+的表达水平。按不同的实验条件进行分组,全血细胞组、有PL无红细胞(RBC)组、无血小板(PL)组、无RBC无PL组。同时观测各组抗原刺激前后T细胞变化。结果:各组T细胞CD3+CD4+、CD3+CD4+/CD3+比较:全血细胞组>有PL无RBC组,抗原刺激前后(P<0.001);有PL无RBC组>无RBC无PL组刺激前(P>0.05)刺激后(P<0.05)。各组T细胞CD3+CD8+表达无明显变化。各组CD3+CD8+/CD3+比较:全血细胞组<有PL无RBC组抗原刺激前后(P<0.01);有PL无RBC组<无RBC无PL组刺激前(P>0.05)刺激后(P<0.05)。全血细胞组和无PL组比较各项指标均无统计学意义(P>0.05)。抗原刺激前RBCCD59与CD3+CD4+在全血细胞组中负相关(P<0.05);而在无PL组中则无相关性;PLCD59与CD3+CD8+CD3+全血细胞组中的正相关无统计学意义(P>0.05);而在无红细胞组中则呈负相关(P<0.05)。结论:活化血小板、红细胞均可正向调节CD3+CD4+/CD3+,负向调节CD3+CD8+/CD3+。

术中回收式自身输血在骨科大手术中的应用

目的观察术中回收式自身输血在骨科大手术中的应用效果。方法对60名骨科大手术患者应用CellSa。er5＋型血液回收仉进行术中回收式自身输血，对患者术前、术后1d收缩压（SBP）、心率（HR）、血红蛋白（Hb）、红细胞压积（Hot）、血氧饱和度（Sp02）、血小板计数（P1t）、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶原时间（APTT进行分析；记录每例回收血量、回输血量和异体输血率，并测定每例回输红细胞悬液的Het。结果平均每例回收血液910mL，回输浓缩红细胞480n1L，异体输血率为46．7％；患者术后1dSBP、HR、SpO2与术前比较P〉0．05，Hb、Hct、Pit较术前显著降低（P〈0．05），PT、APTT较术前显著延长（P〈0．05）；回输的浓缩红细胞Het为0．47～0．53。结论术中回收式自身输血在骨科大手术中是一种安全、有效、可靠的血液保护技术，可达到减少输血：节约血源，减少输血并发症的目的，并且方便实用。

7例ABO血型抗体减弱或缺乏的临床分析

目的探讨ABO血型抗体减弱或缺乏的血清学特点及临床分析。方法对7例血型抗体减弱患者采用血清学方法进行ABO血型鉴定、吸收放散试验、唾液中血型物质测定。结果7例均为分泌型,抗-A缺乏2例,抗-B减弱或缺乏4例,抗-A、抗-B均缺乏1例。结论正常人抗体缺乏见于免疫耐受现象,肿瘤患者在急性发作期或化疗后造成机体免疫功能低下,特异性抗体水平下降。

癌症患者红细胞调控IL-8的意义

[目的]探讨癌症患者红细胞在血液中调控白细胞分泌IL-8的规律。[方法]将新鲜血浆0.3ml加入0.2ml全血细胞悬液:包括红细胞和白细胞或0.2ml白细胞悬液中,混匀37℃水浴1h。用免疫酶联法测定IL-8含量。[结果]在血液免疫功能变化中,红细胞能调控白细胞分泌IL-8含量,正常人(21例)红细胞IL-8吸附率(0.66±0.16)明显高于遗传性球形红细胞增高症(1例)(0.31)和肿瘤患者(15例)红细胞IL-8吸附率(-0.04±0.55),P<0.01。[结论]红细胞在血液中调控白细胞分泌IL-8含量水平中扮演极其重要的角色,肿瘤患者红细胞趋化因子受体调控活性明显低下。

体外血液实验创新:用系统模式研究红细胞多种调节功能的进展

系统血液生物学有关理论认为血液系统是由分系统和子系统组成。各分系统和子系统生物功能有不同分功，但它们之间还有协作调控关系。红细胞血红蛋白参与氧和CO2呼吸功能调控，红细胞膜有多种受体，如补体受体、趋化因子受体参与补体活化，细胞因子浓度调控，红细胞胰岛素受体参与胰岛素和血糖浓度调控。当异抗原（如艾滋病毒）进入血液后，首先激活补体系统，艾滋病毒颗粒黏附上补体C3b，被红细胞CD35分子作用后，降解为C3 d和C3 dg ，将这种艾滋病毒交给B淋巴细胞CR2分子处理，最终通过有关机制递交给CD4阳性淋巴细胞而发病。有关研究还发现红细胞可释放NK细胞增强因子，调控NK细胞活性。红细胞血红蛋白参与抗淋巴细胞代谢中氧化作用，使 CD4／CD8比值上调。红细胞数量巨大，膜受体种类众多，红细胞参与血液免疫反应和内分泌及生化反应等系统血液生物学功能调控机制复杂。淋巴细胞可分泌抗体和各种白细胞因子参与抗感染和抗肿瘤免疫反应，淋巴细胞膜有多种受体如激素受体参与内分泌功能调控等。血小板可释放多种凝血因子调控凝血过程，血小板模有补体受体参与补体活化调节，血小板模有CD55、CD59分子参与T淋巴细胞活性调节。所有血细胞都参与抗感染和抗肿瘤免疫反应，血液系统对外来致病原的反应是一种系统血液免疫反应。这需要用系统血液生物学的理论和系统模式实验方法学去研究，才会有新发现和理论创新。这方面研究工作有很大进展，现将有关研究进展综述如下。

输血医学研究生教育现状及发展策略

研究生教育是培养高层次人才、提升学科内涵的重要形式,输血医学研究生教育正处于起步阶段,还存在人才需求目标不明确、无正规化培养模式、导师队伍数质量有待提高等问题,需要我们不断强化导师队伍建设,拓宽研究生教学渠道,探索正规化培训模式,坚持学科建设与研究生个性培养相统一,为输血医学高层次人才培养做出努力。本文就输血医学研究生教育的现状问题及发展策略作一论述,以期为建立系统完善的输血医学研究生教育体系提供思考和建议。

癌抗原激活红细胞调控白细胞CXCR4分子表达与意义

[目的]采用自然和分离实验体系研究大肠癌患者红细胞调控白细胞免疫反应。[方法]癌细胞加入全血细胞悬液(或白细胞悬液)和枸橼酸抗凝新鲜血浆,放37℃作用1h后,观察白细胞CXCR4表达和血清蛋白水平。[结果]癌细胞加入全血细胞和血浆组粒细胞CXCR4表达值(64.14±17.95)明显高于癌细胞加入白细胞和血浆组(41.57±1.58)(P<0.05),全血细胞和血浆组血清蛋白水平(20.63±1.41)明显低于白细胞和血浆组(24.25±1.58)(P<0.05)。大肠癌患者组白细胞CXCR4低于正常人。[结论]红细胞是白细胞CXCR4和分泌免疫球蛋白反应的调节器。大肠癌患者红细胞增强白细胞CXCR4表达能力明显下降。