多花黄精多糖提取工艺优化及抗氧化机制研究

文章以料液比、提取温度、提取时间为参数,在单因素试验的基础上,采用响应面法优化多花黄精多糖(Polygonatum cyrtonema Hua polysaccharides,PCP)的提取工艺,并分离纯化得到水洗糖;采用氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)诱导巨噬细胞氧化应激为实验模型,研究PCP的抗氧化机制。结果显示,PCP的最佳提取工艺为:料液比1∶25,提取温度85℃,提取时间2.0 h。MTT实验结果表明,PCP对巨噬细胞不具有毒性;与模型组相比,PCP显著提高了巨噬细胞的总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的酶活力,降低了丙二醛(MDA)的量,表明PCP具有较强的抗氧化功能。Western Blot实验结果显示,PCP显著上调了Nrf2的蛋白水平,抑制了Keap1的蛋白表达,提示PCP发挥抗氧化作用可能与调控Keap1/Nrf2信号通路有关。研究结果为PCP的深入开发利用提供了一定的理论基础。

石斛多糖体外抗氧化活性的研究

本实验利用对邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基(O2·)的清除作用、Fenton反应检测对羟基自由基(·OH)的清除作用以及对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系的抑制作用,对霍山石斛和铁皮石斛多糖抗氧化活性能进行了研究。结果表明,两种多糖对超氧阴离子自由基和羟基自由基具有不同程度的清除作用,同时对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系也有显著的抑制作用。研究还发现霍山石斛多糖的抗氧化能力显著强于铁皮石斛多糖。

不同分子量铁皮石斛多糖体外抗氧化活性研究

采用分步醇沉法对铁皮石斛总多糖(DSP)进行分离,得到乙醇终浓度为40%(DSP3)、70%(DSP2)和90%(DSP1)的多糖。进一步对4种铁皮石斛多糖的抗氧化活性进行测定,结果显示:DSP1对DPPH·的清除作用、总抗氧化能力、抑制H2O2诱导红细胞氧化溶血和抑制Fe2+-VC诱导的小鼠肝匀浆脂质过氧化作用效果最佳,DSP和DSP3次之,DSP2相对较弱;对·OH的清除率大小依次为DSP>DSP3>DSP1>DSP2;且不同相对分子质量的铁皮石斛多糖均可显著抑制羟基自由基介导的DNA氧化断裂。结果提示:不同相对分子质量铁皮石斛多糖均有抗氧化作用,且抗氧化能力与其相对分子质量大小有关。

5种食用菌多糖理化性质及免疫活性的比较研究

目的：研究平菇、茶树菇、香菇、木耳、金针菇5种食用菌多糖的理化性质和免疫活性,为食用菌的开发利用提供理论支持。方法：采用水提醇沉法提取多糖;采用分光光度法、高效凝胶渗透色谱法（high performance gel permeation chromatography,HPGPC）、气相色谱-质谱联用法（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）、红外光谱法（infrared spectrometry,IR）分析多糖的理化性质;采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定多糖的免疫活性。结果：相同条件下,5种食用菌多糖提取率依次为平菇多糖（Pleurotus ostreatus polysaccharides,POP）3.3 9%、茶树菇多糖（Agrocybe chaxingu polysaccharides,ACP）2.7 1%、金针菇多糖（Flammulina velutipes polysaccharides,FVP）2.69%、香菇多糖（Lentinus edodes polysaccharides,LEP）2.3 2%和木耳多糖（Auriculari aauricular polysaccharides,AAP）2.3 1%,它们均由分子质量不同、糖苷键为β-构型的多糖组分组成,均含有甘露糖（mannose,Man）、葡萄糖（glucose,Glc）和半乳糖（galactose,Gal）残基,且ACP还含有鼠李糖（rhamnose,Rha）和阿拉伯糖（arabinose,Ara）,AAP还含有少量的木糖（xylose,Xyl）;甲基化分析显示不同多糖具有不同的糖苷键连接方式,POP和LEP以→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc为主要连接方式,ACP以→1,6-β-Glc和→1,6-β-Gal为主要连接方式,而AAP和FVP是以→1,4-β-Glc为主要连接方式;体外免疫活性实验结果表明,5种多糖在25~400μg/m L质量浓度范围内无细胞毒性,可不同程度地提高巨噬细胞的吞噬能力和促进巨噬细胞分泌NO、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的能力,其中以→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc为主要连接方式的LEP活性最强,以→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc为主要连接方式的POP次之,以→1,6-β-Glc和→1,6-β-Gal为主要连接方式的ACP效果一般,以→1,4-β-Glc为主要连接方式的AAP和FVP效果最差。结论：5种食用菌多糖具有不同的理化性质和对巨噬细胞的免疫调节活性,且活性大小与多糖是否含有→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc连接方式相关。

霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用

研究霍山石斛多糖对人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用,探讨多糖抗肿瘤作用与肿瘤相关基因表达之间的相关性。胃癌细胞SGC-7901生长的MTT检测表明,霍山石斛总多糖(DHP)、阴离子交换色谱水洗组分(DHP-1)及0.05 mol/L盐洗组分(DHP-2)能显著抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,并呈时间和剂量依赖性,其中以DHP-2效果最好。光学及激光共聚焦显微镜观察发现,DHP-2处理过的胃癌细胞形态固缩,凋亡显著。荧光定量RT-PCR技术检测表明,DHP-2不仅能明显下调原癌基因c-myc的表达,其表达仅为对照的42.34%,而且能显著提高抑癌基因野生型p53的表达,其表达比对照高1.04倍。结果表明:霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用与其组分、浓度及作用时间相关,其可能的作用机制是多糖通过下调c-myc基因和上调p53基因的表达来发挥抑制效果。

霍山石斛不同分子量多糖体外抗氧化研究

以霍山石斛苗总多糖(ST)和40%、50%、60%、80%终浓度的乙醇连续沉淀4种多糖组分(S1、S2、S3和S4)为材料,在超氧自由基、H2O2、羟基自由基、还原力、Fe2+-VC诱导的脂质过氧化和H2O2诱导的红细胞溶血等不同体系下进行霍山石斛多糖体外抗氧化研究。结果表明:不同相对分子质量霍山石斛多糖均有抗氧化作用,其中相对分子量最大的S1对H2O2、·OH的清除作用强于其他多糖组分,IC50分别为0.15mg/ml和1.81mg/ml,并具有显著的还原力和抑制Fe2+-VC诱导脂质过氧化能力,最大效应分别为0.312和45.67%,表明霍山石斛多糖的抗氧化能力与其相对分子质量大小有关。

Box-Behnken法优化提取霍山石斛活性多糖的研究

目的:为获得较高的多糖提取率,本文探讨了霍山石斛多糖的提取工艺及多糖脱色方法。方法:研究了多糖提取过程中影响浸提的几个因素。包括提取温度、提取时间、料液比、提取次数和提取pH,并通过Box-Behnken法优化了工艺条件,建立了工艺模型。结果:当提取温度为69.4℃,pH值为5.9,料液比为1∶20,提取次数为2次,提取时间为1.57 h时,霍山石斛多糖提取率最高,达到0.1821 g/g。DEAE-52脱色法效果较佳,色素脱除率达到65.47%。结论:采用Box-Behnken法建立的多糖提取工艺模型能很好地预测实验结果,偏差1.6%。通过模型方程求得最佳工艺条件,多糖提取率高,脱色效果好。

药用霍山石斛原球茎的液体悬浮培养

目的:考察霍山石斛原球茎在液体培养中增殖、水溶性多糖与总生物碱积累的特征。方法:在霍山石斛试管苗茎段原球茎诱导与继代培养的基础上,进行原球茎的液体悬浮培养,分析原球茎生长动态,用比色法测定水溶性多糖与总生物碱的含量。结果:霍山石斛茎段在NAA或NAA与KT组合的MS培养基上可诱导出原球茎,MS基本培养基最适合原球茎继代培养增殖;原球茎在液体悬浮培养中最大比生长速率0.044·d^(-1),倍增时间15.8 d,最适生长周期为4周,水溶性多糖和总生物碱含量分别是3.75％和0.0261％。结论:霍山石斛原球茎液体培养生长良好,具有目的化学成分的合成能力,为发酵培养开发霍山石斛资源提供可能。

稀土元素对怀槐悬浮培养细胞异黄酮合成及氧化还原态的影响

在培养基中添加不同浓度的硝酸铈和硝酸镧,并检测怀槐细胞悬浮培养过程中异黄酮含量、苯丙氨酸裂解酶(PAL)酶活、还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽含量的变化,以探讨稀土元素对怀槐细胞合成异黄酮的影响和机制.结果表明,20mmolL-1硝酸铈和10mmolL-1硝酸镧较适合诱导怀槐悬浮培养细胞合成异黄酮;细胞培养过程中,硝酸铈和硝酸镧诱导异黄酮合成的变化趋势与PAL酶的活性变化一致;氧化还原态变化分析发现,硝酸铈和硝酸镧处理的细胞中GSH/GSSG比例分别在d3和d2达到最大值,是同期对照的1.46和1.47倍,而异黄酮含量则在d4和d3达到最大值,分别达到了271.42μgg-1(DW)和279.32μgg-1(DW).研究结果显示,怀槐细胞悬浮培养中添加稀土元素提高次生代谢产物异黄酮的合成可能与稀土元素诱导细胞氧化还原态的改变有关.

