mTOR基因rs2295079和rs2295080位点多态性与川崎病的关联性

目的:检测哺乳动物雷帕霉素蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)基因rs2295079(G>C),rs2295080(C>A)位点多态性与川崎病(Kawasaki disease,KD)易感性及冠状动脉损伤(coronary artery lesion,CAL)的关系。方法:采取病例对照研究方法,选取100例KD患儿(KD组),其中出现CAL者20例(KD-CAL组),未出现CAL者80例(KD-WO组);100例健康儿童作为对照组。检测2个位点的多态性分布。结果:在KD组与对照组及KD-CAL组与KD-WO组中,rs2295079(G>C),rs2295080(C>A)位点的等位基因频率与基因型频率分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论:未发现mTOR基因rs2295079(G>C),rs2295080(C>A)位点的多态性与KD易感性及CAL存在关联性。

沉默SOX4抑制骨肉瘤细胞的生长和转移

目的探讨性别决定区Y框蛋白4(SOX4)对骨肉瘤细胞生长和转移的调控作用。方法采用免疫组化法检测西安市儿童医院血液肿瘤科30例骨肉瘤患者的骨肉瘤组织样本中SOX4的表达水平,并分析SOX4与患者临床参数的关系。通过RT-PCR和Western blot检测人骨肉瘤细胞系Saos-2和人成骨细胞hFOB 1.19中SOX4 mRNA或蛋白表达。将携带SOX4-shRNA(SOX4-shRNA组)或阴性对照shRNA(NC-shRNA组)的pGFP-V-RS病毒载体转染Saos-2,RT-PCR和Western blot检测SOX4、Bax、P53、Bcl-2、MMP-2、MMP-9和Fibronectin 1 mRNA或蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖;AnnexinⅤ和碘化丙啶(PI)双染色法检测细胞凋亡;伤口愈合实验和基质胶侵袭实验评价细胞迁移和侵袭能力。将SOX4-shRNA(SOX4-shRNA组)或NC-shRNA(NC-shRNA组)转染的Saos-2细胞接种到BALB/c裸鼠背部建立异种移植肿瘤模型,考察SOX4在体内对肿瘤生长的影响。结果SOX4在骨肉瘤组织中高表达,与TNM分期和远处转移有关(P<0.05),与年龄、性别和肿瘤大小无明显相关性(P>0.05)。Saos-2细胞中SOX4 mRNA和蛋白表达水平显著高于hFOB 1.19细胞(均P<0.001)。与NC-shRNA组相比,SOX4-shRNA组在培养48 h和72 h时细胞增殖能力显著降低(P=0.004和P=0.002)。与NC-shRNA组相比,SOX4-shRNA组细胞凋亡率明显增加(P<0.001),细胞中Bax和P53的蛋白表达水平显著升高(均P<0.001),而Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P<0.001)。与NC-shRNA组相比,SOX4-shRNA组细胞的伤口面积明显升高(P=0.009),而细胞侵袭数明显降低(P<0.001),并且MMP2、MMP9和Fibronectin 1蛋白表达显著降低(均P<0.001)。与NC-shRNA组相比,SOX4-shRNA组小鼠的肿瘤体积在生长21 d和28 d时显著降低(P=0.012和P<0.001)。结论SOX4在骨肉瘤患者中异常高表达,并且与不良预后有关。抑制SOX4的表达可抑制肿瘤细胞的增殖和转移能力,并诱导细胞凋亡。

Stim1在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平及与顺铂耐药性的关系

目的:探讨Stim1在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平及与顺铂耐药性的关系。方法:采用免疫组织化学染色检测了50例骨肉瘤患者的肿瘤组织中Stim1的表达。通过用高浓度的顺铂处理人骨肉瘤细胞系U-2 OS来建立耐药性骨肉瘤细胞(U-2 OS/DDP细胞)。通过RT-PCR和蛋白质印迹检测细胞中Stim1、ATF4、CHOP和GRP78的表达。通过转染人Stim1-siRNA或过表达Stim1的pCDNA3-HA质粒来下调或上调骨肉瘤细胞中Stim1的表达,并检测了细胞的钙离子内流情况。通过CCK-8法检测细胞增殖,通过Annexin V-FITC/PI双重染色法检测细胞凋亡。结果:Stim1的阳性表达与骨肉瘤患者的TNM分期和远处转移有关,Stim1阳性患者中,74.19%(23例)为TNMⅢ期,87.10%(27例)发生远处转移。而Stim1阴性患者中,26.31%(5例)为TNMⅢ期,26.31%(5例)发生远处转移。顺铂耐药的骨肉瘤U-2 OS/DDP细胞中的Stim1 mRNA和蛋白表达水平显著高于非耐药U-2 OS细胞(P<0.05)。下调Stim1表达明显减少了U-2 OS/DDP细胞中的钙离子内流(P<0.05);下调Stim1表达抑制了细胞的增殖并促进了细胞凋亡(P<0.05)。此外,下调Stim1进一步提高了内质网应激分子标志物ATF4、CHOP和GRP78的表达(P<0.05)。相反,上调Stim1的表达则发挥了相反的作用。结论:Stim1在骨肉瘤患者中高表达并与不良预后有关。Stim1的高表达可增加骨肉瘤细胞的顺铂耐药性。下调Stim1通过抑制钙离子内流并促进内质网应激诱导的细胞凋亡来降低骨肉瘤细胞的顺铂耐药性。