金钗石斛免疫活性多糖DNP-W1B的结构特征

从金钗石斛茎中获得了1个均一多糖组分DNP-W1B,采用化学与光谱学结合的手段对其一级结构进行了解析.结果表明,DNP-W1B分子量为7.7×105,比旋度[α]2D0=+81.3°(c 0.3,H2O),由葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖3种单糖组成,摩尔比为6.2:3.1:0.9.DNP-W1B主链由1,4-和1,6-连接的葡萄糖残基组成,在主链1,6-连接葡萄糖残基的4位形成分支,支链由末端半乳糖残基和阿拉伯糖残基组成.初步的免疫活性实验结果表明,DNP-W1B在体外能促进免疫细胞的增殖.

霍山石斛多糖的肠黏膜免疫调节活性及在小肠中的吸收分布

目的 :研究霍山石斛多糖(Dendrobium huoshanense polysaccharide,DHP)的小鼠肠黏膜免疫调节活性以及在小肠内的吸收分布。方法:通过溴化氰活化法对DHP进行荧光标记,检测荧光标记前后的肠黏膜免疫调节活性;通过口服和离体小肠培养以及Peyer’s结细胞培养,用激光共聚焦显微镜检测DHP在小肠内的吸收分布以及与Peyer’s结细胞的结合。结果:DHP在质量浓度为25、50、100μg/mL和200μg/mL时,其肠黏膜免疫调节活性分别提高到对照组的112.8%、131.1%、137.6%和160.5%,荧光标记不改变DHP肠黏膜免疫活性;DHP在体内和体外均可被小肠吸收,分布于肠黏膜固有层内,并可与Peyer’s结内细胞结合。结论:DHP具有肠黏膜免疫调节活性,可以通过Peyer’s结细胞被小肠吸收,并分布于固有层内。

霍山石斛不同提取物抗小鼠亚急性酒精性肝损伤活性的比较研究

目的:比较霍山石斛不同提取物抗小鼠亚急性酒精性肝损伤的活性。方法:制备霍山石斛冷冻干燥物、水提物、水提醇溶物、水提醇沉物、水提粗多糖5种提取物;以连续灌胃30%乙醇的小鼠为亚急性酒精性肝损伤模型,以霍山石斛不同提取物连续灌胃30 d后,称量小鼠体质量及肝质量,测定血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,以及总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量,同时测定肝脏中乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)、乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,并检查肝组织损伤病理变化。结果:霍山石斛水提醇溶物抗亚急性酒精性肝损伤的活性最差,醇沉物、水提物、冷冻干燥物具有一定的肝损伤保护活性,水提粗多糖各个剂量组均可显著改善肝脏组织损伤和脂肪变性(P<0.05),降低血清ALT、AST、ALP活性和LDL-C、TC、TG水平,提高血清HDL-C含量,增强肝组织ADH、ALDH、SOD、GSH-Px活性,减少肝组织GSH损耗并抑制肝组织MDA含量增加。结论:多糖是霍山石斛抗小鼠亚急性酒精性肝损伤的功能因子。

霍山石斛组织快繁中不同发育阶段多糖理化性质和免疫活性的比较研究

目的:从不同发育阶段的霍山石斛组织培养物中提取分离多糖,比较多糖的理化性质和免疫活性。方法:采用水提醇沉法提取多糖,阴离子交换层析法分离多糖,分光光度法、GC-MS、IR、荧光电泳分析多糖的理化性质,ELISA法测定多糖的免疫活性。结果:霍山石斛不同发育阶段培养物中多糖含量无显著差异,经阴离子交换层析均得到5种多糖组分,且都是由葡萄糖、半乳糖和甘露糖组成,IR和荧光电泳分析显示它们的化学结构特性无显著变化;体外实验表明,霍山石斛不同发育阶段培养物多糖具有相似的促进小鼠脾细胞产生IFN-γ和TNF-α的作用。结论:组织快繁中霍山石斛不同发育阶段培养物中多糖的理化性质和免疫活性无显著差异,表现出一定的稳定性。

海藻酸钠固定化β-葡萄糖苷酶的制备及其性质研究

在活性炭、明胶等8种固定化载体筛选的基础上研究了以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂固定化β-葡萄糖苷酶的条件,并对固定化酶的酶学性质及其在催化制备大豆异黄酮活性苷元染料木素中的应用进行了研究。β-葡萄糖苷酶在0.20%戊二醛溶液中交联2 h后再与20 g/L海藻酸钠混合,然后逐滴加到4 g/LCaCl2溶液中,固化1 h后过滤、洗涤得固定化β-葡萄糖苷酶,固定化酶的酶活回收率为83.67%。固定化酶的最适温度、热稳定性、pH值稳定性以及与底物的亲和力都有所提高,最适pH值基本不变。该固定化酶重复使用6次后其活力仍保持90.94%,染料木苷转化率达60.02%。