儿童心肌炎112例临床分析

心肌炎(MC)是儿童时期引起心脏损害的常见原因之一。本文回顾性分析112例心肌炎患儿的临床资料,其中男65例,女47例;急性心肌炎90例,暴发性心肌炎22例;暴发性心肌炎组肌酸激酶(CK)、心型肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)等指标较急性心肌炎组增高(P均<0.05);90例急性心肌炎经积极治疗3~4周后均好转出院;22例暴发性心肌炎中13例治愈,8例死亡,1例自动出院。儿童心肌炎的临床表现不典型,需综合临床资料及心肌受损的指标以明确诊断。普通病例预后良好;暴发性心肌炎死亡率较高。

新生儿围生期经胎盘有机磷农药中毒1例

1病例资料患儿男,因“高危出生后口唇发绀25 min”于2016年6月21日入住中南大学湘雅三医院（我院）新生儿科。患儿母亲于2016年6月19日在孕37周时自服“敌敌畏”约20 mL,数分钟后出现呕吐、昏迷及间断抽搐,1 h后送至我院,血清胆碱酯酶活性5%,诊断“重度有机磷农药（OPs）中毒”,立即予戊乙奎谜和氯解磷定,并予导泻和血液灌流等对症治疗,10 h后神志逐步恢复,2 d后自然破水.

mTOR基因rs6540964、rs75398396位点多态性与川崎病的关联性研究

目的 :探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因rs6540964、rs75398396位点多态性与中国汉族儿童川崎病(KD)并冠状动脉损害(CAL)的相关性。方法 :运用PCR扩增产物直接测序法(PCR-SBT)分析100例川崎病患儿和100例健康儿童mTOR基因的rs6540964、rs75398396位点的多态性。结果 :川崎病组mTOR基因rs6540964位点AA、AG、GG基因型分布和A、G等位基因频率与正常对照组比较差异无显著性意义。川崎病组mTOR基因rs75398396位点GG、AG、AA基因型分布和G、A等位基因频率与正常对照组比较差异无显著性意义。川崎病患儿合并CAL组与未合并冠脉损伤(NCAL)组mTOR基因rs6540964位点基因型分布和等位基因频率比较差异无显著性意义。川崎病患儿合并CAL组与NCAL组mTOR基因rs75398396位点基因型分布和等位基因频率比较差异无显著性意义。结论 :尚未发现mTOR基因rs6540964位点及rs75398396位点的多态性与川崎病及其CAL的发生存在关联性。

儿童暴发性心肌炎22例临床分析

目的:总结暴发性心肌炎的临床特征与治疗。方法:对我院1997年6月~2014年8月收治的22例暴发性心肌炎儿童的临床资料进行回顾性分析。结果:22例中男11例,女11例;年龄2天~18岁,平均年龄8.96岁。患儿临床表现不典型,多以心外表现为首发症状,入院时误诊14例(63.6%)。确诊后19例予以大剂量糖皮质激素;11例同时予以大剂量丙种球蛋白(IVIG)等治疗,其中9例痊愈,2例死亡。22例中最后13例治愈,6例死亡,3例放弃治疗。结论:暴发性心肌炎临床缺乏特征性,早期易于误诊。应用大剂量糖皮质激素和IVIG等综合治疗有助于提高抢救成功率。

3例糖原贮积症Ⅱ型患儿的临床特点及GAA基因突变分析

糖原贮积症Ⅱ型(GSDⅡ)是一种主要由酸性α-葡萄糖苷酶(GAA)基因突变引起的常染色体隐性遗传病,主要累及心脏、骨骼肌等脏器。本文报道3例经GAA基因分析确诊的GSDⅡ患儿的临床特点和基因突变结果,1例为婴儿型,年龄为4个月,患儿表现为体重不增,呼吸困难,肌张力低,ALT、CK升高,心脏彩超示肥厚型心肌病。2例为晚发型,年龄分别为8岁、13岁,晚发型患儿均表现为持续肝酶升高,其中1例患儿伴反复呼吸道感染,肺功能示限制性通气障碍;另1例患儿伴肌酶升高明显,而肌电图正常。外周血GAA基因检查结果显示3例患儿中共检测出6种致病突变,其中c.2738C>T、c.568C>T为未见报道的新突变。外周血GAA基因检测是有效的诊断该疾病的方法。