金属离子对霍山石斛类原球茎增殖及植株再生的影响

采用单因素浓度试验和正交试验研究了Mg2+、Ca2+、Fe2+、Mn2+和Zn2+离子对液体培养霍山石斛类原球茎增殖的影响。结果表明,5种金属离子对类原球茎增殖影响的主次顺序为Fe2+>Mn2+>Mg2+>Ca2+>Zn2+,促进类原球茎增殖的优化组合为Mg2+1.5 mmol.L-1、Ca2+4.5 mmol.L-1、Fe2+0.1mmol.L-1、Mn2+0.5 mmol.L-1、Zn2+0.06 mmol.L-1。经优化的液体培养基增殖的类原球茎能保持植株再生能力,平均每克类原球茎增殖后可再生植株1 985.2株,是相同时间内对照类原球茎再生植株数的4.2倍。

超声波对密花石斛多糖理化性质及免疫调节活性的影响

本文从超声波处理前后密花石斛多糖的分子量分布、特性黏度、荧光辅助糖电泳、溶液构象及免疫调节活性的变化角度,探讨超声波对多糖理化性质及与生物活性的改变。结果表明:超声波处理不仅降低密花石斛多糖高分子量组分的分子量和特性黏度,使多糖的溶液空间构象由大的纺锤体状聚集体解聚分散成小的结构紧密的聚集体,而且可显著提高多糖促进脾细胞增殖的活性,提示超声处理可改变多糖的理化性质并影响其生物活性。

发酵豆奶制作工艺优化的探讨

文章对影响酸豆奶质量因素进行研究。实验结果表明,大豆在0.5%的NaHCO3溶液中浸泡12 h,用豆水比1∶14磨浆,添加蔗糖10%,牛奶10%,以3%的接种量接入菌种,在温度38℃下,发酵6 h;在此体系下获得的产品质量优良,w(蛋白质)≥2.1%,w(总糖)≥9.8%,酸度56,乳酸菌≥4.7×107个/mL,未检出致病菌。

干旱胁迫对玉米幼苗脂质过氧化作用及保护酶活性的影响

采用人工控水的方法,考察了土壤含水量9%、12%、15%、18%、21%及24%6个梯度下玉米种子的萌发率,玉米幼苗膜脂过氧化指标H2O2、MDA及叶绿素含量,幼苗自由基清除相关酶SOD、CAT与POD活性等生理生化指标的变化。结果表明,随着土壤含水量的下降,玉米萌发率及叶绿素含量呈现下降的趋势,玉米幼苗H2O2与MDA含量呈现上升的趋势,且干旱胁迫越严重趋势越明显;幼苗自由基清除相关酶活性的变化各不相同,SOD活性在干旱胁迫初期呈上升趋势,后期呈下降趋势,POD与CAT活性在干旱胁迫初期变化不大,后期则呈下降趋势。因此,干旱胁迫能加剧玉米幼苗膜脂过氧化从而引起膜的损伤,且膜脂过氧化的程度随干旱胁迫的加大而加大,幼苗自由基清除相关酶活性在胁迫初期会上升以抵抗干旱胁迫,后期则下降,且不同的酶在抗干旱胁迫中的作用不同。植物在干旱胁迫下保护酶系统的作用,可能是通过它们之间相互协调且保持一个稳定的平衡态而进行的。

悬浮培养霍山石斛原球茎合成活性多糖的研究

本文考察了基本培养基、碳源、氮源以及有机添加物对霍山石斛原球茎液体培养合成活性多糖的影响。在MS、B5、N6、SH及各自1/2基本培养基中,以1/2MS和N6最适多糖合成,继代培养30d,总多糖产率分别达到479.47mg/L和417.05mg/L。使用单一碳源时,葡萄糖对多糖的积累优于蔗糖和果糖,在30g/L时,总多糖产率达到1034.96mg/L。在一定浓度范围内,氮源种类对多糖的合成影响不太明显,但氮源浓度是主要因素,以10mmol/L最佳。另外,100g/L的马铃薯提取液与100g/L的香蕉提取液均有利于多糖的合成。

保水剂对玉米幼苗生长的影响

文章考察了甘薯淀粉高吸水树脂及科翰98、林果高吸水树脂、速吸林果保水剂和沙土保水剂等5种保水剂处理对玉米种子萌发及其幼苗生长的影响。实验在模拟干旱条件下进行,结果表明玉米种子经保水剂处理后,萌发率得到显著提高,幼苗的叶绿素质量比上升,提高了幼苗自由基清除相关酶的活性及自由基清除剂的含量,有效减轻了玉米幼苗的膜脂过氧化作用,大大改善了干旱胁迫下玉米幼苗的生长状况。